GB/T15670.23-2017
农药登记毒理学试验方法第23部分：致畸试验
Toxicologicaltestmethodsforpesticidesregistration—Part23:Teratogenicitystudy
- 中国标准分类号（CCS）B17
- 国际标准分类号（ICS）65.100
- 实施日期2018-02-01
- 文件格式PDF
- 文本页数8页
- 文件大小698.98KB
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农药登记毒理学试验方法第23部分：致畸试验
国家标准 GB/T15670.23一2017 部分代替GB/T15670一1995 农药登记毒理学试验方法 第23部分:致畸试验 Ioxsieologiealtestmethodsforpestieidesregistration- Part23:Teratogenieitystudy 2017-07-12发布 2018-02-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/T15670.23一2017 -在体表、内脏和骨骼检查项目中,删去了检查项目表格(见7.4.4.2、7.4.4.3和7.4.4.4,1995年 版的15.9.3和15.9.4); 内脏和骨骼观察中,增加了观察程序、骨骼染色方法和家兔内脏观察和骨骼观察的内容(见 7.4.4.3和7.4.4.4,1995年版的15.9.4)
本部分由农业部提出并归口
本部分起草单位;农业部农药检定所
本部分主要起草人:李宁,张丽英、陶传江
本部分所代替标准的历次版本发布情况为: GB/T156701995
GB/T15670.23一2017 农药登记毒理学试验方法 第23部分:致畸试验 范围 GB/T15670的本部分规定了致畸试验的基本原则、方法和要求
本部分适用于为农药登记而进行的致畸试验
规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的
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GB14925实验动物环境及设施 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件
致畸性teratogenieitsy 在胚胎发育期引起子代永久性结构和功能异常的化学物质的特性
3.2 母体毒性maternaltoxieity 引起亲代雌性妊娠动物直接或间接的健康损害效应
试验目的 检测妊娠动物接触受试物后引起的子代致畸可能性
试验概述 将性成熟期的雌性动物与雄性动物进行交配,将确认怀孕的雌性动物随机分配到各个剂量组,在妊 娠动物的胚胎发育器官形成期给予受试物染毒,并在子代预期出生前将母体处死,取出子宫,检查吸收 胎、活胎、,死胎及胎仔的外观、内脏和骨骼畸形情况
仪器与试剂 6 6.1仪器 实验室常用设备、生物显微镜及体视显微镜、游标卡尺百分尺)等
GB/T15670.23一2017 6.2试剂 6.2.1茜素红贮备液;茜素红饱和液(溶剂为50%乙酸)5.0mL甘油10.0mL、1%水合氧醛60.0ml 混合,放人棕色瓶中(适用于不剥皮法骨骼染色). 6.2.2茜素红应用液;取贮备液3ml 5mlL,用1g/100ml2g/100nml氢氧化钾液稀释至1000ml 存于棕色瓶中
6.2.3茜素红溶液;茜素红0.lg、氢氧化钾10g,与蒸僧水1000ml混合,临用前配制适用于剥皮法 骨骼染色 6.2.4透明液A;甘油200ml、氢氧化钾10g,与蒸僧水790mL混合
6.2.5透明液B;甘油与蒸僧水等量混合
6.2.6固定液(Bouins液);2,4,6-三硝基酚(苦味酸)饱和液75份、甲醛20份,与冰乙酸5份混合 试验方法 7.1受试物配制 受试物应新鲜配制,如果有资料表明其溶液储存稳定,也可不必新鲜配制
固体受试物应溶于或悬 浮于适当的溶剂或介质中,液体受试物可直接使用或稀释后使用
根据受试物的理化性质选择所用的 溶剂或介质
通常首选溶剂为水,不溶于水的受试物可使用食用油(如橄榄油、玉米油等),不溶于水或 油的受试物可使用羚甲基纤维素钠、淀粉等配成混悬液
7.2实验动物 7.2.1动物选择 试验首选动物为大鼠或家兔
选用健康、性成熟的雄性动物和性成熟的未经交配的雌性动物
试 验开始时动物体重差异不应超过同性别平均体重的士20%
所用动物应注明种类、品系、性别、体重和 周龄
7.2.2动物性别和数量 动物适应5d一7d,雕性和雄性动物通常按1:1或2:1比例合笼交配,为了获得足够的胎仔来评 价受试物的致畸作用,每个剂量水平的妊娠动物,大鼠至少16只,家兔至少12只 7.2.3饲养条件 实验动物饲养条件应符合GB14925的有关规定
实验期间自由饮水和摄食,妊娠动物应单笼 饲养
7.3剂量及分组 试验至少设3个试验剂量组、一个阴性对照组和一个阳性对照组(首次开展致畸试验的实验室或人 员,应增设阳性对照组)
高剂量原则上应使部分孕鼠或孕兔出现毒性反应,如体重轻度减轻,如果母体 动物有死亡发生,应不超过母体动物的10%;低剂量组不应出现可观察到的毒性作用;在高剂量和低剂 量间可按几何级数设计中间剂量
试验剂量的设计参考急性毒性、短期重复经口染毒毒性,亚慢性毒 性、人体实际摄人量等资料进行,最好通过预试验进行剂量设计
阴性对照组除不给受试物外,其余处 理均同剂量组
大鼠常用阳性对照物为敌枯双(0.5mg/kg体重1.0mg/kg体重,五氯酚钠(30mg/k8 体重,阿斯匹林(250mg/kg体重300mg/kg体重)及维生素A(75004g/kg体重130004g/kg体
GB/T15670.23一2017 重视黄醇当量)等
如果受试物的毒性较低,在1000mg/kg体重的剂量对胚胎无明显毒性或致畸作用,则不需要再设 其他剂量组,若预试验高剂量仅有母体毒性,对胎仔无不良影响,也可不必再设其他剂量组,可仅设计一 个剂量水平 7.4操作步骤 7.4.1染毒途径 受试物通常经口灌胃给予,也可选用与人接触暴露相同的途径给予
每日灌胃一次,时间地点应相 同,并按母体体重来确定给予受试物的量，一般从第5天开始每隔3d称一次体重,以调整灌胃剂量,灌 胃量一般按5ml/kg体重10mL/kg体重给予,各组灌胃体积一致
7.4.2受孕动物的检查和染毒 性成熟雕、雄大鼠按1:1或2:1同笼后,每日早晨检查雕鼠阴道是否有阴栓或进行阴道涂片检查 是否有精子,查出阴栓或精子,认为该鼠已交配,当日作为受孕零天
性成熟雕、雄家兔按1:1或2:1 同笼后,雕兔和雄兔交配当目作为受孕零天
将检出的“孕鼠”或“孕兔”随机分到各组,并称重和编号
大鼠孕后6d15d,家兔孕后6d18d每天给予受试物染毒
7.4.3母体观察 每日对母鼠或母兔进行临床观察,包括皮肤,毛发,眼睛,黏膜、呼吸、神经行为和四肢活动等情况 及时记录各种中毒反应,包括发生时间、表现程度和持续时间,发现虚弱或濒死的动物应进行隔离或处 死,母体有流产或早产征兆应及时剖检
在受孕第0天、第1天、给予受试物期间每隔3d及处死当日 称孕鼠或孕兔体重
7.4.4胎仔观察 7.4.4.1检查前处理 于分娩前一天(大鼠妊娠第20天,家兔妊娠第29天)处死妊娠母体
剖腹取出子宫,称重带有胎体 的子宫.以求出妊娠雌性动物的净增重
记录黄体数、着床数、吸收胎、死胎(早死胎和晚死胎)及活胎 数
对每只活胎进行外观检查
对大鼠,每窝的1/2活胎用于骨瞥检查,其余的1/2活胎用于内脏检 查
对家兔,应对所有的活胎进行骨骼和内脏检查
7.4.4.2外观检查 逐一记录活胎仔的性别、体重、体长、尾长(仅对大鼠),并检查胎仔外观有无异常
如头部有无脑膨 出、露脑、小头,小耳、小眼,无眼和睁眼,兔唇、下颌裂,躯干部有无腹裂、脐痛、脊柱弯曲,四肢有无小肢、 短肢、并趾、多趾、无趾等畸形,尾部有无短尾、卷尾、无尾,肛门有无闭锁等
7.4.4.3内脏检查 对大鼠,将每窝的1/2活胎鼠放人Bouins液中固定2周,做内脏检查
先用自来水冲去固定液,将 鼠仰放在石蜡板上,剪去四肢和尾,用刀片在头部横切或纵切共5刀,再剖开胸腔和腹腔
按不同部位 的断面观察器官的大小,形状和相对位置
正常切面见图1
经口从舌与两口角向枕部横切(切面1),可观察大脑、间脑、正脑、舌及颗裂; aa b 在眼前面作垂直纵切(切面2),可见鼻部 从头部垂直通过眼球中央作纵切(切面3);
GB/T15670.23一2017 d)沿头部最大横位处穿过脑作切面(切面4); 注:以上切面的目的可观察舌裂,双叉舌、裂,眼球、鼻畸形、脑和脑室异常
沿下领水平通过颈部中部作横切(切面5),可观察气管、食管和延脑或脊髓
e 图1大鼠头部正切面图 以后自腹中线剪开胸、腹腔,依次检查心,肺、横胭膜,肝、胃,肠等脏器的大小,位置,查毕将其摘除 再检查肾脏,输尿管,膀胧、子宫或皋丸位置及发育情况
然后将肾脏切开,观察有无肾孟积水与扩大 对家兔,对每只胎仔进行仔绀解剖,对至少1/2的胎仔应进行头部解剖观察,包括脑,眼、鼻腔、口腔 和舌头等
其胸、腹腔脏器观察参照大鼠解剖程序进行
7.4.4.4骨骼检查 骨骼标本制作方法一:将每窝1/2的活胎放人95%乙醇中固定2周一3周,取出胎仔流水冲洗数分 钟后放人lg/100nmL~2g/100mL的氢氧化钾溶液内至少5倍于胎仔体积)8h~72h,透明后放人 茜素红应用液中染色16h一48h,每天轻摇1次一2次,至头骨染红为宜
再放人透明液A中1d一2d,放 人透明液B中2d一3d,至骨骼染红而软组织基本褪色 骨瞥标本制作方法二(剥皮法);将胎鼠去皮、去内脏及脂肪后,放人茜素红溶液染色约24h,当天 摇动玻璃瓶2次3次,待骨骼染成红色时为止
将胎鼠换人透明液A中1d2d,再放人透明液B中 2d3d
待胎鼠骨骼已染红,而软组织的紫红色基本褪去,可换至甘油中 胎仔骨骼检查;将骨骼标本放人小平皿中,用透射光源,在体视显微镜下作整体观察,然后逐步检查 骨骼
测量头顶间骨及后头骨缺损情况,然后检查胸骨的数目、缺失或融合(胸骨为6个,骨化不全时首 先缺第5胸骨、次为缺第2胸骨),肋骨通常12对~13对,常见畸形有融合肋、分叉肋、波状肋、短肋、多 肋常见14肋,缺肋、肋骨中断
脊柱发育和椎体数目(颈椎7个,胸椎12个13个,腰椎5个6个 骶椎4个,尾椎3个5个),有无融合、纵裂等
最后检查四肢骨,包括形状和数目
观察完的标本可 放人甘油中保存
家兔的骨骼检查,参照大鼠骨骼观察程序进行
试验结果和评价 8 将试验结果列表,应包括实验动物数、母体平均体重、母体平均净增重、受孕动物数、黄体数,着床 数,吸收胎数、活胎数、死胎数及百分率、胎仔的情况[体重、体长、尾长(仅对大鼠]、畸胎的类型(包括外 观、内脏和骨骼),计算动物总畸胎率和某单项畸胎率
所有数据应采用合理的统计方法进行处理,应将 各剂量组的指标与对照组进行显著性检验
活胎率=活胎数/胎鼠(兔)数×100% 死胎率一死胎数/胎鼠(兔)数×100% 吸收胎率一吸收胎数/着床数×100% 每组动物总畸胎率一出现畸形的活胎总数/该组母体所产生的活胎总数×100%
GB/T15670.23一2017 每组动物单项畸胎率=出现某种畸形的活胎总数/该组母体所产生的活胎总数×100%5 根据试验结果,提出未观察到有害作用剂量水平和观察到有害作用最低剂量水平,如有致畸效应， 提出最小致畸剂量,在进行结果评价时,应考虑所用动物品系的历史资料,包括自发畸变种类和频率
试验报告 试验报告至少应包括以下内容 试验名称、试验单位名称和联系方式、报告编号; a b 试验委托单位名称和联系方式、样品受理日期和封样情况 试验开始和结束日期、试验项目负责人,试验单位技术负责人、签发日期; c d 试验摘要; 受试物名称,有效成分美国化学文摘登录号(CAS号)如已知)、代码如有,纯度(或含量) 剂型、生产日期(批号、外观性状、配制所用溶剂和方法; 实验动物种属,品系,级别.数量、体重,周龄,性别.来源(供应商名称、实验动物质量合格证号、 实验动物生产许可证号),检疫、适应情况,实验动物饲养环境,包括温度、相对湿度、饲料、单笼 饲养或群饲、实验动物设施使用许可证号; 剂量和组别包括选择剂量的原则或依据、剂量和组别、动物分组方式和每组每种性别动物数; g 试验条件和方法;包括主要仪器设备、染毒途径、染毒方案、试验周期、观察指标等; h 试验结果:体重、妊娠情况、黄体数,着床数、吸收胎数、活胎数、死胎数及百分率,胎仔的情况 [[体重、体长、尾长(仅对大鼠]、畸胎的类型(外观、骨骼和内脏、数目及百分率; 结论;受试物对母体及其后代作用的未观察到有害作用剂量水平(NOAEL)和观察到有害作 j 用最低剂量水平(LoAEL),明确受试物是否有致畸作用,如有致畸效应,提出最小致畸剂量; 原始记录保存情况的说明
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农药登记毒理学试验方法第23部分：致畸试验GB/T15670.23-2017
随着化学农药在农业生产中的广泛应用，农药对环境和人体健康造成的影响也日益引起人们的关注。为了保护公众的健康和环境的安全，各国都制定了相关法规和标准，要求对农药进行严格的毒理学试验。
农药登记毒理学试验方法第23部分：致畸试验GB/T15670.23-2017是中国制定的一项农药毒理学试验标准，旨在评价农药是否具有致畸性。致畸试验是通过观察动物胚胎或幼仔在暴露于化学物质后发育异常情况来评价化学物质对生殖和发育的影响。
致畸试验主要分为三个阶段：实验设计、实验操作和实验结果分析。在实验设计阶段，需要确定试验动物的种类、剂量范围、剂量方式和暴露时间等因素。在实验操作阶段，需要进行动物饲养、处理、观察和记录等工作。在实验结果分析阶段，需要对实验数据进行统计和分析，并得出结论。
GB/T15670.23-2017标准规定了致畸试验的具体操作方法和技术要求。其中包括试验前的准备工作、试验操作流程、试验结果判定标准等内容。该标准可以有效地评价农药是否具有致畸性，为农药的安全使用提供了科学依据。
总之，农药登记毒理学试验方法第23部分：致畸试验GB/T15670.23-2017是一项严格的农药毒理学试验标准，可以评价农药是否具有致畸性。各相关企业和机构应该严格遵守该标准，加强农药生产和使用中的安全管理，以保护公众的健康和环境的安全。
