球孢白僵菌粉剂

球孢白僵菌粉剂

国家标准 GB/T25864一2010 球抱白僵菌粉剂 PowderofBeauveriabassiana 2011-01-10发布 2011-06-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/T25864一2010 前 言 本标准的附录A,附录B为规范性附录,附录C为资料性附录 本标准由国家林业局提出并归口 本标准起草单位;国家林业局森林病虫害防治总站、安徽农业大学、林业科学院、华中农业大学 微生物农药国家工程研究中心 本标准主要起草人郭志红、李增智、陈昌洁、宋玉双、喻子牛、樊美珍、胡加富、崔永三、苏宏钧、 李林,任浩章
GB/T25864一2010 引 言 球袍白僵菌粉剂是一种真菌杀虫剂 白僵菌经过发酵获得分生袍子,经萌发侵人目标害虫体内,破 坏害虫组织并产生毒素,使害虫致死 球抱白僵菌的名称及基本参数如下 菌种中文通用名:球抱白僵菌 zeriabassiana Bals.)vui. 菌种拉丁文学名;Beauu 分类地位;球袍白僵菌在分类上属于真菌门(Eumycota),半知菌亚门(De euteromycotina),丝抱纲 HHlyphomyc ycetes),丛梗袍目(Moniiales),丛梗袍科(Moniliaceae),白僵菌属(Bea 1eria 鉴定特征;在麦芽浸膏培养基上,菌落的菌丝呈白色绒状,后期呈丛卷毛状至粉状,背面初期无色， 菌落产抱后呈淡黄色至粉红色 分生袍子梗常浓密簇生(但有时单生或轮生),呈瓶状,形成"之" ”字状弯 分生袍子球形,透明.薄壁 大小为epm一了pm)xpm-么. m) 曲产抱轴 菌种保藏条件;温度5C;避光;封装 有效成分主要存在形式分生袍子 生物活性;主要用于防治鳞翅目害虫 适宜生长条件.麦芽浸粉或PDA培养基、适宜温度25c.pH6. 最适贮存温度:5C
GB/T25864一2010 球抱白僵菌粉剂 范围 本标准规定了球抱白僵菌粉剂的要求、检验方法及标签、包装、贮运等规则 本标准适用于球袍白僵菌经生物发酵与加工而获得的分生弛子粉剂 本标准不适用于布氏白僵菌或其他种类白僵菌生产的杀虫剂 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是杏可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T1605一2001商品农药采样方法 GB37962006农药包装通则 GB/T16150-1995农药粉剂、可湿性粉剂细度测定方法 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准 3.1 球袍白僵菌粉剂beueriapwderprduet 由球袍白僵菌纯菌种经生物发酵生产与加工而获得的分生抱子粉剂 是防治多种害虫的真菌杀 虫剂 3.2 球抱白僵菌BeauveriabassianaBals.)Vuil. -种半知菌类的虫生真菌,分类上属于真菌门(Eumycota),半知菌亚门(Deuteromycotina),丝袍 纲(Hyphomycetes),丛梗抱目Moniliales),丛梗抱科(Moniliaceae),白僵菌属(Bea4eria) 3.3 分生抱子eomidia 种无性繁殖细胞 着生于分生袍子梗上的瓶状产胞细胞顶端,对昆虫具有致病力 球袍白僵菌 的分生抱子大部分呈球形 含抱量eonidiacontent 每克白僵菌粉剂中所含的分生抱子数 3.5 抱子萌发率germinationrateofconidia 白僵菌粉剂中所萌发的白僵菌抱子数占抱子总数的百分比 3.6 毒力测定bioasSay 用杀虫剂感染目标害虫或指示昆虫使其感病死亡,是检验杀虫剂毒力的过程
GB/T25864一2010 3.7 毒力 Virulence 对目标害虫的致死能力,以通过活体生物测定得到的致死中时LTn表示 3.8 干燥减量lossinweight 样品在规定条件下,经加热干燥后质量减少的百分数,即样品中水分及少量低挥发物的量 3.9 杂菌率microbialcontaminant 真菌农药中除有效成分真菌外,其他影响有效成分真菌生长的菌占总菌量的百分比 要求 外观 白色或浅灰白色粉末,不可以有团块 4.2控制项目指标 球袍白倡菌粉剂应符合表1的要求 表1球袍白僵菌粉剂控制项目指标 目 指 标 项 高袍粉>l000亿袍子/g 含抱量 低抱粉100(士10)亿袍子/g 高抱粉>909 袍子萌发率 低抱粉>90% 高抱粉LT<5d 毒力LTa 低他粉LT<6d 高抱粉5% 杂菌率 低抱粉<10% 高抱粉<10% 干燥减量 低抱粉<10% 高抱粉全部通过160目筛 细度 低抱粉全部通过35目筛 贮存稳定性 在5条件下贮存180d,抱子萌发率大于标明值的80% 检验方法 抽样 按照GB/T1605一 -20o1中5.1.”商品农药采样方法"进行,用随机数表法确定抽样的包装件,最终 抽样量不少于100 5.2鉴别试验 5.2.1菌种鉴别 根据所提供的菌种形态学,生物化学,DNA分子特征或国际公认机构的鉴定特征,用显微镜观察法 从生物形态上进行鉴定或采用其他(如生物化学,DNA片段序列)方法进行鉴定 5 2.2菌种仲裁鉴定 当对鉴别结果有怀疑或争议时,应到有菌种认证资质的单位,与菌种保藏中心保藏的生产菌株进行
GB/T25864一2010 对照,由2名以上的专家确定后,出具菌种鉴定报告,作为仲裁依据 5.3含抱量的测定 5.3.1方法提要 本试验采用显微记数法 将粉剂稀释至适当倍数,在显微镜下用血球记数板计抱子数,然后计算含 袍量 5.3.2试剂 吐温80(化学纯) 5.3.3仪器及设备 光学显微镜、精度为千分之一的天平、组织捣碎机,血球记数板(16×16),微量移液器,玻璃器皿等 检验程序 用精度为千分之一的天平准确称取低抱粉1.00g或高抱粉0.10g,装人组织捣碎机的盛液杯中 mL的吐温80,200mL清水,以5000r/min的速度搅拌2min,加清水定容至500mL. 同时加人0.1 再以500r/min的速度搅拌1min,使之成为均匀的袍子悬浮液 将袍子浓度控制在每中格20~ 40个,如果不合适可以稀释样品调节成此浓度 取深度为0.1mm、血球计数板格为l6×16个中格,盖 上配套专用盖玻片,用吸管吸取配制好的悬浮液沿盖玻片的边缘滴人,使袍子液恰好充满盖玻片于载玻 片之间,以抱子液不人槽为度,多余抱子液用滤纸吸去 放在显微镜载物台上静置1nmin一2min,待浮 动的抱子静止后,放大400倍检视计数 5.3.5检验结果计算 血球计数板记数格为16个中格,每个中格为16个小格,则计算双线范围内任一斜对角线上的四个 中格共64个小格的抱子总数 记数时每中格的四周如有压线的抱子,计上线不计下线,计左线不计右 线 按公式(1)计算待测样品的抱子含量 S土S.土S土SX4x10'×工 1) 64 式中: 含抱量,亿袍子/g; -任意4个中格中袍子的数量; SS T 稀释倍数 每个样品设3个重复 允许误差率为10% 抱子萌发率的测定 将50ml麦芽浸粉培养液(麦芽浸粉2%,用燕僧水配制)注人预先放人20一30个直径5mm玻璃 珠的250ml三角瓶中,在121C条件下灭菌20min后,放人待测低抱粉0.2g(或根据含抱量换算成 适合镜检的克数,高抱粉亦然),置于120r/min的摇床上,在25C条件下培养8h16h(视菌种特性 而定),取样制片镜检 用血球数板计数,芽管大于袍子半径的袍子计为萌发袍子 按公式(2)计算抱子 萌发率: R=×100% 2 式中 袍子萌发率,%; R 萌发抱子总数 N- M 检查抱子总数 每个样品设3个重复 允许误差率为10% 5 干燥减量的测定 5 5.5.1仪器及设备 扁形称量瓶(50 mm
GB/T25864一2010 电热恒温干燥箱(士2C 5.5.2测定步骤 将扁形称量瓶在110C干燥箱烘15min,取出称量、记录 准确称取5.00g样品放人皿内,在 105士2)C电热恒温干燥箱中烘1h 取出后将样品和扁形称量瓶一起称重,减去扁形称量瓶的重量 按公式(3)计算干燥减重(含水率) 5.00-w w (3 5.00 式中 干燥减重,%; w w 烘干后样品重量，g 每个样品设3个重复 允许误差率为2% 5.6毒力测定 按附录A,附录B进行 5.7杂菌率测定(CFU法 5.7.1采用2%麦芽浸膏、,2%营养琼脂配制培养基,121C高压灭菌20min后凉至45C左右,倒人培 养皿制成2mm4mm的平板 5.7.2按5.3.4中的操作步骤称样,均散、稀释(用无菌水) 稀释倍数依具体情况而定,或同时做几个 稀释梯度,使每个培养皿中的菌落保持在1020个 7.3用微量移液器接种100菌液到培养基平板上,用曲玻棒涂布均匀 做10次重复 5. 5.7.4在27C条件下培养48h,根据菌落特征分辨球抱白僵菌或杂菌,分别计数 计算出杂菌占总菌 落数的百分比 5 8 细度的测定 按照GB/T161501995中的2.1干筛法(适用于粉剂)执行 高袍粉应全部通过160目筛,低袍 粉应全部通过35目筛 5.9贮存稳定性的测定 将产品在5C条件下贮存180d,袍子萌发率应大于标明值的80% 标志、标签,包装和贮运 6 标志、标签 球袍白僵菌粉剂的标志及标签应符合GB3796一2006的规定 标签上应注明贮运条件 6.2包装 产品包装要求应符合GB3796一2006的相关规定 6.3贮运 6.3.1贮藏地点 球袍白僵菌粉剂的贮藏应选择低于20C、干燥,通风、蔽光的场所 有条件的应在5C条件下保存 6.3.2运输 球袍白僵菌粉剂在运输中应密封防潮,防晒,防高温防雨淋 避免与皮肤眼睛接触,防止由口鼻 产品特殊要求 产品应采用塑料袋密封包装,以保证干燥减量在10%以下 保证期 在规定的贮运条件下球袍白僵菌粉剂的保证期为6个月 从生产日期算起,至少6个月内抱子萌 发率不低于标明值的80%
GB/T25864一2010 附 录A 规范性附录 以松毛虫为目标昆虫的毒力测定 A.1供试虫种 马尾松毛虫Dendrolimuspunctat4swalker A.2试剂和材料 麦芽浸粉(生化试剂); 葡萄糖医用); 吐温80(化学纯); 新洁尔灭医用. A.3仪器设备 电子秤(千分之一精度); 加湿器(超声波低温加湿器); 养虫笼由30cm×30cm×50cm的木制框架构成，上下两面用木板,四个侧面用窗纱,有一个可 以开关的侧门 三角瓶(250ml); 不锈钢锻子(医用 A.4供试幼虫的饲养 A.4.1蛹的采集 在林间用带有橡皮头的子轻轻取下成熟的马尾松毛虫蛹,放人养虫笼内 每笼30只 保持温度 在25C,相对湿度在80%以上(必要时用加湿器) A.4.2成虫的饲养和产卵 待蛹羽化后,同时放人1只250mL三角瓶水培的新鲜马尾松枝,作为成虫产卵的场所 一般成虫 羽化后,当天或次晚交配,历时7h以上可以完成受精并产卵,7d10d为产卵高峰期 卵约7d开始 孵化 A.4.3幼虫的饲养 在孵化高峰期,每天清除虫粪,用新洁尔灭消毒用过的器具,并换上新鲜松枝饲养幼虫 幼虫生长 7d一10.d以2龄幼虫为主,10d一15d以3龄幼虫为主 应选择虫龄一致,生理状态良好的健康幼虫 作为毒力测定的供试幼虫 室内饲养一般不超过4代 A.5接种感染 准确称取2.00g低抱粉或0.20只高抱粉,加人0.1mL吐温80,置于高速搅拌器的盛液杯中,加人 1%的麦芽浸粉液200mL 以5000r/min速度搅拌2min,配制成1亿袍子/mL的待测样品悬浮液 每个养虫笼放人1只250ml三角瓶,装人水,插人新鲜松枝 挑选健康马尾松毛虫3龄幼虫 30头,浸人待测样品悬浮液中2s,用滤纸吸掉余液,放人已在三角瓶中插好鲜松枝的养虫笼中 每个 样品3次重复 以含有同样浓度吐温80的麦芽浸粉液做对照,3次重复 置于温度在25、相对湿度 在80%以上(必要时用加湿器)的环境中培养观察 每天换一次新鲜松枝
GB/T25864一2010 处理的浓度剂量应不少于5个 每个处理30头试虫,至少重复3次 6 A， 观察记录 接种48h后开始检查死亡率,每24h记录一次 用铅子轻触虫体,无反应者计为死亡数 对照要 放在另外的房间中,并用单独的锻子 对照的死亡率应小于10%,如果大于10%应重新测定 A.7测定结果 根据对照与处理的数据,采用Abbott表或按式(A.1)计算校正死亡率Y%) Y-Y Y一 ×100% A.1 式中: 校正死亡率,%; 药剂处理样本的死亡率,%; 对照样本的死亡率,% 然后,将处理浓度换算成对数值,校正死亡率转换成死亡几率值,用最小二乘法求出样品致死中 时1LTm A.8允许误差 每次平行测定结果之差,应不大于20% 样品各剂量引起的死亡率应在10%一90%之间 测 LT时,在50%死亡率上下应至少设置2个时间
GB/T25864?2010 ? B 淶?? ???? B.1 OtriniafhurnacalisGuenee) B.2?? 8o(?); ?(?); ?c(?); ?(,80C,80??); ??(??,80C,80??); (?); (); (); (); (); ?(??300g/cm,??) ù(???); ?(); ?(); 10%??(,??); 95%??(); ??(8.5g;6.0g,3.0g,802ml,?1000mL); ??(200mL??,???); ?(25cem40em); ?(24??) B.3豸 ?? ?壬 ??; ? ??(250mL,) (100r/min?600r/min); (9cm2.5cm); ?(50ml,500ml1000mL); 11801 ?(18mm mm; (?5 mm ?(1mL10mL);
GB/T25864一2010 带塞磨口试管(10mL); 玻璃培养皿(9cm); 不锈钢锻子(医用 B.4玉米螟的饲养 B.4.1饲料的配制 饲料配方:玉米粉60g,酵母粉36g、黄豆粉60g,维生素C4.0g.山梨酸4.0g10%甲醛1.6mL、 琼脂20g,蒸僧水750nL 将蔗糖,琼脂粉加人600ml的蒸僧水中调匀,搅拌煮沸,使琼脂完全溶化 玉米粉,黄豆粉、酵母 粉用剩余的150mL水润湿浸泡 维生索c.山梨般娜用少量水解解 冷却至80C加人黄豆粉、玉米 粉等的润湿物,搅 稍等再将维生素C和山梨酸钾的混合液加人,搅匀 以微粒不下沉为标淮,最后 加人溶化的红霉素和甲陛溶液搅匀,置65C水浴中,每个养虫管加人5 mL饲料 凝固后保存于4C 条件下待用 饲养 B.4.2 士1C,保持湿度在100%,约3d时间孵化出初孵 取玉米螟的卵放人养虫盒中,保持温度在27 幼虫 再将初孵幼虫转人已加人饲料的养虫管中,放置在27c士1C,湿度在75%~100%的环境中 培养 B.4.3供试昆虫的挑选 培养5d后挑选供试幼虫,选择健康、活跃、个体大小一致的幼虫供试验用 B.5待测样品悬浮液的制备 准确称取2.00些低抱粉或0.2【高抱粉,加人0.1m吐温80,置于高速搅拌器的盛液杯中,加人 200ml1%的麦芽浸粉液 以5000r/min速度搅拌2nmin,配制成1亿抱子/mL的溶液 B.6接虫感染 将选好的幼虫10头一组,放人待测样品悬浮液的中浸2s,迅速取出,用滤纸吸掉多余水滴 放人 已放置饲料的养虫管中,每处理做5管,塞上棉塞,写好标签 口朝下倾斜放置,27C士1,保持湿度 在75%~100%,感染饲养120h B.7药效检查 接种24h后开始检查死亡率,每天检查一次 用子轻触虫体,无反应者计为死亡数 每天检查 -次 记录死亡虫数 应注意先检查对照,并使用单独的锻子 对照的死亡率应小于10%,如果大于 10%应重新测定 B.8测定结果 根据对照与处理的数据,采用Abbott表或按公式(A.1)计算校正死亡率Y(%) 然后,将处理浓 度换算成对数值,校正死亡率转换成死亡几率值,用最小二乘法求出样品致死中时LTn B.9允许误差 每次平行测定结果之差,应不大于20% 样品各剂量引起的死亡率应在10%一90%之间 测 LT时,在50%死亡率上下应至少设置2个时间
GB/T25864一2010 附 录c 资料性附录 白僵菌产品分类 C.1球抱白僵菌产品分类 C.1.1球抱白僵菌高抱粉 分生抱子含量为1000亿抱子/R以上、细度是全部通过160目筛的白僵菌菌粉 主要用于防治鳞 翅目害虫 适用于对喷洒物细度要求较高的航空喷洒、静电喷洒等 C.1.2球抱白僵菌低抱粉 袍子含量为80亿抱子/g,细度是全部通过35目筛的白僵菌菌粉 主要用于防治鳞翅目害虫 适 用于一般喷粉器 C.1.3球抱白僵菌粉炮 通过点燃引捻抛向或发射到空中后点爆扩散的白僵菌粉剂 适用于高山地区和树木较高的林区 C.1.4球抱白僵菌油悬浮剂 以油类为介质的白僵菌液体制剂 适用于飞机喷洒 C.1.5球袍白僵菌挂条 以无纺布或不同质地的纺织品为载体制成的杀虫产品 主要用于防治鞘翅目害虫 布氏白僵菌粉剂 eaueriabr 以布氏白僵菌(Beau rongniarti)为生产菌株,经过发酵和加工制成的,分生袍子含量为 50100亿袍子/g、细度为全部通过35目筛的粉剂 主要用于防治地下害虫