落叶松枯梢病菌检疫鉴定方法

落叶松枯梢病菌检疫鉴定方法

国家标准 GB/T28092一2011 落叶松枯梢病菌检疫鉴定方法 Deteeton.andidentifieationfBoryospheerialarieina(K.Sawada)Y.Z.Shong 2011-12-30发布 2012-06-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/T28092一2011 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口 本标准起草单位;江苏出人境检验检疫局、辽宁出人境检验检 疫局 本标准主要起草人:吴翠萍、李彬、粟寒、高渊、陆军吴晶、刘伟、高振兴、安榆林
GB/T28092一2011 落叶松枯梢病菌检疫鉴定方法 范围 本标准规定了落叶松枯梢病菌BoryosphaerialaricinaK.SawadaY.Z.shong1987的检测和 鉴定方法 本标雅适用于对落叶松苗木,接穗以及带小枝梢的原木等样品携带落叶松枯梢病菌的检测和鉴定 落叶松枯梢病菌基本信息 中文名;落叶松枯梢病菌 学名;BotryosbhaerialaricinaK.Sawada)Y.Z.Shong1987 异名:;Ph.ysalo5oralaricinK.SawadaGuignardialaricima(K.Sawadaw.Yamamoto 8 K.lIto diebackoflarC 病害英文名:shoot tblightoflarch ,twigG 采用Ainsworth(1973)真菌分类系统,病原菌为子囊菌亚门Ascomycotina,腔菌纲L.oculoascomy cetes,格抱腔菌目Pleosporales,葡萄座腔菌科Botryosphaeriaceae,葡萄座腔菌属Botryoshaeria 无性阶段为半知菌亚门Deuteromycotina,腔抱纲coelomycetes,球壳抱目sphaeropsidales,球壳抱 科Sphaeropsidaceae,大茎点霉属Macrobhoma 落叶松枯梢病菌的其他信息参见附录A 方法原理 根据病原菌危害的症状特点(参见附录B)采集样品进行检测,观察病原菌产生的子实体的显微形 态特征,并结合病原菌的地理分布和寄主范围等有关信息进行结果判断 仪器和用具 4.1仪器 体视显微镜、普通光学显微镜(具显微拍摄和测量功能,光照培养箱、高压灭菌器、干热灭菌器冰 箱等 4.2用具 手持放大镜、试剂瓶、纱布、脱脂棉、锻子,剪刀、培养皿、修枝剪、吸管、酒精灯、打孔器(直径5mm)、 瓷盘、解剖刀,酒精灯,解剖针,载玻片,盖玻片,微量移液器,标本盒、,海绵、胶带、标签等 试剂 石蜡,70%,95%酒精,二氧化硅干燥剂
GB/28092一2011 6 检测 样品采集 根据下列症状等进行样品采集:苗木、接穗上的新梢枯死,并且枯死的梢端呈弯曲状;在病组织上有 固着的白色滴状物树脂块;干枯的枝干部为紫褐色或灰褐色;在枯死的枝干、松针上有突出的枯梢病原 菌子实体 原木上如果带有的小枝梢,则应仔细观察小枝梢上有无子实体,若无.则可排除怀疑带有枯 梢病原菌 6.2样品制备 6.2.1子实体的制片 用解剖针挑取样品上的子实体少许,置于载玻片上加盖玻片压碎或由发病部位直接切片制成水玻 片,在解剖镜或显微镜下观察子实体的形态并确认是否成熟 如果成熟,则观察典型形态特征并测量大 小;如果不成熟则需进一步培养 6.2.2不成熟子实体的培养 对子实体不成熟的部位,先用无菌水浸泡2d~3d,然后浸泡在35C和10C的无菌水中进行交替 变温处理,每次5min,重复1次,再浸在无菌水中30min,最后取出置室温条件下保湿培养中7d12d. 诱导产生成熟子实体并制片镜检 鉴定 有性阶段子实体形态特征 子囊座为壳状,瓶状或梨形,黑褐色,单生、2个5个群生或丛生在病枝表皮下,成熟后仅孔口外 露,大小为(170Am500Am)×(130m一300Am) 子囊棍棒状,双壁,无色,顶端圆,下有短柄,平行 排列于子囊腔基部,大小为(115Am149Am)×20m45m) 假侧丝很多,线形,无色,半永久存 在,直径3Am 子囊弛子8个,双行排列,椭圆形至纺锤形,单胞,无色,大小为(22.5m一40pm)× 6.3um~15.5um) 参见附录C 7.2无性阶段子实体形态特征 分生弛子器群生于顶梢残留的叶背和顶梢小枝周围的表皮下,并使表皮突起,近球形或扁球形黑 色,大小为(120Am~249pm)x(1484m~2134m) 分生袍子梗短,不分枝，圆柱形,(5m一7m ×(2.54m一3.2m) 分生抱子椭圆形至纺锤形,单胞,无色,大小为(244mm一30m)×(64m一9m) 常见1一2个油球 参见附录c 性弛子器球形至扁球形,单个或几个丛生于病枝表皮下,大小为(115am一214Am)×(109Am~ 190pm) 性袍子梗细长,无色,2个一3个分隔,大小为(12m一16m)X(3m一5m) 性泡子知 杆状或椭圆状,无色,大小为(3" 一日m)x1m一2m)参见附录c. Mm 结果判定 如有性阶段、无性阶段的形态特征符合第7章鉴定特征的描述,即可判定为落叶松枯梢病菌
GB/T28092一2011 标本和样品保存 发现落叶松枯梢病菌的样品,需制作成标本在室温条件下进行干燥保存,或将样品置于一20C冷 冻保存,保存至少6个月,以备复检、谈判和仲裁 保存期满后进行灭活处理
GB/28092一2011 附 录A 资料性附录 落叶松枯梢病菌其他信息 A.1地理分布 国外;日本、朝鲜、韩国,俄罗斯(远东). 国内:黑龙江、吉林、辽宁,内蒙古,山东、陕西,甘肃、青海、宁夏 A.2寄主 落叶松属(L.ari.rspp.);华北落叶松(L.principisrupprechti),长白落叶松(L.olgensisar.chan gaiensis)、朝鲜落叶松(L.olgensisvar.koreana)、海林落叶松(L.olgensisvar.heilingensis)、日本落叶 松(L.lepolepis)、黄花落叶松L.olgensis)、欧洲落叶松L.deidua)、美国西部落叶松L oceidentali),美加落叶松(L.laricima)等 A.3发病规律 该病从幼苗、幼树到成林的当年新梢都能发病,但幼树发病重 7月上旬开始发病显症状,7月中 下旬发病最明显 一般都先从主梢发病,然后由树冠上部向下蔓延,加重病情 病后新梢渐渐褪色,顶 部弯曲下垂呈勾状,而顶梢与弯曲部分变紫褐色或灰褐色,从弯曲部分逐渐向下脱叶、干枯,茎收缩变 细,仅在顶部残留一簇叶子,枯萎呈紫灰色 次年春天,由侧芽生小枝代替原来主梢,连年发病,为害严 重的,树冠出现扫帚状丛枝,高度生长停止,形成小老树或全株枯死(为害症状参见附录B) 在枝梢受 害部位,多数有松脂溢出,凝成块状 8月末至翌年6月,在枯梢上特别是弯曲部分的枝皮及凹陷处 生 长着梭形小黑点,初理生,至翌年6月突破寄主,形成病原菌子囊座 发病10余天后,在顶梢残留叶上 或弯曲部位可见圆形的散生小照点,形成榈原菌的分子袍子器 有时在病枝上可见圆形照包突起,即性 袍子器
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落叶松枯梢病菌检疫鉴定方法GB/T28092-2011

落叶松是我国北方常见的优良树种之一，但是由于枯梢病菌的侵害，常常会导致落叶松的大量死亡。因此，对于枯梢病菌进行检疫鉴定是非常必要的。

落叶松枯梢病菌

枯梢病菌与落叶松密切相关，可引起落叶松枝条、叶片干枯、死亡。这种病原体随着树木运输和交易等活动的增加而迅速传播，对生态环境造成了严重危害。在中国，以美国枯梢病菌（Sphaeropsis sapinea）为主要种类，所以其检疫鉴定方法非常重要。

检疫鉴定方法

GB/T28092-2011《落叶松枯梢病菌检疫鉴定方法》规定了枯梢病菌的检疫鉴定方法，下面简要介绍：

样品的采集和处理

从有病株或疑似感染地区采集样品，去掉杂质等，保留含病部位，若为活体样品，则需在检疫前进行消毒。然后将样品切成小块，用75%酒精或5%次氯酸钠溶液浸泡消毒，并用蒸馏水洗净，备用。

镜检法

将样品置于玻片上，加一滴蒸馏水，覆盖盖片，然后用显微镜观察是否存在枯梢病菌，可通过形态特征进行初步鉴定。

PCR扩增法

取样品DNA，进行PCR扩增，得到DNA序列，然后比对数据库，确定其种类。

生物学鉴定法

将样品接种在含有适宜营养物质的培养基上，进行生物学鉴定。包括菌丝形态、菌落特征等指标。

结语

枯梢病菌是导致落叶松大量死亡的重要病原体之一，严重威胁了我国北方的森林生态安全。因此，对其进行检疫鉴定显得尤为重要。本文介绍了GB/T28092-2011标准下的三种检测方法，希望能对相关行业提供参考。

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2022/10/27 21:33:24 现行