GB/T27577-2011
化妆品中维生素B5(泛酸)及维生素原B5(D-泛醇)的测定高效液相色谱紫外检测法和高效液相色谱串联质谱法
DeterminationofvitaminB5(pantothenicacid)andprovitaminB5(D-fantothenol)incosmeticsbyHPLC/UVandHPLCMS/MS
- 中国标准分类号（CCS）Y42
- 国际标准分类号（ICS）71.100.70
- 实施日期2012-03-01
- 文件格式PDF
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化妆品中维生素B5(泛酸)及维生素原B5(D-泛醇)的测定高效液相色谱紫外检测法和高效液相色谱串联质谱法
国家标准 GB/T27577一2011 化妆品中维生素B(泛酸)及维生素原B D泛醇)的测定高效液相色谱紫外 检测法和高效液相色谱串联质谱法 DeterminationofitaminBspantothenicacidandprovitaminB(D-fantothenol incosmetics一HPLC/UVandHPLCNMS/NIS 2011-12-05发布 2012-03-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/T27577一2011 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会(SAC/TC257)归口
本标准起草单位;大连市产品质量监督检验所国家日化产品质量监督检验中心)、上海市日用化学 工业研究所<国家香料香精化妆品质量监督检验中心),大连标准检测技术研究中心 本标准主要起草人:毛希琴、胡侠、潘炜、郑顺利、李鹏、李琼
GB/T27577一2011 化妆品中维生素B.(泛酸)及维生素原B D泛醇)的测定高效液相色谱紫外 检测法和高效液相色谱串联质谱法 范围 本标准规定了化妆品中维生素B(泛酸)及维生素原B(D泛醇)测定的高效液相色谱紫外检测法 和高效液相色谱串联质谱法两种方法
本标准适用于化妆品中维生素B,(泛酸)及维生素原B.(D泛醇)的定量测定,高效液相色谱紫外检 g/g
高效液相色谱串联质谱法对泛酸、,D泛 测法对泛般.D记腺的检出限为30g/ec定量眼为10o, 醉的检出限为30ng/g;定量限为100ng/g 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的
凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件
凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GBy/T6379.1测量方法与结果的雅确度(正确度与精密度第1部分;总则与定义 GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度第2部分;确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T6682 原理 在水和与水不互溶的有机溶剂如三氯甲炕或异辛炕等)形成的双液相体系中,维生素B.泛酸及 其盐类(如泛酸钠及泛酸钙)和维生素原B(D泛醇)均分布于水相,化妆品中油溶性成分易溶于有机 相,而化妆品中的表面活性剂则富集于油水界面处
利用双液相体系可将维生素B，和维生素原B与 化妆品中油溶性成分及表面活性剂初步分离,亚铁氢化钾-醋酸锌共沉淀剂去除提取液中的大分子基 质
在酸性条件下将泛酸和D泛醉富集于固相萃取c,固定相上,脱除其他水溶性干扰物后,用40%甲 醇水溶液洗脱,用反相高效液相色谱分离,紫外检测器或串联四级杆质谱检测,标准曲线外标法定量
试剂和材料 除非另有说明,所用水为GB/T6682中规定的一级水
4.1标准物质英文名称,CAs号、分子式、分子结构式、相对分子质量,纯度见表1
4.2甲醇;色谱纯
4.3甲醇;分析纯
甲酸;分析纯
4.4 4.5 甲酸色谱纯
GB/27577一2011 表1标准物质英文名称,CAs号、分子式、分子结构式、相对分子质量、纯度 化合物 相对分子 CAs号 纯度 英文名称 分子式 分子结构式 名称 质量 OH 泛酸 79-83-4 CHNO. 219,23 pantothenicacid HO 泛酸钠 odiumpantothenate 867-81-2 C,HeNNaO 241.22 HO >99% 泛酸钙caleiumpantothenate 137-08-6 ICHCaN,O 476.53 OH D泛醉 c,H,No Dpanthenol 81-13-O0 205.25 HHG 4.6三氯甲炕;分析纯
4.7乙酸丁酯;分析纯
4.8异辛炕;分析纯
0.2mol/L甲酸;移取3.8mL甲酸(4.4),用水稀释定容至500mL 4.100.1mol/L甲酸;移取1.9ml甲酸(4.4),用水稀释定容至500ml
4.11醋酸锌溶液;称取21.9gCH,OZn2H.0(分析纯),用0.2mol/1甲酸(4.9)溶解并定容至 100mL
4.12亚铁氮化钾溶液;称取10.6gK,Fe(CN)
3H.O(分析纯),用水溶解并定容至100mL
4.13乙酸丁酯-三氯甲烧混合溶剂;乙酸丁酯(4.7);三氯甲炕(4.6)体积比(1十1).
4.1440%甲醇水溶液;甲醇(4.3):燕水体积比(2十3)
C固相萃取小柱;200mg/3ml.,使用前,依次用3ml甲醇(4.3),3ml蒸僧水进行活化
4.15 -次性针式样品过滤器;0.2um. 尼龙膜
4.16 标准储备溶液;分别准确称取标准物质泛酸1.0g(或1.1只泛酸钠或者泛酸钙折合为泛酸 4.17 )g)和D泛醉1 1.0 .0g以上质量均精确至0.1mg),用蒸水溶解定容至25ml,配置成浓度为 条件下保存
40 /ml的标准储备液于4 mg 4.18系列标准溶液A;首先将泛酸和D泛醉标准储备液(4.17)等体积混合配置成泛酸和D泛醇浓度 L的溶液，然后用蒸溜水稀释配置成泛酸和泛醉浓度均分别为1g/mL10g/mL 均为20 mg/mml 50 g/ml、1000 "g/ml,1001 g/ml.200 4g/ml,400 4g/ml800 g/ml的系列标准混合溶液于 一6条件下保存(适用于高效液相色谱紫外检测法 4.19系列标准溶液B;用蒸僧水稀释泛酸和D泛醇浓度均为1004g/ml的标准溶液(4.18),配置成 泛酸和D泛醇浓度均分别为14g/L、104g/L50g/L100g/L200g/L、400g/L,8004g/1和 1000g/L的系列标准溶液于4C6C条件下保存(适用于高效液相色谱串联质谱法).
GB/T27577一2011 仪器和设备 5.1高效液相色谱仪紫外检测器(高效液相色谱紫外检测法) 5.2高效液相色谱仪串联四级杆质谱(EsI源)(高效液相色谱串联质谱法). 5.3分析天平,感量0.1 g,0.01mg
mg 5.4氮吹仪
5.5漩涡混合器 5.6超声波清洗器 5.7离心机转速不小于5000r/min,离心试管容量15nL 5 8 移液枪或移液器
试样制备 化妆水、乳液、中性及弱油性膏霜等水易分散的化妆品样品的制备 o 称取0.2只样品(精确至0.01g)于15ml具塞塑料离心管中,50C条件下氮吹,尽量除去样品中的 水分
向离心管中加人3.6 ml.0.lmol/L甲酸(4.10)及200AL.醋酸锌溶液(4.11),涡旋混合使样品 均匀分散,然后向溶液中准确添加200AL亚铁氰化钾溶液(4.12),震荡摇匀,向离心管中加人3mL 领甲烧(L.,戳能混合2mm.然后于5o0/mm离心了mn一0mmr 1mL0.1mol/I甲酸(4.10)淋洗柱床后,在 准确移取2mL上层游液过C,固相翠取小柱(4.15), 小柱出口处放置2mL小试剂瓶,准确添加1mL40%甲醇水溶液(4.14)淋洗柱床,收集流出溶液,涡旋 混合,待测
6.2油性膏霜油剂类化妆品等水不易分散的化妆品样品的制备 称取0.2g样品(精确至0.01g)于15ml.具塞塑料离心管中,先向离心管中加人2ml三叙甲烧 (4.6),涡旋混合至样品均匀分散后,再向离心管中准确加人3.6ml.0.1nmol/L甲酸(4.10)及200AL 醋酸锌溶液(4.11),涡旋混合2min后,继续向离心管中准确加人200L亚铁氢化钾溶液(4.12),涡旋 混合后,于5000r/min离心5min一20min. 余下步骤与6.1相同
唇膏、唇彩发蜡等蜡基化妆品样品的制备 称取0.2g样品精确至0.01g)于15mL具塞塑料离心管中,向离心管中加人2mL异辛婉 4.8),涡能,若样品不能够完全分散,需将离心管置于80C水浴中5mn.背样品完全融化后,向离心 管中准确加人3.日mlL.0.1mol儿甲酸(4.10)(80C水浴预热)及200L醋酸锌溶液(4.11),涡旋 1nmin后,将离心管重新置于80C水浴平衡5min,取出再涡旋1nmin
待冷却后,向溶液中准确添加 200L亚铁氢化钾溶液(4.12)及2mL三氯甲婉(4.6),震荡摇匀,必要时于5000r/min离心5min~ 20nmin
若样品能够完全分散,则无需水浴加热,直接向离心管中准确加人3.6ml.0.lmol/1甲酸 4.10)(80C水浴预热)及200L醋酸锌溶液(4.l1),涡旋2nmin,然后向溶液中准确添加200aL亚铁 氮化钾溶液(4.12),涡旋混合
必要时于5000r/min离心5min20min 余下步骤与6.1相同
6 指甲油样品的制备 称取0.2g样品(精确至0.01g)于15m具塞塑料离心管中,向离心管中加人2ml乙酸丁酯-三
GB/27577一2011 氧甲烧混合溶剂(4.13),涡旋混合至样品完全溶解并均匀分散,再向离心管中准确加人3.6ml 0.1mol/L甲酸(4.10)及200L醋酸锌溶液(4.11),涡旋混合2min后,再向溶液中准确添加200L min20 亚铁氮化钾溶液(4.12),涡旋混合
必要时于5000r/min离心5 mina 余下步骤与6.1相同
分析步骤 7.1高效液相色谱紫外检测法 7.1.1液相色谱分析参考条件 以下为液相色谱参考条件 色谱桂;BomRP(或相当者),L.87 a 丛m,3rmm×100mm; b) 柱温;室温; 流动相A;2%甲醇水溶液(含0.05%甲酸);流动相B;40%甲醇水溶液(含0.05%甲酸); c) d流速;0,3mL/nmin; 检测波长;200nm:; e) 进样量:5aL fD g)液相色谱分离条件见表2.
表2液相色谱分离条件 时间 流浊 流动相A 流动相B % % mL/min min 100 0,3 15 0.3 100 15.1 00 0.3 20 0.3 00 20.1 0,3 100 0 30 0.3 100 注1:若上述液相色谱条件下遇到干扰,可改用2%甲醇水溶液(含0.05%乙酸)为A相重新进行测试
B相相 应改为40%甲醉水溶液(舍0.05%乙酸),相应流动相切换时间也需根据情况进行调整
注2:柱的内径和长度及色谱填料粒径可根据色谱分离情况自由选择
注3:泛酸和D泛醇的最大吸收均在波长195nm附近,为尽量避免流动相紫外吸收的干扰,确定检测波长为 200nm. 7.1.2定性分析 将在相同的液相色谱条件下获得的样品溶液的液相色谱分离谱图与标准物质的液相色谱分离谱图 进行比较,若样品谱图中存在保留时间与某标准物质的保留时间一致的色谱峰,并且其扣除背景后的紫 外吸收图谱与该标准物质的紫外吸收图谱一致,则可确认样品中存在该物质
甲酸为流动相酸性改性 剂及乙酸为流动相酸性改性剂的标准物质的液相色谱分离谱图分别参见附录A中的图A.1及图A.2, 标准物质紫外吸收光谱谱图参见附录A中的图A.3,实际样品液相色谱分离谱图(甲酸为流动相酸性 改性剂)参见附录B中的图B.1
GB/T27577一2011 7.1.3定量测定 移取系列标准溶液A(4.18),注人高效液相色谱仪中进行测定,以色谱峰的峰面积对目标化合物的 浓度制作标准曲线
样品溶液中维生素B,.(以泛酸计)与维生素原B.(D泛醇)的含量,用标准曲线外标 法确定
化妆品样品中维生素B.(以泛酸计)与维生素原B.(D泛醇)的含量则按式(1)进行计算
c×V X=" ×10" (1 n 式中: X -样品中目标物的含量,单位为毫克每克(mg/g); -从标准曲线中计算出的样品溶液中目标物的质量浓度,单位为微克每毫升(4g/mL) -按稀释倍数折算的被测样液总体积,单位为毫升(mL); -称取样品的质量,单位为克(g). 计算结果表示到小数点后一位 7.1.4精密度 本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的,重复性和再现性的值 以95%的可信度来计算
乳液类.沐浴液类化妆品中泛酸和D泛醉测定的重复性标准差以及再现性标准差的值参见附录c 中的表c.1,要求在重复性和再现性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值,不超过根据附录c中 的表c.1确定的重复性标准差和再现性标准差 对其他类化妆品中泛酸和D泛醇测定,要求在重复性和再现性条件下获得的两次独立测试结果的 绝对差值,不超过将两次测试结果的算术平均值带人乳液类与沐浴液类化妆品的重复性标准差方程和 再现性标准差方程所获得的最大值
7.2高效液相色谱串联质谱法 7.2.1色谱分离参考条件 以下为色谱分离参考条件 色谱柱;BonusRP(或相当者),1.8m,3mm×100mm; a b 柱温;室温; e)流动相:20%甲醇水溶液(含0.1%甲酸); 流速:0.2mL/min; d) 进样量:2AL e 注;柱的内径和长度及色谱填料粒径可根据色谱分离情况自由选择
7.2.2质谱参考条件 以下为质谱参考条件: a)电离方式;电喷雾电离,正离子模式,ESI(十): 雾化气:氮气,241kPa(35Psi)); D 干燥气;氮气,流速10L/nmin,温度;350C; c d碰撞气:氮气; 毛细管电压:3500V; 检测方式;多反应监测(MIRMI); g其他质谱条件见表3
GB/27577一2011 表3泛酸和泛醉质谱分析参考参数 项 目 泛 D泛醇 酸 母离子 220.2 206.1 醉裂电压 90 100 90.1(lo 定量子离子碰撞电压 76.1(10) 定性子离子1碰撞电压 202.16) 188.0(8) 定性子离子2(碰撞电压》 184.0(8) 170.1(10) 7.2.3定性分析 在同一色谐/质谱条件下进行标准溶液和样品溶液的测定,如果样品游液中检出的色谐峰的保留时 间与某标准物质色谱峰的保留时间一致,所选择的三对子离子的质荷比也一致,而且样品定性离子的相 对丰度与浓度相当标准工作溶液的定性离子的相对丰度相比较,相对偏差不超过表4规定的范围,则可 判定样品中存在该物质
标准物质总离子流质谐图和提取离子(定量)质谱图见附录A中的图A.4 表4定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差 以%表示 相对离子丰度 >50 >20一50 >10一20 10 允许的相对偏差 十20 士25 士50 士30 定量测定 7.2.4 移取系列标准溶液B(4.19),注人高效液相色谱串联质谱仪中进行测定,以色谱峰的峰面积对目标 化合物的浓度制作标准曲线
样品溶液中维生素B,(以泛酸计)与维生素原B,(D泛醇)的含量,用标准 曲线外标法确定
化妆品样品中维生素B(以泛酸计)与维生素原B(D泛醇)的含量则按式(2)进行计 算(如果所副样晶济液中证股或D泛刚的浓度大f】w/6,应对得渊样品游被进行适当的稻释后重新 进行测定). x=xY ×10" n 式中: -样品中目标物的含量,单位为微克每克(4g/g); 从标准曲线中计算出的样品溶液中目标物的质量浓度,单位为微克每升(4g/L); -按稀释倍数折算的被测样液总体积,单位为毫升(mL). -称取样品的质量,单位为克(g). n 计算结果表示到小数点后一位
7.2.5精密度 本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的,重复性和再现性的值 以95%的可信度来计算
指甲油类化妆品、唇膏类化妆品中泛酸和D泛醇测定的重复性标准差以及再现性标准差的值参见 附录C中的表C.1,要求在重复性和再现性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值,不超过根据附
GB/T27577一2011 录C中的表C.1确定的重复性标准差和再现性标准差
对其他类化妆品中泛酸和D泛醇测定,要求在重复性和再现性条件下获得的两次独立测试结果的 绝对差值,不超过将两次测试结果的算术平均值带人指甲油类与唇膏类化妆品的重复性标准差方程和 再现性标准差方程所获得的最大值
GB/27577一2011 附 录A 资料性附录 标准物质液相色谱分离谱图,紫外吸收光谱谱图总离子流质谱图和提取离子(定量)质谱图 标准物质液相色谱分离谱图、紫外吸收光谱谱图、总离子流质谱图和提取离子(定量)质谱图见 图A.1图A.4
D泛醉 1/min 6 12 图A.1标准物质液相色谱分离谱图(甲酸为流动相酸性改性剂 D-泛醉 泛酸 1/minm 如站 图A.2标准物质液相色谱分离谱图乙酸为流动相酸性改性剂 -D-泛醉 泛酸 入/nm 19o 240 20 340 39o 图A.3标准物质紫外吸收光谱谱图
GB/T27577一2011 +TIc(总离子流质谱圈) D-泛游 小MRM(206.I>76.1) MRM(220.2>90.) 泛酸 7
"man 图A.4标准物质总离子流质谱图和提取离子(定量)质谱图
GB/27577一2011 附 录 B 资料性附录 实际样品液相色谱分离谱图 实际样品液相色谱分离谱图见图B.1
D泛醉 泛酸 0 12 14 I6 1/min 图B.1实际样品液相色谱分离谱图(甲酸为流动相酸性改性剂 10o
GB/T27577一2011 附 录 c 资料性附录 不同基质化妆品中泛酸与D泛醇测定的重复性标准差和再现性标准差 不同基质化妆品中泛酸与D泛醇测定的重复性标准差和再现性标准差见表C.1
表C.1不同基质化妆品中泛酸与D泛醇测定的重复性标准差和再现性标准差 泛 酸 D泛醇 样品 采用方法 含量范 重复性标淮差 再现性标准差 重复性标淮差 再现性标准差 名称 (s, SR S, S =0.08232m+sk=0.1288m+ S =0,09856m十sk=0.12768m 沐浴液 0.0126 0.0168 0.01512 0.02436 液相色谱紫外 0.1mg/g 检测法 10mg/g =0.06328m+sR=0.09716m+ S =0,06748m十S=0.10108m十 乳液 0.00672 0.0042 0.0l68 0.02156 0.08904m+SR=0.14252m+S,=0.10388m+SR=0.1302m+ 孵膏 0.0182 0.0504 0.00672 0.02828 液相色谱串联 0.l4g/g 质谱法 04g/g -0.07112m+ S=0.1386m十 =0,08176m" S=0.1456m+ 指甲油 0.00952 0.01344 0.01428 0.02996
化妆品中维生素B5的测定方法
维生素B5是一种水溶性维生素，也被称为泛酸或D-泛醇。它在化妆品中广泛应用，可促进皮肤修复和保湿。由于其重要性，确定维生素B5在化妆品中的含量是至关重要的。
高效液相色谱紫外检测法
高效液相色谱紫外检测法是一种常用的维生素B5测定方法。该方法使用反相高效液相色谱柱进行分离，并利用紫外光谱检测器进行检测。在最佳条件下，波长设置为220 nm，可以实现对维生素B5的快速测定。
该方法的优点是简单易行，所需设备和试剂成本低，同时还具有高灵敏度和准确性。因此，它被广泛用于化妆品中维生素B5含量的测定。
高效液相色谱串联质谱法
高效液相色谱串联质谱法是一种更加精准的维生素B5测定方法。在该方法中，样品经过前处理后，使用柱分离技术进行分离，然后通过串联质谱检测器进行检测。
该方法的优点是检测结果更加精准可靠，并且可以同时测定多个目标物质，如维生素B5及其衍生物。但由于仪器设备和试剂成本较高，因此需要更多的实验室资源。
结论
综上所述，根据不同的实验室条件和需要，可以选择高效液相色谱紫外检测法或高效液相色谱串联质谱法进行化妆品中维生素B5(泛酸)及其衍生物(D-泛醇)的测定。这些方法都具有高灵敏度和准确性，可以有效地保证化妆品的质量和安全性。
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