动物源食品中阿维菌素类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法

动物源食品中阿维菌素类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法

国家标准 GB/T21320一2007 动物源食品中阿维菌素类药物残留量 的测定液相色谱-串联质谱法 Determinationofavermeetinsresiduesinfoodstufsofanimalorigin一 LC-MS/MS 2007-10-29发布 2008-04-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T21320一2007 前 言 本标准的附录A为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口 本标准起草单位:农业大学、检验检疫科学研究院 本标准主要起草人:沈建忠、丁双阳、李晓薇、夏曦、张素霞、江海洋、程林丽、曹兴元、彭涛、国伟
GB/T21320一2007 动物源食品中阿维菌素类药物残留量 的测定液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了动物源食品中阿维菌素类药物残留量的液相色谱-串联质谱检测法 本标准适用于牛肝脏和牛肌肉中埃普利诺菌素、阿维菌素,多拉菌素和伊维菌素残留量的测定 本标准的方法检测限;埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素均为1.54g/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 ISO3696:l1987) G;B/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一1992, ,neg 原理 用乙睛提取试样中的4种阿维菌素类药物,经C固相萃取柱和C 固相萃取柱净化后,用液相色 谱-串联质谱法测定,外标法定量 试剂和材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水 4.1乙睛;色谱纯 4.2三乙胺 4.3甲酸;色谱纯 4.4埃普利诺菌素标准品;纯度>98% 4.5阿维菌素标准品;纯度>98% 4.6多拉菌素标准品;纯度>94.3% 4.7伊维菌素标准品;纯度>98% 4.8C固相萃取柱;500mg,3ml 4.9 C 固相萃取柱:500mg,l0ml 4. 10样品稀释液;水十三乙胺(30十0.045,体积比). 4 .11C固相萃取柱洗涤液:乙晴十水十三乙胺(40十60十0.l,体积比) 4.12 C 固相萃取柱洗涤液:乙睛十水十三乙胺(30+70+0.1,体积比) 4.13埃普利诺菌素、阿维菌素,多拉菌素和伊维菌素标准储备液;l00g/ml 分别准确称取0.010g 埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素标准品(4.44.7)于四个100mL容量瓶,用乙晴溶解 稀释至刻度 一20C保存六个月 4.14混合标准储备液;l4g/ml 取四种标准储备液(4.13)各1.0ml于100ml容量瓶中,用乙晴 稀释至刻度,4C保存三个月 4.15标准工作液;分别量取适量上述混合标准储备液(4.14),用乙晴稀释成浓度为1,5、10,20,50 100和200 ng/mL的系列标准工作液
GB/T21320一2007 仪器 ionozition,ESI 5.1液相色谱-串联四级杆质谱仪;配有电喷雾电离源(eleetrayspray 5.2离心机 5.3振荡器 5.4涡动仪 5.5氮吹仪 5.6组织匀浆机 试样制备与保存 取新鲜或解冻的动物组织,剪碎,l0000r/min匀浆1min -20C下保存 分析步骤 提取 称取试样2.万尽(精确到0.B).于50ml离心管中,加恳nl乙腊,涡动0. mim.200r/min离 残滋用恳ml乙脑重复提取一次.合并两次上请液 加30mL样品稀释液(L.I0. 心2min,取上清液 涡动混合均匀,为样品提取液,备用 7.2净化 取C固相萃取柱,依次用5mL乙睛5mLCa固相萃取柱洗涤液(4.11)活化 将备用的样品抛 取液(7.1)过柱 用20mLC固相萃取柱洗涤液(4.ll)淋洗,抽干;再用3mL正已烧淋洗,抽干 2ml乙睛洗脱,收集 加人4ml样品稀释液(4.10),混合均匀,备用 取C 固相萃取柱,依次用5mL乙腊和c 固相萃取柱洗涤液(4.12)平衡,取备用液过柱 用 l0mlC，固相萃取柱洗涤液(4.12)淋洗,挤干;再用8ml正己炕淋洗,挤干;用2ml乙洗脱,收集 m遮膜,进样分析 洗脱液 于50C下氨气吹干,加0.5mL乙晴溶解 过0.2; 注:上样浴液、淋洗液和洗脱液的流速均控制不超过lnl/min. 基质添加标准工作液的制备 取空白试样按提取(7.1)与净化(7.2)进行处理,在洗脱液中加人0.5ml相应浓度的标准工作液 4.15),氮吹,定容后作为基质添加标准工作液,供液相色谱-串联质谱仪测定 7.4测定 7.4.1液相色谱条件 n×2.1tmm 色谱柱:C8,150 1,粒径3Am,或相当者 mm 流动相:乙睛十水十甲酸(95+5+0.1,体积比). 流速:0.2ml/min. 柱温:室温 进样量:10AlL 7.4.2质谱参考条件 离子化方式;电喷雾离子源,正离子扫描(EsI+) 毛细管电压:3.2kV 离子源温度:120C 雾化气:300C 倍增器电压:650V 碰撞气;氯气 其他参数见表1
GB/T21320一2007 表1质谱参数设置 子离子 驻留时间 碰撞能量/ 锥孔电压/ 母离子 药物 eV m/z) m/z) 352.0 75 埃普利诺菌素 0.4 28 936.6 490,0 327.4 70 25 阿维菌素 895.6 0,4 449.3 353.2" 80 多拉菌素 921.5 28 449.0 329.1 25 7几0 伊维菌素 897.5 753.3 定量离子 液相色谱-串联质谱测定 根据样品溶液中药物的残留量,选择峰面积相近的标准工作液作为随行标样 对标准工作液和样 品溶液等体积参插进样进行测定 4种药物的离子色谱图见附录A 7.4.3.1定性测定 通过液相色谱保留时间与串联质谱选择离子共同定性 待测样品的保留时间与外标标准样品保留 时间的相对偏差不大于2.5% 且与外标标准品相比,样品中待测组分两个定性子离子的相对丰度比 不大于10% 7.4.3.2定量测定 分别取适量试样溶液和相应浓度的基质添加标准工作液,作单点校准,以色谱峰面积积分值定量 标准工作液及试样液中阿维菌素类药物的响应值均应在仪器检测的线性范围之内,试样液进样测定过 程中应参插标准工作液,以便准确定量 标准溶液离子色谱图见附录A 结果计算与表达 按式(1)计算试样中阿维菌素类药物的残留量 x=4Yx 式中: -试样中药物的残留量,单位为微克每千克(4g/kg); 试样特征离子峰面积; 试样溶液最终定容体积,单位为毫升(mL); 基质标准溶液浓度,单位为微克每升4g/L); 基质标准溶液特征离子峰面积 试样质量,单位为克(g). 注;计算结果需扣除空白值,测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留至小数点后2位
GB/T21320一2007 精密度 本方法的批内变异系数<20%,批间变异系数<30%
GB/T21320?2007 ? A ?? ???? 100250 4.61 936.6>490 100 % 0H 100250 4.61 936.6>32 00 ? 100250 6,50 921.5>449 o+ 100250 6.50 921.5>353.2 100 % 0 100250 00 897.5>753.3 % i0.24 o 100250 8.74 897.5>329.1 00 5.535.93 o1 100250 5.53 895.6>449.3 00 8.86 0+ 100250 H 5.53 895.6>327.4 100 % 3.80 .93 0 100250 100 % 876 5.53 6.50 min l.00 2.00 3.00 4.00 5.0o 6.00 7.00 8.00 g.00o 10.00 -?m/z490??г?; ?m/2352??? -m/z449??? D -m/z353.2???; -?m/z753.3???; -?m/z329.1???; G -?m/z449,3???; H -?m/z327.4???; -??? ?A.1?????