水溶性壳聚糖中还原性端基糖的测定分光光度法

水溶性壳聚糖中还原性端基糖的测定分光光度法

国家标准 GB/T40173一2021 水溶性壳聚糖中还原性端基糖的测定 分光光度法 Determinationofredueing-endsugarinwatersolublechitosan- Spectrophotometricmethod 2021-05-21发布 2021-12-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标涯花警理委员会国家标准
GB/40173一2021 前 言 本文件按照GB/T1.1一2020<标准化工作导则第1部分;标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 本文件的发布机构不承担识别专利的责任 本文件由全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC387)提出并归口 本文件起草单位;青岛科技大学、测试技术研究院生物研究所、青岛市计量技术研究院、武汉新 华扬生物股份有限公司、正大投资股份有限公司青岛分公司、青岛蔚蓝生物集团有限公司、深圳市市场 监督管理局许可审查中心 本文件主要起草人:张永勤、吕兴霜、李怀平、李剑,伍发兴,徐丽、王斐、那静、张风国,詹志春、 马丽侠、毕毅奋、周樱、夏春、蒋子敬、许文廷、张菁、邢明霞、王家林、李玉奎
GB/40173一2021 水溶性壳聚糖中还原性端基糖的测定 分光光度法 范围 本文件规定了水溶性壳聚糖中还原性端基糖的分光光度测定方法 本文件适用于水溶性壳聚糖(含量>90%,脱乙酰度>90%)中还原性端基糖的检测 本方法检出限为0.006mmol/g,定量限为0.023mmol/E 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 其中注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 术语和定义 3.1 壳聚糖chitosanm 甲壳素脱乙醋基后得到的衍生物,不溶于水,溶于大多数稀酸,化学名称为9-1,4-2-氨基-2-脱氧-D 聚糖 3.2 脱乙酰度degreeofdeacetylation 壳聚糖分子中脱除乙酰基的糖残基数占壳聚糖分子中总的糖残基数的百分数 3.3 水溶性壳聚糖water-solublechitosanm 可溶于酸性、中性和碱性溶液的低聚合度壳聚糖 原理 壳聚糖分子末端的还原性端基糖在碱性条件下与3-甲基-2-苯并嚷陛酮腺(MBTH)反应生成吓嗦， 酸性条件下过量的MBTH被Fe十氧化成阳离子,再与吓秦反应生成青蓝色化合物,还原端基糖的浓度 在一定范围内与其在590nm处的吸光度呈正比例线性关系 通过测定在590nm处的吸光度值,外标 法定量 试剂与材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯 水为符合GB/T6682规定的三级水 5.13-甲基-2-苯并嚷陛啾酮腺盐酸盐一水合物(MBTH,CH,Ns HClH.O);CAS号:38894-11-0.
GB/T40173一2021 纯度>98% 5.2DL-二硫苏糖醉[DTT，HsCH.CH(OH)CH(OH)CH.SH]:CAs号:3483-12-3,纯度>98% 5.3盐酸氨基葡萄糖标准品(C,HNOHCI):CAS号;66-84-2,纯度>99%,或经国家认证并授予 标准物质证书的标准物质 5.4浓盐酸 5.5氢氧化钠溶液(0.,5mol/L);称取2g氢氧化钠,加水溶解,用水稀释并定容至100mL,混匀 5.6MBTH溶液;称取0.3gMBTH,加水溶解,用水稀释并定容至100ml,混匀,于4C避光贮存,有 效期10天 5.7DTT溶液;称取0.080gDTT,加水溶解,用水稀释并定容至100mL,混匀,于4C避光贮存,有效 期10天 5.8MBTH试剂将MBTH溶液(5.6)和DTT溶液(5.7)等体积混合,即得MBTH试剂 临用新配 硫酸铁铵试剂称取了g硫酸铁锁[NHFe(so.”12H.o]和5总氨基磺酸,加人41.8mL浓盐 5.9 酸,待充分亲解至澄请,用水稀释并定容至1000mL.混匀,于4七避光保存,有效期1个月 5.10盐酸氨基葡萄糖标准溶液(0.1mg/mL).称取0.1g盐酸氨基葡萄糖(精确至0.0001g),加水剂 解,用水稀释并定容至100mL.,混匀,(浓度为1mg/mL);准确吸取上述溶液10mL,用水稀释定容至 100mL,混匀,临用新配 6 仪器设备 分析天平;感量为00l《和0.01" 6.1 6.2恒温振荡水浴锅;温控精度士0.2C 6.3涡旋振荡器 6.4分光光度计;配lcm比色皿 试样溶液的制备 7.1试样制备 准确称取试样约01(以箭确至0.o0o01因加水约0ml..涡旋混匀做其祥解,加水定容至10nml 静置,取上清液作为试样溶液 7.2标准工作溶液的配制 取0.1lmg/ml盐酸氨基葡萄糖标准溶液0ml、lml、3ml,5ml、7ml,9ml,分别用水定容至 /mL、0,05n 10mL,配成浓度为0mg/mL,0.01mg/mL,0.03 mg/mL,0.07n mg/inL.009mg/imL的 mg/ 标准工作溶液 8 测定步骤 8.1标准曲线的制作 分别移取盐酸氨基葡萄糖标准工作溶液500L,各加人500pL0.5mol/几氢氧化钠溶液和500L MBTH试剂于比色管中,混匀,于80C水浴13min,趁热迅速加人1000L硫酸铁铵试剂,混匀,放置 显色1h 以水调节零点,于波长590nm处测定吸光度值 以盐酸氨基葡萄糖的质量浓度为横坐标， 标准工作溶液吸光度值与质量浓度为零的空白管的吸光度的差值为纵坐标绘制标准曲线
GB/40173一2021 8.2试样溶液的测定 移取试样溶液500L,加人500L0.5mol/L氢氧化钠溶液和500LMBTH试剂于试管中,混 匀,于80C水浴13min,趁热迅速加人1000"lL硫酸铁铵试剂,混匀,放置显色1h 以水调节零点,于 波长590nm处测定吸光度值 将待测样吸光度值与质量浓度为零的空白管的吸光度值差值代人标准 曲线,计算试样中还原端基糖的含量 结果计算与表示 9.1结果计算 试样中还原端基糖含量按式(1)计算 A一A-c ×1000 k×m×M 式中: 试样中还原端基糖的含量,单位为毫摩尔每克(mmol/g); AE 待测样的吸光度值; A8 空白管的吸光度值; c 标准曲线的截距; -标准曲线的斜率,单位为毫升每毫克(mL/mg); 水溶性壳聚糖的质量浓度,单位为毫克每毫升(nm /mmL); mn ng M 盐酸氨基葡萄糖的分子质量,215,63g/mol 9.2结果表示 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字 10精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%

水溶性壳聚糖中还原性端基糖的测定分光光度法GB/T40173-2021

一、背景介绍

水溶性壳聚糖是一种重要的天然高分子物质，在制药、食品、化妆品等领域得到广泛应用。其中，还原性端基糖是水溶性壳聚糖中的一个重要组成部分，对其生物活性和功能具有重要影响。因此，准确测定水溶性壳聚糖中还原性端基糖的含量，对于保证产品质量和开展科学研究至关重要。

二、测定方法原理

GB/T40173-2021标准中规定的测定方法是基于分光光度法，利用还原性端基糖与费林试剂在酸性条件下发生反应，生成一种具有最大吸收峰波长为620nm的可见光化合物。通过比色法测定溶液中该化合物的吸光度值，即可计算出样品中还原性端基糖的含量。

三、操作流程

1. 取适量样品加入一定体积的水，并将其完全溶解；

2. 取适量的费林试剂并加入到上述样品溶液中，使其达到酸性条件；

3. 摇匀后在室温下放置15分钟，待化学反应完成；

4. 用比色皿接收反应溶液，并使用分光光度计测定在620nm处的吸光度值；

5. 将上述吸光度值带入计算公式中，计算出样品中还原性端基糖的含量。

四、注意事项

1. 操作过程中需要保证样品、试剂和仪器的洁净和干燥，避免杂质干扰和误差；

2. 所有溶液的配制需要准确计量，避免浓度偏差导致结果不准确；

3. 操作过程中需要使用防护手套、口罩等个人防护用品，以避免对人体造成伤害；

4. 分光光度计需要进行定期校验和维护，以保证测量精度。

五、应用领域

GB/T40173-2021标准规定的测定方法适用于水溶性壳聚糖中还原性端基糖的含量测定，可广泛应用于药品、食品、化妆品等领域。六、总结

水溶性壳聚糖中还原性端基糖的测定分光光度法GB/T40173-2021是一种简便、快速、准确的测定方法。本文详细介绍了该方法的原理、操作流程、注意事项和应用领域，对于专业人士开展相关研究和实验具有参考价值。

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