谷氨酰胺转胺酶活性检测方法

谷氨酰胺转胺酶活性检测方法

国家标准 GB/T34795一2017 谷氨酰胺转胺酶活性检测方法 Determinationoftheaetiityoftransglutaminase 2017-11-01发布 2018-05-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/34795一2017 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准由全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC387)提出并归口 本标准起草单位:深圳市计量质量检测研究院、测试技术研究院、四川省卫生和计划生育监督 执法总队、深圳市职业技术学院 本标准主要起草人:张世伟、赖心田、卢杰、王士峰、周李华、林霖、刘冬、唐栋、叶秀玲、兰全学 潘兰芳、杨国武
GB/34795一2017 谷氨酰胺转胺酶活性检测方法 范围 本标准规定了茂原链轮丝菌(S/repomyces、moburu aensis)和天竺鼠Caviaporcellws)来源的谷氨 酰胺转胺酶活性检测方法 本标准适用于生化试剂、工业产品中谷氨酰胺转胺酶活性的测定 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 谷氨酰胺转胺酶活性单位 seactivity tranSglutaminaS unit 在37CpH6.0时,每分钟可催化N-节氧基-l谷氨酰甘氨酸(CBZ-Gln-Gly,CAS;6610-42-0) 和胫胺形成1.0mol的异胫肪酸盐所需的酶量为1单位,单位为U 原理 谷氨酰胺转胺酶能催化N-节氧基-I谷氨酰甘氨酸和胫胺生成L谷氨酸-y-单异胫肪酸,L-谷氨 酸-y-单异胫肪酸可以通过三氧化铁显色,在525nm波长下具有特征吸收峰 因此可以通过外标法计 算L-谷氨酸-y-单异胫肪酸的生成量测得酶活性 仪器设备及器具 5.1pH计:0.01级 5.2电子天平:感量0.0001g 5.3分光光度计 5.41cm石英比色皿 5.5恒温水浴槽;控温精度士0.5C 5.6离心机 试剂 本标准所使用的试剂均为分析纯,水为符合GB/T6682中规定的二级水
GB/T34795一2017 6.1Iris-HC缓冲液(pH6.0,0.2mol/L 称取12.114g三胫甲基氨基甲烧(Tris),溶解在450mL水中,使用1mol/L盐酸调节pH至6.00 士0.05,转人500mL容量瓶中,定容并摇匀 6.2试剂A 称取1.000迟N-茉氧偻基-I-谷氨酰甘氨酸.0.695旦胫胺盐酸盐(Hydroxylaminehydrochloride) 0.307g还原型谷胱甘肽(GSH),溶解于Tris-HCl缓冲液(pH6.0,0.2nmol/L),使用1mol/几氢氧化钠 调节pH至6.00士0.05,用Tris-HCl缓冲液(pH6.0,0.2mol/L)定容至100mL 6.33mo/L盐酸溶液 将36%一38%盐酸与水按体积比1:3稀释 6.412%三氯乙酸(TCA)溶液 称取12.00g三氧乙酸溶于80mL水中,定容至100mL 6.55%三氧化铁(FeCl)溶液 称取5.00只三氯化铁溶于0.1mol/L HCl中,定容至100mL 6.6试剂B 由6.3,6.4,6.5所述溶液按体积比1:1:1混合,现配现用 6.7L-谷氨酸--单异胫肘酸标准储备液 tamicacidY-mono 称取0.1621g的L-谷氨酸-y-单异胫肪酸(L-Glut ohydroxamate),用10ml的 Tris-HCl缓冲液(pH6.0,0.2mol/L)溶解后,转移至100ml 的容量瓶中,用Tris-HC缓冲液 pH6.0,0.2molL)定容并摇匀 分析步骤 7.1标准曲线的绘制 分别移取L-谷氨酸-y-单异羚肪酸标准储备液0mL,0.2mL0.5mL、l.0ml,2.0ml和4.0mL到 10nmL的容量瓶中,再用Tris-HCl缓冲液定容至刻度,摇匀,L谷氨酸-y-单异羟肪酸的浓度分别是 04mol/mL,0.2mol/mL,0.54mol/mL、1.0mol/mL,2.04mol/mL和4.0mol/mL 取1mL试剂 A与0.4mL不同浓度的L-谷氨酸--单异胫肪酸标准溶液混合.37.0C士0.5C水浴10min.加0.4mL 试剂B终止反应 使用1cm的石英比色皿,以I-谷氨酸-y-单异羚肪酸浓度为04nmol/mL的标准溶液 反应液作空白,在525nm处测定每个稀释液的吸光度 以L-谷氨酸-y-单异羚肪酸浓度为横坐标,以 稀释液的吸光度为纵坐标做标准曲线,以最小二乘法得出线性回归方程 相关系数应在0.9990以上 时方可使用,否则需重做 7.2试验液的制备 称取样品0.lg,精确至0.0001g,用Tris-HCl缓冲液(pH6.0,0.2mol/L)溶解后,转移至合适容 量瓶中并定容,使得最后的溶液中含有0.17U/mL0.23U/mL的酶活力
GB/34795一2017 7.3测定 取1mL试剂A与0.4mL试验液混合,37.0C士0.5水浴10min,加0.4mL试剂B终止反应 另取一只试管加人试验液,于95C100C水浴加热10min后,以5000r/min离心10min 取该上 清液0.4ml,37C水浴10min,加0.4ml试剂B终止反应,作为空白对照 用1cm的石英比色皿,在 525nm 处测样品试验液和空白液的吸光度 样品试验液和空白液的吸光度之差即AA,将AA带人标 准曲线线性回归方程计算试验液中L-谷氨酸-y-单异胫肪酸的浓度c 结果 8.1结果计算 见式(1 c×V×d X= m×10 式中: 谷复肤胶转胶朋话性,单位为鹏话力单位每克(U/e X ml试验液中生成的L-谷氨酸-y单异胫肪酸浓度，单位为微摩尔每毫升 为0.4 (umol/mL),从标准曲线中得出; 为样品溶解液体积,单位为毫升(mL) 为样品稀释倍数; 为样品质量,单位为克(g); m1 为反应时间,单位为分钟(min). 10 计算结果保留三位有效数字 8.2重复性 在重复性条件下获得的两次独立性测定结果差值的绝对值不得超过算术平均数的10%

谷氨酰胺转胺酶活性检测方法GB/T34795-2017

谷氨酰胺转胺酶简介

谷氨酰胺转胺酶（Aspartate Aminotransferase，AST）是一种广泛存在于动植物体内的酶，在生化代谢过程中具有重要的作用。它主要参与氨基酸代谢和葡萄糖代谢，可将谷氨酸和草酰乙酸互相转化，成为天然氨基酸。

谷氨酰胺转胺酶的作用

谷氨酰胺转胺酶在人体中的作用非常重要，它主要参与以下三个方面的代谢过程：

• 参与蛋白质代谢：在肝脏中，大部分蛋白质都被分解为氨基酸和糖类等物质。谷氨酰胺转胺酶参与这一代谢过程，将谷氨酸转化为草酰乙酸，同时相关的酶将草酰乙酸转化为能够进入糖酵解途径的丙酮酸。
• 参与糖类代谢：谷氨酰胺转胺酶也能够参与人体的糖类代谢过程。当血液中的葡萄糖水平较低时，谷氨酰胺转胺酶可通过将谷氨酸转化为草酰乙酸来释放出新的葡萄糖。
• 检测肝功能：谷氨酰胺转胺酶的活性也常用于检测肝功能。肝脏细胞受到损伤时，谷氨酰胺转胺酶会释放到血液中，导致其含量升高。

GB/T34795-2017标准中的活性检测方法

GB/T34795-2017《食品安全国家标准 谷氨酰胺转胺酶活性检测方法》规定了谷氨酰胺转胺酶在食品检测领域中的活性检测方法。

该标准采用双波长测定法，根据谷氨酰胺转胺酶催化草酰乙酸和谷氨酸之间的氨基转移反应产生的谷氨酸和丙酮酸的吸收光谱变化来测定样品中谷氨酰胺转胺酶的活性。

总结总结

谷氨酰胺转胺酶是一种重要的酶，在生化代谢过程中具有广泛的作用。GB/T34795-2017标准规定了谷氨酰胺转胺酶在食品检测领域中的活性检测方法，对保障食品安全具有重要意义。

希望本文能够加深读者对谷氨酰胺转胺酶的认识，同时也能对相关领域的从业人员提供参考与借鉴。

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