蜂蜜中大环内酯类药物残留量测定液相色谱-质谱/质谱法

蜂蜜中大环内酯类药物残留量测定液相色谱-质谱/质谱法

国家标准 GB/T23408一2009 蜂蜜中大环内酯类药物残留量测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determinationofmacrolidesresiduesinhoney- LC-MS/MSmethod 2009-03-28发布 2009-07-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T23408一2009 前 言 本标准的附录A、附录B和附录C为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口 本标准起草单位;江苏出人境检验检疫局 本标准主要起草人:吴斌、徐锦忠、陈惠兰、刘艳、黄娟、魏云计、蒋原、陶宏锦
GB/T23408一2009 蜂蜜中大环内酯类药物残留量测定 液相色谱-质谱/质谱法 范围 本标准规定了蜂蜜中大环内酯类药物残留量液相色谱-质谱/质谱测定方法 本标准适用于蜂蜜中罗红霉素、替米考星、泰乐菌素、北里霉素、,交沙霉素、竹桃霉素、螺旋霉素-I、 红霉素残留量的测定 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008,ISo3696;1987,MOD) 方法提要 试样用碱性溶液提取,经固相萃取柱净化,洗脱液浓缩定容后,用液相色谱-质谱/质谱仪测定,外标 法定量 试剂和材料 除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水 4.1甲醇;色谱纯 4.2碳酸钠 4.3碳酸氢钠 4.4甲醇-水(2十8,体积比);量取20mL甲醇(4.1)与80mL水混合 4.5甲醇-水(4十6,体积比);量取40ml甲醇醉(4.1)与60mL水混合 4.6替米考星(Tlmicosin,CAs号;108050-54-0)、螺旋霉素-I(Spiramycin-I,CAs号8025-81-8)、 竹镜霉素(oieandomyein.cAs号707t1).红霉素(Erythromyein.cAs号4078),罗红霉素 (Rosithromycin.cAs号;8014831).泰乐菌素(Tyloim.cAs号l405-545)北里霉素(Kitasanmy 1ycin.CAs号:l6846-24-5)标准物;纯度>92% ein,CAS号8059-95-8)和交沙霉素osam 大环内酯类药物标准储备浴液l.0mg/ml 准确称取(精确至0.lmg)适量的大环内酯类药物 标准物质(4.6),用甲醉(4.1)配成1.O mmg/ml，的标准储备液 储备液贮存在4C冰箱中,可使 用2个月 4.8空白样品提取液;用不含药物残留的样品,按照7.1制备空白样品溶液 大环内酯类药物标准工作溶液;用空白样品提取液分别配成大环内酯类药物浓度为5ng/ml. 10 /ml、201 ng/ml.50" /ml100ng/ml200ng/ml的标准工作溶液,现用现配 ng ng 4.100.1mol/I碳酸钠-碳酸氢钠(pH9.3)缓冲溶液;称取5.3g碳酸钠(4.2)和4.2只碳酸氢钠(4.3 溶于800mL水中,用稀氢氧化钠或稀盐酸调节pH为9.3,加水稀释至10o0mL ,3 ml 使用前分别用3ml甲醇和5ml. 4.11聚苯乙烯此咯烧酮填料固相萃取柱或相当者:60mg, 水预处理,保持柱体湿润
GB/T23408一2009 4.12滤膜:0.45Am,水相 仪器 5.1液相色谱-质谱仪(串联四极杆);配有电喷雾离子源 5.2分析天平;感量分别为0.lmg和0.01 g 自动浓缩仪或相当者 55 3 5.4液体混匀器 5.5真空泵;真空度大于或等于80kPa. 5.6离心管50ml,具塞 刻度离心管;l0ml 试样的制备与保存 6 试样的制备 对无结晶的实验室样品,将其搅拌均匀 对有结晶的样品,在密闭情况下,置于不超过60C的水浴 中温热,振荡,待样品全部融化后搅匀,冷却至室温 分出0.5kg作为试样 制备好的试样置于样品瓶 中,密封,并标明标记 在制样的操作过程中,应防止样品污染或发生残留物含量的变化 6.2试样的保存 将试样于常温状态下保存 测定步骤 7.1提取 称取5g试样(精确到0.01g) 置于50ml具塞离心管中,加人15ml.0.lmol/L 碳酸钠-碳酸氢 钠缓冲溶液(4.10),于液体混匀器上快速混合1min,使试样完全溶解 将溶液以1ml/min左右的流 速通过固相萃取柱(4.ll),待溶液完全流出后,用5mL.水洗离心管并过柱,然后再用5ml 甲醇-水 (4.4)洗柱,弃去全部淋出液 在65kPa的负压下,减压抽干10nmin,最后用5ml 甲醇(4.1)洗脱,收 集洗脱液于10m刻度离心管(5.7)中,于50C用氮气吹干仪吹干,用甲醇-水(4.5)定容至1.0mL,过 0.45 5Am的滤膜(4.12)到进样瓶中,供液相色谱-质谱仪测定 测定 7.2.1液相色谱条件 色谱柱.Cn,5Am,l50mmX2.1mm(内径)或相当者 a) D) 流动相:0.1%甲酸十甲醇,梯度参见附录A c)流速;0.25mL/min; 柱温;室温 d e)进样量;25Al 7.2.2质谱条件 串联四级杆质谱条件参见附录B 7.2.3液相色谱-质谱测定 大环内酯类药物标准工作溶液(4.9)在液相色谱-质谱设定条件下分别进样,以样品峰面积为纵坐 标,工作溶液浓度(ng/mL)为横坐标,绘制6点标准工作曲线,用标准工作曲线对样品进行定量,样品溶 液中大环内酯类药物的响应值均应在仪器测定的线性范围内 在上述色谱条件下,大环内酯类药物参 考保留时间如表1所示 大环内酯类药物标准物质色谱图参见附录C
GB/T23408一2009 表1八种大环内酯类药物参考保留时间 药物名称 保留时间 /min 螺旋霉素-I 7.23 替米考星 8.24 8,53 竹桃霉素 泰乐菌素 9.09 北里霉素 9.36 红霉素 9.55 0.13 交沙霉素 罗红霉素 l0.52 7.2.4定性测定 进行样品测定时,如果检出的质量色谱峰保留时间与标准样品一致,并且在扣除背景后的样品谱图 中,各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比,最大允许相对偏差不超 过表2中规定的范围,则可判断样品中存在对应的被测物 表2定性确证时相对离子丰度的最大允许相对偏差 相对离子丰度 >50% >20%50% >10%一20% <10% 允许的相对偏差 士20% 士25% 士30% 士50% 7 平行试验 按以上(7.17.2)步骤,对同一试样进行平行试验测定 7.4空白试验 除不称取试样外,均按上述(7.1一7.2)步骤进行 结果计算 结果按式(1)计算 ×V G二Co X mn 式中; X -试样中被测组分残留量,单位为微克每千克(4g/kg); mL); 由标准曲线而得的样液中药物的含量,单位为纳克每毫升(ng/ cG 由标准曲线而得的空白试验中药物的含量,单位为纳克每毫升(ng/mL); Co 样品溶液定容体积,单位为毫升(mL); 样品溶液所代表试样的质量,单位为克(g). N 测定低限和回收率 测定低限 本标准测定低限,罗红霉素,替米考星、奉乐菌素.北里霉素、交沙霉素为0.2g/kg,竹桃霉素、螺 旋霉素-I为0.54g/kg,红霉素为0.lg/kg 9 回收率 大环内酯类药物回收率数据见表3
GB/T23408?2009 3?? ?Χ/% ? ?/4g/kg 0.2" 72.5~100.5 0.5 75.495.4 ? 2.0 77.291.8 0.5 84.4?101.4 ù-l 2.0 84.8~100.6 5.0 83.8~104.9 0,5 89,2106,2 ù 2.0 85.1101.2 5.0 81.1106.0 0.1 92.0~105.0 0.5 94.2~107.6 ù 2.0 79.095.1 0.2 97.0110.o ?ù 0.5 86,698.2 2.0 85.3~101.7 0.2 80,597.7 0.5 77.2~89.1 ?? 2.0 96.6~104.4 82.098.o 0,2 ù 0.5 75.696.8 2.0 81.3101.9 0.2" 91.5~1l0.5 0.5 76.6100.8 ?ù 2.0 85.2~l10.2
GB/T23408一2009 附录A 资料性附录 液相色谱-质谱/质谱法与高效液相色谱法梯度洗脱条件 表A.1液相色谱梯度洗脱程序 时间/min 流速/mL/min 甲醇/% 0.1%甲酸/% 0.25 20 80 0.25 3.00 60 40 4.00 0.25 60 40 0.25 8.00 90 10 11.00 0.25 90 10 0.25 11.10 20 80 13.00 0.25 20 80
GB/T23408一2009 B 附 录 资料性附录 液相色谱-质谱/质谱法仪器参数与监测离子 表B.1质谱参数 离子模式 ESI，正离子 源温度 350C 气 气帘" 氮气,0.060MPa 辅助气 氮气,5,0L/h 碰撞气 饭气a2L5 mTor 4500V 喷雾电压 数据采集参数 扫描速度0,05s 表B.2八种大环内酯的定性离子对、定量离子对及碰撞气能量 定量离子对(m/2) 碰撞气能量/八V 名称 定性离子对(m/z 869.5/174 43 替米考星 869,5/174 37 869,5/696.3 843.5/174 20 螺旋霉素-l 843.5/174 843.5/540.l 12 688.4/158 32 竹桃霉素 688.4/158 1 688.4/544 734.3/158 32 734.3/158 红霉素 734.3/576 837.5/158 33 罗红霉素 837.5/158 19 837.5/679.l 916.5/174 35 泰乐菌素 916.5/174 29 916.5/772.2 772.3/174 30 北里霉素 772.3/174 772.3/108 35 828.4/174 32 828,4/174 交沙霉素 828.4/645.2 22
GB/T23408一2009 c 附 录 资料性附录 大环内酯类药物标准物质 选择离子流色谱图 保留时间:7.23 100 50 蟋旋霉素 保留时间:8.24 100 50 替米考星 保留时间:8.53 100 0 竹桃霉素 保图时间，9.09 100 50 奉乐菌素 保图时间， 9.36 100 50 北里霉素 保留时间9.55 100 50 红霉素 保阳间 10.13 00 交沙霉素 保留时间:10.52 100 罗红霉素 异 T TTTTTTTTTT 10 12 tmin 图C.1大环内酯类药物标准物质选择离子流色谱图