GB/T40348-2021
植物源产品中辣椒素类物质的测定液相色谱-质谱/质谱法
Determinationofcapsaicinoidinplantderivedproducts—Liquidchromatography-tandemmassspectrometry
- 中国标准分类号（CCS）A40
- 国际标准分类号（ICS）07.080
- 实施日期2022-03-01
- 文件格式PDF
- 文本页数10页
- 文件大小763.03KB
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植物源产品中辣椒素类物质的测定液相色谱-质谱/质谱法
国家标准 GB/T40348一2021 植物源产品中辣椒素类物质的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determinationofcapsaieinoidinplantderivedlproduets Liquidchromatography-tandemassspeetrometry 2021-08-20发布 2022-03-01实施 家市场监督管理总局 国 发布 国家标准花管委员会国家标准
GB/40348一2021 前 言 本文件按照GB/T1.1一2020<标准化工作导则第1部分;标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草
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GB/T40348一2021 植物源产品中辣椒素类物质的测定 液相色谱-质谱/质谱法 范围 本文件规定了植物源产品中辣椒素类物质含量的液相色谱-质谱/质谱测定方法
本文件适用于辣椒及其制品中N-壬酸香草酰胺、辣椒素和二氢辣椒素含量的测定
规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款
其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件
3.1 辣椒素类物质capsaicinoidl 在辣椒果实中产生辣味的N-香草基酰胺类生物碱物质的统称
注:其中辣椒素、二氢辣椒素两种物质的含量约占辣椒素类物质总量的90%,是影响辣度最主要的成分 [来源:GB/T212662007,3.3,有修改 原理 试样用甲醇超声提取,提取液经过滤后进样,反相色谱柱分离,液相色谱-质谱/质谱仪测定,采用外 标法定量
试剂或材料 5.1试剂 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水
5.1.1无水硫酸钠(Na,SO. 5.1.2甲酸(CHOOH);色谱纯
5.1.3甲醉(CH.,OH);色谱纯
5.2标准品 5.2.1N-壬酸香草酰胺标准品:纯度>98%;分子式:C;HNO.;CAs号:2444-46-4
5.2.2辣椒素标准品:纯度>99%;分子式:CIHnNO.;CAs号:404-86-4
GB/T40348一202 5.2.3 二氧辣椒素标准品;纯度>98%;分子式:CHNO;CAs号;19408-84-5
5.3标准溶液 5.3.1单一标准储备液:分别准确称取N-壬酸香草酰胺、辣椒素、二氢辣椒素标准品适量(精确至 0.1mg),用甲醉溶解并配制成质量浓度均为100mg/L的辣椒素类物质单一标准储备液,于4C下避 光保存备用,有效期为2个月
5.3.2混合标准溶液I;分别准确移取适量各辣椒素类物质单一标准储备液,用甲醇稀释配制成N-壬 酸香草酰胺质量浓度为0.100mg/L,辣椒索和二氢辣椒素质量浓度均为1.00mg/1.的混合标准溶 液I,现配现用
5.3.3混合标准溶液I;分别准确移取适量各淖椒素类物质单一标准储备液,用甲醇稀释配制成N-壬 酸香草酰胺质量浓度为0.100mg/L,辣椒素和二氢辣椒素质量浓度均为10.0mg/L
的混合标准溶 液I,现配现用
5.3.4低浓度混合标准工作溶液;分别准确移取适量混合标准溶液I,用甲醉稀释配制成N-壬酸香草 ,.10.0 酰胺质量浓度为1.50 ng/m、3.00 ng/mL、5.00ng/mL ng/nl15.,0ng/ml.20.0ng/ml. 30.0 ng/mL,辣椒素和二氢辣椒素质量浓度均为15.0 ng/mlL30.0" ng/mL、.50.0ng/mL100ng/mL 150 ng/ml,200ng/ml.300ng/ml的低浓度混合标准工作溶液,现配现用
5.3.5高浓度混合标准工作溶液;分别准确移取适量混合标准溶液l,用甲醇稀释配制成N-壬酸香草 ng/mL、 ng/ml,5.00ng/ml、10.0ng/ml、15.0ng/mL、20.0" 酰胶质量浓度为1.50ng/mL、3.00 0.0ng/mL,辣椒素和二氢辣椒素质量浓度均为150ng/mL、300ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、 1500ng/ml2000ng/ml3000ng/mL的高浓度混合标准工作溶液,现配现用
5.4材料 0.22Am尼龙滤膜
仪器设备 6.1液相色谱-质谱/质谱仪;配电喷雾离子源(Es源). 6.2分析天平;感量0.01mg和0.0001g
6.3离心机:转速不低于8000g
6.4超声波发生器:功率250w,工作频率40kHz,温度可调20笔80C
6.5涡旋混匀器 6.6组织捣碎机 6.7电动粉碎机
样品 7.1鲜辣椒、辣椒酱及半固态辣椒制品 取鲜辣椒(辣椒酱或半固态辣椒制品)约1kg,用组织捣碎机制成匀浆,混匀,制备好的试样均分成 两份,装人洁净的盛样容器内,密封并标识,现制现用
7.2干辣椒、辣椒粉及固态辣椒制品 取干辣椒(辣椒粉或固态辣椒制品)约250g,用电动粉碎机粉碎过425m(40目)筛,制备好的试 样均分成两份,装人洁净的盛样容器内,密封并标识,于0C4C保存
GB/40348一2021 7.3辣椒油等油状样品 取辣椒油等油状样品约250g,用组织捣碎机均质,制备好的试样均分成两份,装人洁净的盛样容器 内,密封并标识,现制现用
试验步骤 8.1试样处理 8.1.1鲜辣椒、辣椒酱及半固态辣椒制品 称取试样10g(精确至0.001g)于50ml具塞离心管中,加人3.0g无水硫酸钠和30mL甲醇,涡 旋混匀,于60C水浴下超声提取15min,然后在8000g下离心5min,将上清液转移至100ml容量 残渣用甲醇重复提取两次,每次30mL,合并三次提取液,用甲醇定容,摇匀,准确移取1.0mL至 瓶中
10mL容量瓶中,用甲醇稀释定容,摇匀,过0.22m尼龙滤膜,待测
8.1.2 干辣椒、辣椒粉、固态辣椒制品及辣椒油等油状样品 称取试样2g(精确至0.001g)于50mL具塞离心管中,加人30mL甲醇,涡旋混匀,以后同8.1.1 ,待测”操作
“于60C水浴下超声提取15min,, 8.2测定 8.2.1液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下 色谱柱:C色谱柱,2.1mm×100mm,粒径1.8m或性能相当者 a D 流动相;A为0.1%甲酸溶液,B为甲醇,梯度洗脱程序参见表1; 流量:0.2mL/min; c d)柱温;40C; 进样量:24L 表1流动相梯度洗脱程序 时间/min 流动相A体积分数/% 流动相B体积分数/% 45 55 45 55 40 60 30 70 13 18 20 80 23 99 28 99 45 28.l 55 40 45 55
GB/T40348一2021 8.2.2质谱参考条件 质谱参考条件如下: a) 离子源;电喷雾离子源(EsI源); b) 扫描方式:正离子模式; 其他质谱参考条件参见附录A
c 8.2.3定性测定 在相同实验条件下进行样品测定时,如果样品中待测物的色谱峰保留时间和标准工作溶液中对应 峰的保留时间一致(相对误差在士2.5%以内),且样品谐图中待测物监测离子的相对丰度和浓度相当的 标准品的相对丰度一致,允许偏差不超过表2规定的范围,则可判断样品中存在对应的待测物
表2定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 >2050 >1020 1o 相对离子丰度/% 50 允许的相对偏差/% 士20 士25 士30 士50 8.2.4定量测定 在相同实验条件下,依据样品中各辣椒素类物质的含量选择合适质量浓度范围的标准工作溶液由 低到高浓度依次进样分析,以待测物的定量离子峰面积为纵坐标,溶液质量浓度为横坐标绘制标准工作 曲线.,用标准工作曲线对样品进行定量,应使样品亲液中各待测物的质量浓度在标准工作曲线质量浓度 范围内,超过标准工作曲线质量浓度上限的样品应稀释后进样分析
在8.2.1和8.2.2条件下,各辣椒 索类物质的参考保留时间参见附录A中表A.1,总离子流图及多反应监测图分别参见附录B中图B.1 和图B.2一图B.4
8.3平行试验 按8.1和8.2的规定对同一试样进行两次平行测定 试验数据处理 试样中待测物质含量按照式(1)计算 p×V×1 w= m1×1000 式中 试样中待测物质的含量,单位为毫克每千克mg/kg) w 由标准工作曲线得到的待测物质质量浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL); 试样定容体积,单位为毫升mL); 试样溶液稀释倍数; 试样称样量,单位为克(g); mm 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字
10精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%
GB/40348?2021 11 ?N-,???????μ3 3???? λ??? ? , ?潷潷 ?? ?? ?? ?? ??? ??? 0.127 N- ?? 0.0635 0.318 0.635 0.,0611 0.305 0.122 0.611 ? 0,061 0.305 0,122 0.611
GB/T40348一2021 附 录 A 资料性) 质谱参数参考条件 质谱参考条件如下 扫描方式;正离子模式 a b) 检测方式:多反应监测(MRM); 干燥气温度:350C; c 雾化气压力:207kPa(30psi); d 干燥气流量;9L/min e fD 毛细管电压;4000V; 定性离子对定量离子对、碰撞能量、源内碎裂电压参见表A.1
日 表A.1三种辣椒素类物质的参考保留时间、监测离子对、源内碎裂电压和碰撞能量 定量离子对 定性离子对 源内碎裂电压/N 保留时间/min 碰撞能量/V 化合物名称 m/ m/:) 294.2/137.1; N-壬酸香草酰胺 13.42 294.2/137.1 85 15;45 294.2/122.0 306.1/137.l; 辣椒素 90 13,46 306.1l/137.1 15:50 06.1/122.2 308,2/137.l; 17.14 308.2/137.1 1550 二氢辣椒素 90 308.2/122.2
GB/40348一2021 附录 B 资料性) 三种辣椒素类物质的IC-Ms/NS总离子流图和多反应监测图 三种辣椒素类物质的ILC-MS/MS总离子流图见图B.1
B.1 ×10 1.4 1.2 0.8 0.6 0.4 0.2 l 12 13 15 16 10 14 1718192021222324 t/mim 标引序号说明: -N-壬酸香草酰胺 -辣椒素 二氢辣椒素
图B.1三种辣椒素的总离子流图 B.2三种辣椒素类物质的IC-Ms/MS多反应监测图见图B.2图B.4
13.46min 17.14min 13,42min ×10 X10 ×10 G 2 12.5 13 13.5 12.5 13 13,5 14 16.5 7 17.5 18 14 l/min /min t/min 图B.3辣椒素的IRN图 图B.2N-王酸香草酷胺的 图B.4二氢辣椒素的RMI图 MRM图
GB/T40348一2021 参 考文献 [1]GB/T21266一2017辣椒及辣椒制品中辣椒素类物质测定及辣度表示方法
植物源产品中辣椒素类物质的测定液相色谱-质谱/质谱法GB/T40348-2021解读
辣椒素是存在于多种辣椒植物中的一类生物活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种药理作用。但是，在植物源产品中，如果含量过高会对人体健康造成危害。因此，对植物源产品中辣椒素类物质的测定显得尤为重要。 GB/T40348-2021标准规定了液相色谱-质谱/质谱法（LC-MS/MS）测定植物源产品中辣椒素类物质含量的方法。具体来说，该标准要求以下几点： 1.样品制备 样品应按照一定比例加入内标（如鱼脂酸乙酯），并经过液液萃取或固相萃取等方式富集目标化合物。 2.仪器条件 液相色谱-质谱/质谱法是一种高灵敏度和高选择性的分析方法，能够在复杂基质中对目标物质进行快速、准确的测定。具体仪器条件包括离子源、碰撞池、毛细管电泳柱等参数设定。 3.定量方法 GB/T40348-2021标准规定了采用外标法进行测定，内标物质的添加可提高测定的准确性和稳定性。另外，还需根据实际样品基质情况进行修正。 4.质量控制 为保证测定结果的准确性和可靠性，GB/T40348-2021标准要求在样品制备、分析过程中设置质量控制程序，并记录相关数据和信息。 总的来说，GB/T40348-2021标准明确了植物源产品中辣椒素类物质的测定方法，为食品安全保障提供了技术支撑和保障。希望本文能够对您有所帮助。
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