粮油检验酶改性磷脂中1-和2-溶血磷脂酰胆碱的测定高效液相色谱法

粮油检验酶改性磷脂中1-和2-溶血磷脂酰胆碱的测定高效液相色谱法

国家标准 GB/T22506一2008 粮油检验酶改性磷脂中1-和 2-溶血磷脂酰胆碱的测定 高效液相色谱法 nspeetionofgrainandoils一Determinationof1and2-aeyl !ysophusphatidyleholineinenymatieallymodifedphospholipids- Higherformanceliquidchromatography 2008-11-04发布 2009-01-20实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T22506一2008 前 言 本标准的附录A为资料性附录 本标准由国家粮食局提出 本标准由全国粮油标准化技术委员会归口 本标准起草单位:江南大学 本标准主要起草人:王兴国,金青哲、单良,刘元法、宋志华、潘秋琴
GB/T22506一2008 粮油检验酶改性磷脂中1-和 2-溶血磷脂酰胆碱的测定 高效液相色谱法 范围 本标准规定了用高效液相色谱法测定酶改性磷脂中1-溶血磷脂酰胆碱(1-aelylysophosphatidyl eholine;1-LPC)和2溶血磷脂酰胆碱(2-aelylysophosphatidyleholine;2-LPC)的原理,试剂、仪器设 备、样品准备、操作步骤、结果表示及精密度和准确度 本标准适用以大豆磷脂、蛋黄磷脂、菜籽磷脂为原料制备的溶血磷脂酰胆碱的测定 本标准的检出限为0.l4g 规范性引用文件 下列标准中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008,.ISO3696;l987,MOD) 原理 酶改性磷脂产品中的1-和2-溶血磷脂酰胆碱与磷脂酰胆碱(PC)等其他成分用高效液相色谱分离 采用示差折光检测器检测,外标法定量 试剂 以下所用的试剂,除特殊注明外,均为分析纯试剂;水为符合GB/T6682规定的一级水 4.195%乙醇 4.2草酸(H.c.O2H.O) 4.3草酸溶液(0.02moL/L):准确称取1.261g草酸(4.2),加水溶解并稀释至500ml 4.4磷脂标准品';磷脂酰胆碱(PC),1-棕榈酰-溶血磷脂酰胆碱(1-LPC),2-棕榈酰-溶血磷脂酰胆碱 (2-LPC). 仪器设备 5.1高效液相色谱仪;配折光检测器 5.2高速离心机:10000r/min 5.3纤维膜;0.45mm 超声波清洗仪:180W 5.5天平;分度值0.0001g 1 标准品可使用Sigma公司的产品 给出Sigma公司仅为方便用户使用本标准,并无其他商业行为,其他凡是能 够达到要求的标准品,均可以选择使用
GB/T22506一2008 6 样品准备 称取50mg~ 100mg酶改性磷脂样品(m),用95%乙醉溶解稀释至25mlL,用高速离心机(5.2)离 ,取上清液用0.45Am纤维膜(5.3)过滤,现配现用 操作步骤 色谱条件 色谱柱:氨基柱,250mm×4.6mm,粒径5m,或分离效果相当的色谱柱 流动相;95%乙醇(4.1);草酸溶液(4.3)=92;8(体积比),通过0.45m纤维膜(5.3),并经过超 声波(5.4)脱气处理 流浊;lml/min 柱温;25C 进样量:10AL 7.2标准曲线 分别精确称取适量预先经五氧化二磷干燥两天的磷脂酰胆碱、1-溶血磷脂酰胆碱、2-溶血磷脂酰胆 碱标准品(4.4),用95%乙醇(4.1)溶解、稀释,配置一系列浓度的标准溶液,标准溶液中各磷脂组分的 浓度在0.05mnmoL/L2.0mmoL/范围内,现配现用 用微量进样器准确注人10L现配的各浓度标准溶液于高效液相色谱仪(S.1)中记录峰面积,以 峰面积对进样量绘制标准曲线 标准品的色谱图参见附录A 注配制好的标准溶液应在12h内完成测定 色谱测定 用微量进样器准确注人10L现配的样品液(6)于高效液相色谱仪(5.1)中,按照(7.1)规定的色谱 条件进行色谱分析,记录峰面积 样品液中待测组分浓度较高时应进行适当稀释,保证其响应值均在仪 器检测的线性范围内 根据保留时间定性,外标法定量,得到样品中1-溶血磷脂酰胆碱和2-溶血磷脂 酰胆碱的摩尔浓度(e) 注:配制好的样品液应在12h内完成测定 结果表示 样品中1-或2-溶血磷脂酰胆碱的含量按式(1)计算 c×M.xV×0. P m 式中: 样品中1或2溶血磷脂酷胆碱的含量,以质量分数计,% 由外标法测得的样品中1和2溶血磷脂酷胆碱的浓度,单位为毫摩尔每升(mmolL); 1上或2溶血朦脂酰胆碱摩尔质量的平均值,单位为克每摩尔(g/mo) M 样品最终定容体积,单位为毫升(mL); 样品质量,单位为毫克(me. 精密度和准确度 测定值的相对标准偏差小于5% 不同浓度水平条件下,方法的回收率为96.7%~103.5%
GB/T22506?2008 ?A ?? ?(PC)??(LPC)???? 0,035 0.300- 0.025 0.020 0.015 0.010- 0.005- 0.000 -0.005- 15 ?/min ?A.1?(PC)??(LPC)????