动物球虫病诊断技术

动物球虫病诊断技术

国家标准 GB/r18647一2020 代替GB/T18647一2002 动物球虫病诊断技术 Diagnostieteehniquesforanimalcoeeidiosis 2020-12-14发布 2020-12-14实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标涯花管理委员会国家标准
GB/T18647一2020 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准代替GB/T18647一2002《动物球虫病诊断技术》 本标准与G;B/T18647一2002相比,除编 辑性修改外,主要技术变化如下 “范围”部分增加了家畜(猪、牛、羊、马等)和宠物(犬、猫等)(见第1章); 增加了“临床诊断”部分(见第3章); “病原检查”部分增加了“样品采集,保存和运输”见4.2); “定性检查”和“定量检查”部分增加了不同动物粪便处理的方法(见4.3.1.2和4.3.2.3) -“定性检查”阴性结果判定部分根据不同动物修改了需要连续检查粪便天数[见4.3.1.8b)， 2002年版的2.2.1.8b)] -“定量检查”部分增加了不同动物粪便采集量以及卵囊OPG的换算方法(见4.3.2.2,4.3.2.7 4.3.2.9); “病理检查”中裂殖子/裂殖体检查部分增加了对兔肝脏和鸭、鹅肾脏的检查(见5.3.1); 增加了结果“综合判定”部分(见第日章). “球虫卵囊形态特征”部分增加了不同属球虫卵囊的大小和模式图(见附录B). 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 本标准由农业农村部提出 本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(sAc/Tc181)归口 本标准起草单位;农业科学院上海兽医研究所 本标准主要起草人;董辉,黄兵、韩红玉、陈兆国,赵其平,朱顺海 本标准所代替标准的历次版本发布情况为 GB/T18647一2002
GB/T18647一2020 引 言 球虫病(coccidiosis)是多种动物的一种重要寄生虫病,各国均有发生,对家畜、家禽、宠物、鱼类和野 生动物等均有不同程度的危害,特别在集约化养殖中,若控制不严,会造成重大经济损失 本病对家禽 和兔危害较大,急性暴发的死亡率可超过30%;其次是猪牛,羊等家畜,急性感染常引起下痢,生长严 重受阻;犬、猫球虫病也较为常见,可引起消瘦、贫血、腹泻及生长发育受阻,严重时可导致死亡;也偶有 鱼类和野生动物发生球虫病的报道 本病的病原为顶复器门(Apicomplexa),类椎体纲(Conoidasida)、真球虫目(Eucoccidiorida)、艾美 耳科EEimeridae中的艾美耳属Ein 等抱属Isospora、泰泽属TyGB/T18647一2020 动物球虫病诊断技术 范围 本标准规定了动物球虫病的临床诊断、病原检查、病理检查、综合判定的技术要求 本标准适用于家禽(鸡、鸭、鹅等),家畜(猪、牛,羊、马、兔等),宠物(犬、猫等)球虫病感染)的诊断 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB/T6682一2008分析实验室用水规格和试验方法 NY/T541一2016兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 临床诊断 根据发病临床特征,球虫病可分为急性型和慢性型 急性型多发生于幼龄动物,病程初期表现为精神沉郁,嗜睡,被毛粗乱,食欲下降,腹泻 病程后期 出现运动失调,食欲废绝,排出带血水样稀便,甚至是血便,具恶臭味,可视黏膜贫血、苍白,身体消瘦,甚 至失重,最后因脱水、衰竭而死 慢性型多见于大龄动物,无明显症状,主要表现为厌食,间歇性下痢,逐渐消瘦,生产性能下降等 有以上临床症状者,可以怀疑为球虫病,确诊需进一步进行病原或病理检查 病原检查 4.1材料与试剂 4.1.1试剂;饱和盐水,2.5%重铬酸钾溶液,配制方法分别见附录A中A.1和A.2,配制用水符合 GB/T6682-2008三级水要求 4.1.2器材;样品保存袋、记号笔、防水标签纸,60目和100目铜丝网或尼龙网、100mL 量筒、,50mL烧 杯,50nmL离心管、10mL玻璃瓶、吸管、毁子、天平、离心机、麦氏虫卵计数板、载玻片、盖玻片、显微 镜等 4.2样品采集、保存和运输 4.2.1动物粪便的采集;对家禽、犬、猫,兔等小型动物,若是群体采样,采集新鲜粪便不少于200g,若 是个体采样,采集新鲜粪便不少60g;对猪、牛、羊、马等大型动物,若是群体采样,采集新鲜粪便不少于 300g若是个体采样,采集新鲜粪便不少100g 4.2.2样品的保存;样品采集后置于样品保存袋中,封口后,每份样品的包装袋上均要贴上标签,写明 采集地点,采集时间、动物种类,动物年龄,粪便性状等详细资料,置于2C~8冰箱内保存 4.2.3样品的运输以最快最直接的途径将所采集的样品送往实验室进行检测,运输条件符合NY/T54l一 2016要求
GB/T18647一2020 4.3操作方法 4.3.1定性检查 4.3.1.1将被检动物或动物群的新鲜粪便充分搅匀后取10g,放人50m烧杯中,加人适量水 4.3.1.2轻轻搅匀,经60目铜丝网或尼龙网过滤;对于猪、牛,羊、马等大型动物,滤液再经100目铜丝 网或尼龙网过滤 4.3.1.3将滤液移人50ml试管,2500r/min离心10nmin 4.3.1.4倾去上清液,沉淀物中加人少量饱和盐水,混匀,将管内的沉淀物混悬液移人10mL玻璃 瓶内 4.3.1.5用饱和盐水加满玻璃瓶,盖上盖玻片盖玻片应与液面接触),静置10min 43.1.6取下盖玻片,将有液体的一面盖在载玻片上 4.3.1.7置载玻片于显微镜载物台上,用10×10或10×40的倍数进行检查 4.3.1.8定性检查的判定标准如下: a 发现球虫卵囊,判为阳性,说明该动物(群)已感染球虫 将球虫阳性粪样置于2.5%重铬酸钾 溶液中,在25C一28C环境中培养至袍子化卵囊后,参见附录B球虫卵囊形态特征,确定为 哪一属的球虫 b 未发现球虫卵囊,需从4.3.1.1开始重复检查5次,仍未见球虫卵囊,该粪样可判为阴性 对于 家禽、犬、猫等,需连续采集粪便7d~10d,每天检查,均未发现球虫卵囊,方可说明该动物 群)未感染球虫;而对于猪、牛、羊、马、兔等家畜,需连续采集粪便14d一21d,每天检查,均未 发现球虫卵囊,说明该动物群)未感染球虫 4.3.2定量检查 4.3.2.1对定性检查中呈阳性的粪样,需进行定量检查 4.3.2.2每份粪样取3个重复,每个重复根据待检动物种类不同取不同粪便量,家禽,犬、猫,兔等小型 动物取粪样2g,猪、牛,羊,马等大型动物取粪样10g,放人50mL烧杯 4.3.2.3加人适量自来水搅匀,经60目铜丝网或尼龙网过滤,用少量自来水冲洗3次5次滤网;对于 猪、牛、羊,马等大型动物,滤液再经100目铜丝网或尼龙网过滤,用少量自来水冲洗3次5次滤网 4.3.2.4将滤液移人50nml试管,2500r/min离心10min 1,弃去上清液 43.2.5用少量饱和盐水将沉淀物搅匀,移人100mL量筒,加饱和盐水至60mL处,充分混匀 4.3.2.6用吸管吸取混悬液注满麦氏虫卵计数板的2个计数室,静置5min. 4.3.2.7将麦氏虫卵计数板置于显微镜下检查,用10×10的倍数数出每个计数室(1cm×1cm× 0.15cem=0.15em')内的所有卵囊数,将两个计数室的卵囊数之和除以2即得卵囊平均值 对压线的 卵囊,按左、上压线计,右、下压线不计处理 根据每个重复的卵囊平均值,计算出三个重复的平均 值A 4.3.2.8家禽、犬、猫兔等动物的每克粪便卵囊数(oocystpergram，OPG)按式(1)计算,猪、牛、羊、马 等动物的OPG按式(2)计算 OPG=(A一0.15)×60一2=A×200 OPG=(A一0.15)×60一10=A×40 4.3.2.9对卵囊数较多的粪样,可在60mL总体积的基础上,用饱和盐水再稀释B倍后计数,家禽、犬 猫、兔等动物的OPG按式(3)计算,猪、牛、羊、马等动物的OPG按式(4)计算 oPG=A×200×B oPG=A×40×B 4.3.2.10定量检查的判定标准如下 OPG>10×10',为严重感染 a
GB/T18647一2020 b)1×10'OPG<10×10',为中度感染; OPGGB/T18647一2020 附 录 A 规范性附录) 试剂及其配制 饱和盐水配制 称取400g食盐,放人三角烧瓶中,加人1000mL.水,加热烧瓶至沸腾,充分搅拌后冷却至室温,有 少量盐析出,即为饱和盐水,密度约1.18g/em A.22.5%重铬酸钾溶液配制 称取25g重铬酸钾固体,放人1L烧杯中,加人开水至1000ml刻度处,充分搅拌使重铬酸钾完 全溶解后,冷却至室温,即为2.5%重铬酸钾溶液 A.3磷酸盐缓冲溶液(Ps)配制 将下列试剂按次序加人到1000mL定量瓶中 氯化钠 8.00g 0.20 氯化钾 g 1.44 磷酸氢二钠 g 磷酸二氢钾 0.24g 800mL 蒸僧水 充分搅匀,用适量1mol/几盐酸(HCl)调溶液的pH值至7.4,再加蒸僧水定容至1L 分装至 500ml或250ml的玻璃瓶中,在103.41kPa压力下蒸气灭菌20min,室温保存
GB/T18647一2020 附录 B 资料性附录 球虫卵囊形态特征 B.1球虫卵囊呈椭圆形、圆形,卵圆形或梨形等不同的形态,均有卵囊壁 B.2未发育成熟的卵囊称为未抱子化卵囊,其颗粒状的原生质多数呈圆形,位于卵囊中间[图B.1中 a)] B.3发育成熟的卵囊称为抱子化卵囊,因属不同,其内含的抱子囊和子袍子数不相同: 艾美耳属(Eimeria)球虫卵囊内有4个抱子囊,每个抱子囊含2个子抱子[图B.1中b],卵囊 a 大小大多为(15m一40m)×(104mm304m) 等抱属(Isosora)球虫卵囊内有2个抱子囊,每个抱子囊含4个子袍子[图B1中e)],卵囊大 小大多为(15Am一40m)×(104m304m) 泰泽属(Tyzceria)球虫卵囊内没有袍子囊,内含8个子袍子[图B.1中d)],卵囊大小大多为 (l10 15 m一20m)×(10m~ 5m) d 温扬属(wenyonella)球虫卵囊内有4个弛子囊,每个抱子囊含4个子袍子[图B.1中e)],卵囊 30 )×(10 20 大小大多为(154mm~ 4m 0m 丛m) 未抱子化卵囊 艾美耳属袍子化卵囊e 等抱属抱子化卵囊 a b 泰泽属抱子化卵囊 温扬属抱子化卵囊 图B.1不同属球虫卵囊的模式图

动物球虫病诊断技术GB/T18647-2020解读

随着畜牧业的快速发展以及市场的不断扩大，动物球虫病成为了影响畜牧业健康发展的重要因素之一。而为了更好地预防和控制动物球虫病，国家质量监督检验检疫总局和国家标准化管理委员会于2020年12月共同发布了《动物球虫病诊断技术GB/T18647-2020》标准。

一、规范的背景

在过去，动物球虫病的传染机理和诊断方法并没有得到充分的认识和研究，导致了动物球虫病的误诊和漏诊问题。同时，也存在着一些技术难点，如鉴别性和特异性问题，需要得到进一步探索。

因此，制定动物球虫病诊断技术GB/T18647-2020标准是有必要的，它将有助于规范动物球虫病的诊断方法，提高诊断准确率和可靠性。

二、规范的主要内容

GB/T18647-2020主要包括以下内容：

1. 术语和定义：明确了一些专业术语的含义，方便各方面的沟通交流。

2. 检测原理：介绍了动物球虫病检测的基本原理和方法。

3. 样品采集和预处理：对不同样品的采集和预处理方法进行了详细介绍。

4. 理化检测：包括荧光PCR、RT-LAMP和ELISA等多种检测方法。

5. 生物学检测：包括病原体分离、培养和鉴定等操作。

6. 数据分析：通过多种统计分析方法对数据进行分析和解释，推导出精准的诊断结论。

三、 规范的意义

动物球虫病诊断技术GB/T18647-2020的发布，不仅有助于控制动物球虫病的传播和流行，还能够为各行各业的专业人士提供统一的诊断标准。同时，它也有助于促进动物保健产业的发展和应用，推动畜牧业的可持续发展。

四、 结语

总之，动物球虫病诊断技术GB/T18647-2020是一个非常重要的标准，它将对动物球虫病的诊断产生深远的影响。我们期待着这个标准能够得到广泛的应用和推广，为各行各业的专业人士提供更好的服务。

动物球虫病诊断技术的相关资料

和动物球虫病诊断技术类似的标准

GB/T18647-2020

动物球虫病诊断技术

2022/7/18 5:55:15 现行