饲料中叶黄素的测定高效液相色谱法

饲料中叶黄素的测定高效液相色谱法

国家标准 GB/T23187一2008 饲料中叶黄素的测定高效液相色谱法 Determinationofluteininfeeds一 Highperforaneeliquidchromatography 2008-12-31发布 2009-05-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T23187一2008 前 言 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口 本标准起草单位华中农业大学、广州汇标检测技术中心、广州立达尔生物科技有限公司,佛山市南 海区维德生物技术有限公司 本标准主要起草人:齐德生、于炎湖、陈红、陶正国、高俊勤、门金媚、辜垂鹏、黄楷彬、孙玉国、 张妮娅
GB/T23187一2008 饲料中叶黄素的测定高效液相色谱法 范围 本标准规定了高效液相色谱法测定饲料中叶黄素的方法 本标准适用于单一饲料、添加剂预混合饲料、浓缩饲料及配合饲料中叶黄素的测定 方法的定量限 为0.5mg/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008,IsO3696:1987,MOD 深样(GB/T1699.1” GB/T14699.1饲料 -2005,ISO6497:2002,IDT GB/T20195动物饲料试样的制备(GB/T201952006,1so6498;1998,IDT) 原理 试样中叶黄素经碱液皂化及有机溶剂提取后,取上清液过滤,注人高效液相色谱仪进行分离,用紫 外检测器检测,外标法计算叶黄素的含量 试剂和材料 除特殊说明外,所用试剂均为分析纯试剂,用水符合GB/T6682中一级水的规定 正已炕 42丙酮 4.3无水乙醉 4.4甲苯 4.5甲醉 异丙醉 46 47氢氧化钾 4.8无水硫酸钠 提取剂;正已炕-丙酮-无水乙醇-甲苯(34十23十20十23)混合液 氢氧化钾甲醉溶液(400g/L);40g氢氧化钾溶于甲醇中,冷却后用甲醇稀释至100ml " 硫酸钠溶液(100g/I);10g无水硫酸钠溶于100ml水中 4.12叶黄素标准储备液;准确称取叶黄素标准品(含量大于99,.0%)2mg(精确至0.lmg),先加人少 量流动相超声溶解,用流动相定容至100ml棕色容量瓶,作标准储备液,4C避光保存,保存期3天 4.13叶黄素标准工作液;取叶黄素标准储备液(4.12)用流动相逐级稀释成0.54g/ml、1.0g/mL、 2.0 mL、5.04g/mL、10.0 ml.20.04g/ml系列标准工作液 4g/" 0wg'" 仪器 5.1恒温水浴锅 5 2 分析天平;感量0.0001g" 高效液相色谱仪配UV-VIS检测器
GB/T23187一2008 4 旋转蒸发仪 5 5.5分液漏斗;250ml 5.6分析实验室常用玻璃仪器 试样的制备 按GB/T14699.1采集有代表性的样品,按GB/T20195进行样品制备 粉碎过0.45mm孔筛,混 合均匀,装人密闭容器中,低温保存备用 分析步骤 试样溶液的制备 警告整个制备过程应避光操作！ 称取试料1只一5g(m),精确到0.0001g,置于100mL棕色容量瓶中 加人30ml提取剂(4.9). 塞紧,旋转振摇1min 加人2ml.40%氢氧化钾甲醉液(4.10)于容量瓶中,旋转振摇1min,将容量瓶 接上空气冷凝装置或塞紧瓶塞,置于50C60C水浴中加热20 于暗处放置1h,加人20ml正 mln 已(4.1),旋转振摇1min,加人10%硫酸钠溶液(4.11)50mL,转移到250mL分液漏斗(5.5)中,猛 烈振摇1min,于暗处放置1h,取出上层溶液;水相分别加人20mL.正己炕(4.1)提取两次,合并上层 液,于旋转蒸发仪中50C60C水浴浓缩至干,根据样品中叶黄素含量高低,残余物加正己烧(4.1 0ml~I00mL.(Y),充分溶解后经0.45,4m逃膜过滤,滤液备用 取20儿遮液在高效液相色谱仪 上测定叶黄素组分的峰面积,根据标准工作曲线(7.2.2)计算滤液中叶黄素的浓度(c) 7.2测定 7.2.1色谱条件 色谱柱;硅胶柱(5.0xm,250mm×4.6nmm) 流动相:正己烧-乙酸乙酯-异丙醇(73十27+1.5)混合液 流浊;1.5ml/min 柱温;室温 进样量:20AL 检测器:紫外检测器,使用波长446n nm 7.2.2标准工作曲线的绘制 各取20nL叶黄素标准工作液上机进行高效液相色谐分析 以浓度(c)为横坐标,以峰面积(A)为 纵坐标,做标准工作曲线 结果计算 饲料中叶黄素含量X,以质量分数[毫克每千克(mg/kg)]表示,按式(1)计算 ×V Go X 式中: -由标准工作曲线查得的试样滤液中叶黄素的浓度,单位为微克每毫升(4g/mL); Co -加人正己婉的体积(7.1),单位为毫升(mL) 称样量,单位为克(g) m1 测定结果用平行测定后的算术平均值表示,结果表示到0.1mg/kg 精密度 对同一样品同时或快速连续地进行两次测定,所得结果的相对偏差;叶黄素含量小于或等于 50mg/kg时,不得大于15%;含量大于50mg/kg时,不得大于10%