GB/T17819-2017
添加剂预混合饲料中维生素B12的测定高效液相色谱法
DeterminationofvitaminB12inadditivepremix—Highperformanceliquidchromatography
- 中国标准分类号（CCS）B46
- 国际标准分类号（ICS）65.120
- 实施日期2018-05-01
- 文件格式PDF
- 文本页数7页
- 文件大小499.47KB
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添加剂预混合饲料中维生素B12的测定高效液相色谱法
国家标准 GB/T17819一2017 代替GB/T178191999 添加剂预混合饲料中维生素B的测定 高效液相色谱法 DeterminationofvitaminB2inadditivepremix- Highperformaneeliquidchromatography 2017-11-01发布 2018-05-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/T17819一2017 添加剂预混合饲料中维生素B2的测定 高效液相色谱法 范围 本标准规定了添加剂预混合饲料中维生素B含量测定的高效液相色谱方法
本标准适用于复合预混合饲料、维生素预混合饲料中维生素Ba的测定
本标准的方法检出限为0.1mg/kg,定量限为0.5mg/kg 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备 原理 试样中维生素B用水提取,经SPE净化富集后,采用高效液相色谱仪分离检测,外标法定量
试剂和溶液 除特殊注明外,本标准所用试剂均为分析纯,色谱用水应满足GB/T6682中一级水的要求
实验 用水应满足GB/T6682中三级水的要求
4.1乙睛:色谱纯
4.2甲醇;色谱纯
4.3氮气(纯度99.9%).
4.4乙酸;优级纯
4.5己烧磺酸钠;色谐级
4.6维生素B标准品;维生素B含量>96.0%
维生素B,标准储备溶液.准确称取0.1g(精确到0.000lg)维生素Ba标准品(4.6),置于100mL 4.7 棕色容量瓶中,加适量的甲醉(4.2)使其浴解,并稀释定容至刻度,摇匀
该标准储备液维生素B;含量 为1mg/ml
-18保存,有效期一年 4.8维生素B标准工作液;准确吸取1mL维生素B标准储备溶液(4.7)于100mL棕色容量瓶中 用水定容稀释至刻度,摇匀
维生素B标准工作液的浓度按下述方法测定和计算 以水为空白溶液,用紫外分光光度计测定维生素B,标准工作液在361nm处的吸光值
维生素 B;标淮工作液的浓度x以微克每毫升(gg/mL)表示,按式(1)计算
GB/T17819一2017 A×l00o0 X三 207 式中 A -维生素B标准工作液在361nm波长处测得的吸光值 0000- -维生素B标准工作液浓度单位换算系数 维生索B标准百分系数(E.=207)
207 也可根据实验需要配置相应浓度的标准工作液
4.9己婉碱酸钠溶液:称取1.1g己婉碱酸钠(4.5)溶于1000mL水中,加人10ml乙酸(4.4),超声 混匀
4.101%磷酸溶液;取1mL磷酸加人1000nmL水中,超声脱气
仪器和设备 5 5.1实验室常用仪器、设备
5.2电子天平;感量0.o01g.感量0.m g
5.3离心机;可达5000r/min(相对离心力为2988g)
5.4超声波水浴 5.5固相萃取装置
5.6高效液相色谱仪;配紫外可调波长检测器(或二极管矩阵检测器》
5.7氮吹装置
5.8紫外分光光度计
5.9C固相萃取小柱;500mg/6mL或相当性能的固相萃取小柱
6 采样和试样制备 按照GB/T14699.1抽取有代表性的饲料样品,用四分达缩减取样
按照GB/T20195制备试样 磨碎,全部通过0.25mm 孔筛,混匀,装人密闭容器中,避光保存备用 分析步骤 7.1提取 7.1.1维生素预混合饲料的提取 称取试样2g一3g(精确到0.0lg),置于0mL离心管中,准确加人水20mL.充分摇动0s再 置于超声水浴中超声提取30min,期间摇动2次
于离心机上5000r/min离心5min,取上清液,如果 样品游液为含量大于1mg/Akg的维生素预混料,则过0.5m微孔逃膜,上Hc渊定
若测得样品 液中维生素B浓度小于24g/ml则需按7.2净化方法处理;若测得样品液中维生素B浓度大于 00g/mL,应根据检测结果，用一定体积的水稀释，使稀释后维生素B
的含量在2"g/ml 00g/ml之间,重新测定
7.1.2复合预混合饲料的提取 称取试样2g3g(精确到0.001g),置于50ml离心管中,准确加人水20ml,充分摇动30s,再 置于超声水浴中超声提取30min,期间摇动2次
于离心机上5000r/min离心5min,取上清液,进行
GB/17819一2017 下一步净化
7.2试样净化 固相萃取小柱分别用5ml甲醉和5ml.水活化准确移取10mL上清液(7.1)过柱,用5mL.水淋 洗,近干后,用5ml甲醉洗脱,收集洗脱液
50C氮气吹至近干,准确加人1ml.水溶解,过0.45Mm 微孔滤膜,上HPLC测定
若测得上机试样溶液中维生素B浓度超出线性范围,应根据检测结果,用 -定体积的水稀释使稀释后维生素B的含量在14g/ml~100g/ml之间,重新测定
7.3测定 7.3.1参考色谱条件 7.3.1.1 氨基柱 色谱柱;氨基柱,长250mm,内径4mm,粒度54m(或相当性能类似的分析柱); 流动相:乙肺+1%磷酸水(25+75); 流速:l.0ml/min; 温度:室温; 检测波长;361nm
7.3.1.2Cg柱 色谱柱:C型柱,长150mm,内径4.6mm,粒度5Am(或相当性能类似的分析柱); 流动相:甲醇+己婉磺酸钠溶液(25+75) 流速:l.0ml/min; 温度:室温; 检测波长;546nm
7.3.2定量测定 按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数,向色谱柱注人相应的维生素B标准工作液(4.8)和 试样溶液,得到色谱峰面积响应值,用外标法定量测定,维生素B标准色谱图参见附录A
结果计算 试样中维生素B的含量,以质量分数X计,数值以毫克每千克(mg/kg)表示,按式(2)计算 P×V×C X 2 P，×m 式中: 试样溶液峰面积值; -稀释体积,单位为毫升(mL); -维生素B标准工作液浓度,单位为微克每毫升(4g/ml); P -维生素B标准工作液峰面积值 试样质量,单位为克(g). m 测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留3位有效数字
GB/T17819一2017 9 重复性 对于维生素B含量小于或等于50mg/kg的添加剂预混合饲料,在重复性条件下获得的两次独立 测定结果与其算术平均值的差值不大于这两个测定值算术平均值的15%
对于维生素B含量大于50mg/kg的添加剂预混合饲料,在重复性条件下获得的两次独立测定结 果与其算术平均值的差值不大于这两个测定值算术平均值的10%
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添加剂预混合饲料中维生素B12的高效液相色谱法测定
维生素B12是一种重要的营养素，对动物的生长、发育和健康都有着重要作用。然而，由于饲料原料中很难含有足够多的维生素B12，因此通常需要在饲料中添加维生素B12来满足动物的需求。
为了保证添加剂预混合饲料中维生素B12的质量和安全性，需要对其进行检测。目前，国内外普遍采用的方法是高效液相色谱法。
高效液相色谱法是一种基于化学分离原理的分析方法，具有分离效率高、准确度高、灵敏度高等优点。同时，该方法还具有操作简便、运行稳定等特点，因此广泛应用于食品、医药等领域。
GB/T17819-2017标准规定了添加剂预混合饲料中维生素B12的检测方法，包括取样、前处理、高效液相色谱分析等步骤。在具体操作过程中，需要注意以下几点：
- 样品取自各处的样品必须充分混匀，以避免数据误差。
- 前处理过程中，要保证试剂和溶液的纯度和质量，以保证测定结果的准确性。
- 在高效液相色谱分析过程中，需要选择合适的色谱柱和检测器，以保证分离效果和灵敏度。
总之，高效液相色谱法是一种精确、可靠的检测添加剂预混合饲料中维生素B12的方法，能够满足GB/T17819-2017标准对于该项指标的要求，为动物的健康提供重要保障。
