国家标准 GB/T28977一2012 菊花滑刃线虫检疫鉴定方法 Detectionandidentificationof Aphelenehoidesrilx.emabosi(Schwartz)Steiner&Buhrer 2012-12-31发布 2013-06-01实施国家质量监督检监检疫总局发布国家标准花管理委员会国家标准
GB/T28977一2012 前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口本标淮起草单位;宁波检验检疫科学技术研究院、广东出人境检验检疫局检验检疫技术中心本标准主要起草人:顾建锋、王江岭、张慧丽、赵立荣、陈先锋、闻伟刚
GB/T28977一2012 菊花滑刃线虫检疫鉴定方法范围本标准规定了菊花滑刃线虫的检疫鉴定方法本标准适用于植物和繁殖材料,介质、土壤中菊花滑刃线虫的检疫和鉴定规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件毛刺线虫属(传毒种类)检疫鉴定方法 GB/T24829 菊花滑刃线虫基本信息学名Abhelenchoidesritzemabosi(schwartz,1911)steiner & Buhrer,1932 英文名chrysanthemumfoliarnematode,chrysanthemumleafnematode,budandleafnematode ofchrysanthemum、foliarnematodeofchrysanthemum或chrysanthemumeelworm 中文名又称菊花叶线虫、菊花芽线虫、菊花叶芽线虫、腋芽滑刃线虫、菊花叶枯线虫或里泽马博斯滑刃线虫属滑刃目Aphelenchida,滑刃科Aphelenchoididae,滑刃属Aphelenchoides 菊花滑刃线虫是植物专性寄生线虫,主要外寄生或内寄生于多种寄主植物的芽、,叶或花也可存活于种子及土壤中,主要通过植物繁殖材料和鲜切花等进行远距离传播相关种类有草莓滑刃线虫A.han rugariaeRitzemaBos)Christie,水稻干尖线虫A.besseyiChristie 和芽滑刃线虫A.blasobhthorusFranklin等菊花滑刃线虫的其他信息参见附录A 方法原理根据菊花滑刃线虫的危害状,在检疫现场肉眼观察,选取变色、畸形的花、叶,芽以及根际介质或土壤,用直接浸袍法或漏斗法等进行线虫分离,用显微镜观察,根据形态特征对种类进行判定雌虫尾尖突和雄虫交合刺形态是重要的种类鉴定依据器材与试剂见GB/T24829 6 症状检查现场检疫时要注意观察植株花、叶、芽等是否有枯死、褐色角斑、矮小、畸形等受害症状(参见附录
GB/T28977一2012 A),以及是否带介质、土壤等重点选取表现上述症状的花、叶、芽等植物组织及根际介质或土壤,如无可疑症状则按要求随机取样取样后立即置密封塑料袋,标记后及时送实验室检测实验室检验线虫分离实验室接到样品后应立即进行线虫分离若不能及时分离,可将样品保存在4C10C冷藏箱中种子,花、叶,芽,茎等可用直接浸泡法或漏斗法分离线虫,介质或土壤适宜用漏斗法或浅盘分离法等分离线虫(参见GB/T24829) 7.2体视显微镜镜检菊花滑刃线虫体长约10004m,放大10倍以上可见虫体细长,在水中不停作“s”形扭动,行动活跃 7.3标本制作若镜检发现线虫,需制作临时玻片或永久玻片(参见GB/T24829) 7.4生物显微镜观察、摄影和测量应针对雌、雄虫主要鉴定特征仔细观察并显微摄影,主要鉴定特征包括雌虫尾尖突形态、后阴子宫囊,尾形、口针、侧线、排泄孔和神经环位置、雄虫交合刺等应在每张图片上加相应标尺,测量并计算 a、b、b',c,e',V等值如样品足够,应测量雌、雄虫各15条以上形态学鉴定 8.1滑刃属线虫形态鉴定特征雌虫;体长0.5mm~1.2mm,热杀死后虫体直或略腹弯;头部高圆,常有明显缢缩,头架骨化弱口针细弱,长约10丝m12Am,不超过20Arm;中食道球发达,瓣门显著;雌虫阴门位于虫体中后部.一般位于体长的60%一75%;单生殖腺,前伸,偶尔有回折;卵母细胞单行或多行排列;后阴子宫囊通常存在,并含有精子;尾圆锥形,有或无尾尖突,尾尖突形态多变雄虫;热杀死后尾端强烈腹弯,整个虫体呈“]”形;交合刺玫瑰刺状、成对、不愈合;基顶和喙通常发达,有时缺;尾乳突通常3对,无交合伞 8.2菊花滑刃线虫测计值测计值见表1 表1菊花滑刃线虫测计值特征菊花滑后阴子宫体宽刃线虫囊长 V或T mm m 4m 雕虫 p.77l.216.519.5l15l4740.0一60.58.l13.o4.5一6.116.023.13.7一5.166.0一75.o
GB/T28977一2012 表1(续特征菊花滑后阴子宫体宽刃线虫 V或T 囊长 mm m m 雄虫 p.630.96.019.2 1.053.0.014.04.3~5.06.030.o2.83.135.0~64.0 注1:L=体长;a=体长/最大体宽;b=体长/虫体前端至食道与肠连接处的距离;6'=体长/虫体前端至食道腺未心蹦的距离c=体长/尾长e'=尾长/肛门处体宽;s/=口针长V=虫体前端至阴门的距离×100/体长;" 泄殖腔口至精巢末端的距离×100/体长注2表内数据综合参考Alen,1952;Vovlas等,2005;Chizhov等,206;Crozaoli等,2008 8. 3 菊花滑刃线虫形态鉴定特征一1.01 雌虫:虫体细长,0.7mm1.2mm;体环明显(宽为0.9m" 4m),侧区为体宽的六分之一至五分之一,侧线4条;头部近半球形,缢缩明显,头架骨化弱;口针细弱,针锥部急剧变尖,基部球小而明显;食道前体部较细,中食道球发达、卵形,瓣门显著,背、腹食道腺开口于中食道球;食道腺长叶状,背覆盖肠,长约4倍体宽;食道与肠交接处位于中食道球后约8m处,神经环位于中食道球后约1.5倍体宽处,排泄孔位于神经环后约0.5~2倍体宽处;单卵巢前伸,卵母细胞多行排列;阴门横裂,阴门唇梢突起;后阴子宫囊发达,长度超过肛阴距的1/2,通常含有精子;尾长圆锥形,末端有2一4个尾尖突,使尾端侧面观呈刷状雄虫较常见,虫体尾部向腹面弯曲超过180°;单精巢前伸,交合刺玫瑰刺形,平滑弯曲,基顶和喙不显著,背边长20.0Am一26.5Am;尾乳突3对,第1对位于泄殖腔附近,第2对位于尾中部,第3对位于近尾端;尾端有2 2一4个尾尖突,形态多变(参见附录B.,附录C.,附录D) 8.4 与近似种的区别菊花滑刃线虫雌虫与属内其他近似种(主要是尾尖突呈星形的种类)的比较参见附录E 除菊花滑刃线虫外,滑刃属线虫中植物寄生线虫主要还有草莓滑刃线虫A.fhrugariae,水稻干尖线虫A.besev和毁芽滑刃线虫A.bastohthorus 菊花滑刃线虫和水稻干尖线虫的区别是前者排泄孔位于神经环后0.5一2倍体宽处,后阴子宫囊长度超过肛阴距的二分之一,而后者排泄孔位于神经环对应处,后阴子宫囊小于肛阴距的三分之菊花滑刃线虫与草莓滑刃线虫、毁芽滑刃线虫的主要区别是雌虫尾尖突;草莓滑刃线虫雌虫末端钝尖,无尾尖突;毁芽滑刃线虫只有1个尾尖突结果判断以雌虫和雄虫的形态学特征为主要鉴定依据菊花滑刃线虫的主要鉴定特征是;侧线4条;雌虫后阴子宫囊长超过肛阴距的二分之一,常充满精子;尾长圆锥形,尾尖突复杂,为2一4个向后伸的尾尖突形成刷状结构雄虫交合刺平滑腹弯,无基顶和喙符合上述特征,可鉴定为菊花滑刃线虫,寄主与地理分布等信息可供参考
GB/T28977一2012 10 记录和标本样品保存若鉴定为菊花滑刃线虫,应将剩余的线虫杀死、固定后制成永久玻片保存;也可用4%甲醛固定后于指形管中长期保存应保存的记录信息包括样品编号,为害症状(包括相关照片,被感染材料的状态和来源、经鉴定的有害生物学名、测计数据、显微照片、标本鉴定人,鉴定时间、制作人,制作时间等信息对含有线虫的剩余样品材料,经登记后妥善保存保存期至少为6个月,期满后视情况作销毁处理
GB/T28977一2012 附录 A 资料性附录菊花滑刃线虫其他信息 A.1生物学特性菊花滑刃线虫是专性寄生线虫,可以在寄主植物叶片组织内寄生,也可以在叶芽,花芽和生长点营外寄生生活主要以成虫在寄主植物的芽腋、生长点、叶片及其残体上越冬次年春天,新叶初发期,当植物表面变得湿润时,线虫可借助水膜移动到寄主茎或叶部,从气孔或伤口人侵当受害叶片掉落地面时,线虫在地面只能完成部分生活史该种线虫营两性生殖,不能进行孤雌生殖雌虫的后阴子宫囊可贮存精子,这些精子可向前移动与发育成熟的卵受精结合,因此受精后的雕虫即使不被再次受精,亦可持续生育6个月交配后的雌成虫在寄主植物叶片上产卵,每条雌成虫可产卵2530粒在17C24C条件下,完成1个世代需 10d14d 菊花滑刃线虫繁殖力强,1年可以完成10代左右只要温湿度适宜,该线虫全年都可以繁殖,在受侵染的一张菊花叶片中线虫数量可高达15000条植物种子也可携带线虫,每14g受侵染的 .高湿有利于病害的发生翠菊种子中可有300多条线虫该病害发生的适宜温度是20C一28C. 该线虫有较强的抗干旱能力,多数以休眼或脱水状态存活于植物组织和植物残体中,受感染的干燥菊花叶片4C存放3年后还能分离到活体线虫 A.2生态学特性 A.2.1地理分布欧洲;英国、德国、匈牙利、克罗地亚、意大利、俄罗斯;北美洲;美国、墨西哥;南美洲;巴西、委内瑞拉;大洋洲:斐济,新西兰、澳大利亚;非洲;南非、毛里求斯;亚洲、日本、印度、伊朗我国曾报道云南等省偶有发现 A.2.2寄主范围菊花滑刃线虫的寄主范围非常广,能寄生观赏植物、蔬菜、小果类植物和杂草等200多种植物,菊花 Dendlrathema morijfolium是其典型寄主,其他重要的寄主有茄科(Solane aceae、、罂粟科(Papaver 等,以及西伯利亚牛舌草(Anchusa sotiliflora、银莲花(Aemone aceae)、草莓(FrugariasPp myoS ).芹菜(Apiwmgraeolen)、紫苑属(Atersp.)秋海粟(Bes goniaspp.,雏菊(Belisspp.、蒲包 spp， ),风铃草(Camaulamedium)、西瓜(Ci/rulluslanatus)、飞燕草(Delhinium 花Calceolaria spPp grandinorum)、大丽花(Dahliainnata),石竹(Dianhuschinensis),金丝桃(Hyericumspp.、莴苣 (Laetucaspp.、番茄(Lycobersiconspp.、紫罗兰(Matthiolaincana、紫花苣(Medcagosatiua 烟草(Nicotianaspp.,菜豆(Phaseolusulgaris),福禄考(Phlorspp.、酸浆属(Physalisspp.,蕨类 Preridobhyta)、北美杜鹃(Rhododendroncanadense、非洲紫罗兰(Saintauliaionantha)、瓜叶菊 (Seneeiocrwentus),大岩桐(Sinningiaspecioa)、绣线菊Spiraeaspp.,马鞭草(Verbenaoficinalis) 百日草(Zinniaeiegans)等 .2.3为害症状 A 菊花滑刃线虫主要为害植物地上部的花、叶,芽在菊花被侵染早期,线虫外寄生在芽和生长点中，
GB/T28977一2012 使花和芽受害,导致其生长受阻、畸形、扭曲、变小或不开花、枯死,并且被取食部位表面有褐色粗糙伤痕线虫取食叶肉细胞,由于受寄主叶脉的限制,叶片在脉间形成特征性的黄褐色角斑或扇形斑,病斑最后变为深褐色、枯死病叶自下而上枯死,枯死叶片下垂不脱落炯叶被侵染时,叶片上形成格状花纹有时线虫可潜伏侵染,植株可携带大量的线虫而没有任何症状(参见图A.1 菊花叶片受害症状百日草叶片受害症状 dD 蕨类叶片受害症状紫花地丁叶片受害状况图A.1菊花滑刃线虫为害寄主植物叶片症状 A.2.4传播途径和扩散方式菊花滑刃线虫能借助水膜作自主运动(每晚能爬行约15cm),爬行到相邻的植株上;能通过风,雨、枝叶接触和农事操作(灌溉,剪枝等)等近距离传播;还能通过种子,苗木、,母株,插条、切花、植物残体以及介质、土壤等远距离扩散
GB/T28977一2012 B 附录资料性附录菊花滑刃线虫线描图 A,B 20m 100H 说明雄虫整体 -雄虫尾部 D,E F.,G,H,I. B -雕虫整体; -雕虫尾部 -雕虫体前部 C 图B.1菊花滑刃线虫线描图(引自Volas等,2005)
GB/T28977一2012 附录 c 资料性附录菊花滑刃线虫光学显微照片 A T6 说明: A H -雌虫整体; -雌虫阴门; B -雄虫整体; -体前部(箭头示神经环); C,D,E,F 雌虫尾 K 侧线雄虫尾部 G,l 注标尺为10m 图c.1菊花滑刃线虫光学显微照片
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GB/T28977一2012 参考文献 [1]刘维志.植物病原线虫学[M].北京:农业出版社,2000322-326. [2]刘维志、植物线虫志[M].北京:农业出版社,2004;603-605. [3]谢辉植物线虫分类学(第二版[M们.北京;高等教育出版社,2005303-304 [4]谢辉.菊花滑刃线虫及其检测和防疫方法[门.植物检疫,2007,21(3);190-192. [5]D.D. waele Foliarnematodes;Aphelenchoides species[M] .CABInternational,2002: 141-151. [6]D.J.Hunt.Aphelenchida,L.ongidoridaeandTrichodoridae,their systematiesandbionomies ternational,1993:63-67 wallingford[M].UK;CABInt [7]F.Shahina.ADiagnosticcompendiumofthegenusAphelenchoidesFischer,1894Nema- tode:Aphelenchidawithsomenewrecordsofthe fromPakistan[].PakistanJournalofNema- egroup y,1996,14(1);1-32. ioogy [8] OEPP/EPP(O.PM7/39Diagnosticsprotocolsforregulatedpests:AhelenchoilesBesseyi BulletinOEPP/EPPOBulletin,2004,34:303-308. [9]M.R.Siddiqi.Apheleehoidesri/semabosi,C.I.H.DeseriptionsofPlantparasiticNematodes [M].UK:CommonwealthAgriculturalBureaux,FarnharmRoyal,1974,Set3,No.32. andhistopatholoegyofthefoliar [10]N.Vovlas,A.Minuto&A.Garibaldi,elal.ldentification nematodeAphelenchoidesricemabosiNematoda:AphelenchoidaeonbasilinltalyJ].Nematology 2005,7(2):301-308. &. [11 N.V.Chizhov,A.O.Chumakova A.S.Subbotin,etal. Morphologicalandmolecular characterizationoffoliarnematodesofthegenusAphelenchoies:A.fragariaeandA rilzemabosi Nematoda:AphelenchoididaefromtheMainBotanicalGardenoftheRussianAcademyofSciences， Moscow[].RussianJournalofNematology,2006,l4(2):179-184

菊花滑刃线虫检疫鉴定方法GB/T28977-2012

菊花是一种常见的观赏植物，在园艺市场上受到广泛关注。然而，菊花生产过程中会遇到很多病虫害问题，其中滑刃线虫是常见且具有破坏性的病虫之一。

为了保障菊花产业的健康发展，我国制定了GB/T28977-2012《菊花滑刃线虫检疫鉴定方法》标准。该标准规定了检测样品的采集、处理、检测方法和结果判定等内容。

样品采集和处理

样品采集需要选择健康的菊花植株，采集根部土壤和根系组织，并立即送检。在采集过程中要注意手套的更换，以免因人为原因造成污染。

采集回来的样品需要进行处理，根据不同的检测方法进行预处理。如使用酸洗法或盐溶法提取线虫，或者使用甲苯嵌片法对显微镜下的线虫进行观察等。

检测方法

GB/T28977-2012标准规定了多种滑刃线虫的检测方法，包括盐溶法、酸洗法、显微镜观察法、PCR扩增法等。其中，盐溶法和酸洗法是常用的传统检测方法，其操作简便，结果可靠。显微镜观察法则是通过显微镜观察样品中是否存在线虫。而PCR扩增法则是一种基于核酸的检测方法，具有高灵敏度和特异性。

结果判定

对于不同的检测方法，结果判定也有所不同。例如盐溶法和酸洗法需要观察显微镜下样品中是否存在线虫，显微镜观察法则需要观察线虫形态特征，而PCR扩增法则需要通过PCR扩增的结果来确定样品是否滑刃线虫阳性。

总之，GB/T28977-2012标准提供了一份规范的菊花滑刃线虫检疫鉴定方法，对于保障菊花产业的健康发展具有重要意义。