有机肥料中19种兽药残留量的测定液相色谱串联质谱法

有机肥料中19种兽药残留量的测定液相色谱串联质谱法

国家标准 GB/T40462一2021 有机肥料中19种兽药残留量的测定 液相色谱串联质谱法 Deerminatonf19veterinurymedicinesinrganietertilizer Liquidchromatography-tandemmmassspectrometry 2021-08-20发布 2022-03-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标涯花管理委员会国家标准
GB/40462一2021 前 言 本文件按照GB/T1.1一2020<标准化工作导则第1部分;标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 本文件的发布机构不承担识别专利的责任 本文件由石油和化学工业联合会提出 本文件由全国肥料和土壤调理剂标准化技术委员会(SAC/Tc105)归口 本文件起草单位:上海海关工业品与原材料检测技术中心、上海市农业科学院、上海化工院检测有 限公司、上海交通大学、成都产品质量检验研究院有限责任公司 本文件主要起草人:孙明星、吴晓红,李思瑾,司文帅,沈国清,冷远鹏、白冰,刘倩、蔡婧、商照聪、 颜坤、王鲁梅、王晨、李铭
GB/40462一2021 有机肥料中19种兽药残留量的测定 液相色谱串联质谱法 警示使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验 本文件并未指出所有可能的安全问 题 使用者有责任采取适当的安全和健康措施,并保证符合国家有关法规规定的条件 范围 本文件描述了有机肥料中19种兽药残留量的液相色谱串联质谱测定方法 本文件适用于有机肥料中金刚烧胺(AMT)、磺胺毗晓(sPD)、磺胺哒嗓(SDZ)、磺胺甲恶幽 SMX),碱胺嚓陛(STZ),磺胺甲基啼(SMI,磺胺二甲异恶陛(sIZ、磺胺甲嚷二陛(SMT),磺二 甲嗜院(SMZ),磺胺-6-甲氧嗜雌(SMM),磺胺对甲氧嗜哧(SM),碱胺甲氧哒嗓(SMPZ)、磺胺氯哒嗓 (sCP)、磺胺邻二甲氧密嚏(SDO)、磺胺间二甲氧密嚏(SDM)诺氟沙星(NFC),、环丙沙星(CFC)、恩诺 沙星(EFC)、氧氟沙星(OFC)残留量的测定 本方法检出限分别为;磺胺嚷陛、磺胺-6-甲氧密唁、磺胺甲嚓二陛和磺胺氯哒嗦均为204g/kg;其 余目标物均为54g/kg. 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 复混肥料实验室样品制备 GB/T8571 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义 原理 试样中残留的兽药,用NaEDTA-Mellvaine溶液及乙睛-乙酸溶液提取,经固相萃取柱净化,用高 效液相色谱串联质谱仪进行测定,外标或内标法定量 5 试剂或材料 除非另有说明,仅使用分析纯且符合残留检测要求的试剂 5.1水,GB/T6682,一级 5.2金刚烧胺、磺胺毗唉、磺胺哒嗓,碱胺甲恶陛、碱胺嚷陛、碱胺甲基唁、碱胺二甲异恶陛,碱胺甲嚷 二陛、磺胺二甲嗜、磺胺-6-甲氧喘、磺胺对甲氧喘唁,磺胺甲氧哒嗓、磺胺氯哒嗦,碱胺邻二甲氧喘 、磺胺间二甲氧喀嚏、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、冗代诺氟沙星(诺氟沙星-D.、代环
GB/T40462一2021 丙沙星(环丙沙星-D,,冗代恩诺沙星(恩诺沙星-D)标准品:纯度不小于95% 标准品信息见附录A 5.3甲醇;色谱纯 5.4甲酸色谱纯 5.5柠檬酸溶液(0.1mol/L) 称取21.01g柠檬酸,用水溶解,并定容至1000mL 5.6磷酸氢二钠溶液(0.2mol/L) 称取71.63g磷酸氢二钠,用水溶解,并定容至1000ml mol几柠檬酸溶液(5.5)与625mL0.2mol/L磷酸氢二钠溶 5.7Mellaine 缓冲溶液;将1000mL.0.l 液(5.6)混合,必要时用氢氧化钠或盐酸调节pH值至4.00士0.05 5.8Na,EDTA-Mellvaine 缓冲溶液(0.02 ol/L);称取60.5g乙二胺四乙酸二钠放人1625mL mo Mell lvaine缓冲溶液(5.7)中,使其溶解,然后用纯水5倍稀释,混匀 5.9乙睛-乙酸溶液(9 );量取90 十l ml .乙腊与10mL乙酸混合 5.10甲酸水溶液(0.1%) 准确吸取1mL甲酸于1000ml容量瓶中,用水稀释并定容至1000mL 5.11混合标准储备液(1004g/ml) );分别称取19种适量的兽药标准品(5.2),用甲醉溶解配制成19种 兽药浓度均为100 的混合标准储备液 04g/mL 混合标准储备液应在 18 C冰箱中保存,有效期3个月 5.12混合标准工作液(1g/mL) ):准确吸取混合标准储备液(5.11)10m转移至1000mL容量瓶中 用甲醇定容至刻度线,配成14g/ml .混合标准工作液 混合标准工作液应在4 下保存,有效期1周 5.13爪代同位素内标储备液(100g/mL);称取冗代诺氟沙星、爪代环丙沙星,爪代恩诺沙星标准品 5.2),用甲醇溶解配制成3种内标物浓度均为100 04g/mL的标准储备液 尔代同位素内标储备液应在 C冰箱中保存,有效期3个月 5.14混合内标工作液(5g/ml 和lg/mL):准确吸取适量爪代同位素内标储备液(5.13),用甲醉稀 释配成5g/mL和1g/ml L的内标工作液 混合内标工作液应在4下保存,有效期1周 5.15复溶液:准确吸取6.6m的磷酸以及7.4mL的三乙胺与1000mL的水混合,取85m混合后 的溶液与15ml.乙腊混合 n atersOasisPRiMEHLB60 5.16HlLB亲水/油平衡)固相萃取小柱:如wat ml固相萃取柱,或 mg 功能相当者 5.17滤膜,0.22m如亲水PTFE滤膜或相当者 5.18有机肥料空白试样;不含待测的19种兽药残留的有机肥料 注:也可以是经检测空白值在检出限以下的有机肥料样品,并经过二至三次提取(见8.2)后于105烘干至与待测 样品水分相近 6 仪器设备 6.1通常实验室仪器 6.2试验筛;孔径1.00mm和2.00 mm 6.3高效液相色谱串联质谱仪:配有电喷雾离子源(ES) /min20L/n 6.4氮吹仪;氮气流量1L/ min;水温控制室温十5C90C(可调控 6.5天平;感量0.1mg 6.6离心机:转速不低于4000r /min 6.7振荡器 6.8pH计;测量精度士0.02 6.9固相萃取装置
GB/40462一2021 试样制备 按照GB/T8571规定进行 试样制备时应将样品研磨至全部通过1.00mm试验筛,若样品很难 研碎,可研磨至全部通过2.00mm试验筛 试样置于4下避光保存 试验步骤 8.1平行试验 样品测定和空白试验均平行做两份试验 8.2提取 称取(2.00士0.02)g试样(精确至0.001g)于50mL离心管中,加人1004L的54g/mL混合内标 工作液(5.14)混匀,再加人5mlNa,EDTA-Mellvaine缓冲溶液(5.8),混匀后再加人20ml乙睛-乙酸 溶液(5.9),在振荡器上振摇20min,在4000r/min转速下离心10min,保留上清液A,用于兽药含量 的测定 8.3净化 取2ml上清液A过3ml固相萃取小柱(5.16),保持约每秒一滴的流速,准确量取1ml流出液 再过0.22Mm滤膜,待上机测试 8.4基质匹配标准曲线的制备 8.4.1外标基质匹配标准溶液制备 取有机肥料空白试样(5.18),按8.2和8.3规定的步骤处理,在洗脱液中加人混合标准工作液 5.12),配置浓度为0.0104g/mL,0.0204g/ml、0.0504g/ml0.1004g/ml,0.1504g/ml及 0.2004g/mL的系列标准曲线工作溶液,用液相色谱串联质谱仪测定(测定条件见8.5) 以定量离子的 峰面积为纵坐标,标准溶液质量浓度为横坐标,绘制基质匹配标准曲线 8.4.2内标基质匹配标准曲线制备 取有机肥料空白试样(5.18),按8.2和8.3规定的步骤处理,在洗脱液中加人混合标准工作液 G.12)和混合内标工作液(G.1I),配成浓度为0o0绍/ml.0.020g/'mL.0.050E/ml.0.00闪8/mL 0.1504g/ml及0.2004g/ml的系列基质匹配标准溶液(内标浓度为0.010g/mL),用液相色谱串联 质谱仪测定 氧氟沙星和诺氟沙星以冗代诺氟沙星(5.2)为内标;环丙沙星以爪代环丙沙星(5.2)为内 标;恩诺沙星以策代恩诺沙星(5.2)为内标 以诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星的定量离子的 峰面积和相对应内标物的定量离子峰面积的比值为纵坐标,标准溶液质量浓度为横坐标,绘制内标基质 匹配标准曲线 8.5测定条件 8.5.1色谱参考条件 推荐的色谱参考条件如下 a 色谱柱:C柱,如ThermoHyperslGoLDaQ,100mm×2.1mm(G.d.).l.9pm,或相同分离 功能色谱柱;
GB/T40462一202 b 色谱柱温度:30; 流动相:A相为甲醇,B相为0.1%甲酸水溶液(5.10); c 流速:0.4mL/min: d) 梯度洗脱;梯度洗脱条件见表1 e 进样体积:2L f 表1流动相梯度洗脱条件 4 时间 流动相A 流动相 % min 0,0 95 95 1.0 3.o 20 8o 4.0 20 8o 4.5 30 70 5.5 70 30 6.9 70 30 7.0 95 9.0 95 8.5.2质谱参考条件 推荐的质谱条件如下 a 离子源:电喷雾离子源(ESI); b 扫描方式:正离子扫描; c 检测方式:选择反应监测; d 喷雾电压:3800V; 离子传输管温度:350C; 氮气作为鞘气和辅助气,鞘气流速0.42L/min，辅助气流速1.42L/min; 氧气作为碰撞气，碰撞压力为0.2Pa; 8 测试物质母离子、定量/定性离子及相应碰撞能量和锥孔电压见表2 h 表219种兽药的母离子、定量/定性离子及相应碰撞能量和锥孔电压 碰撞能量 锥孔电压 兽药 简写 母离子(m/产物离子(m/e)° eV AMT 152.0o 135.1/93.l 14/24 金刚烧胶 34 SPD 250.0 156.0/108.0 16/25 30 磺胺毗晓 磺胺哒嗓 SDZ 251.0 156.,0/92.0 15/27 30 瞒胺甲恶陛 SMX 254.0 156.0/92.0 16/26 30 磺胺嚷陛 STZ 256.0 92.0/156.0 25/15 30 碱胺甲基吮 SMI 265.0 156.0/92.0 15/28 30
GB/T40462一2021 表219种兽药的母离子,定量/定性离子及相应碰撞能量和锥孔电压(续) 碰撞能量 锥孔电压 简写 兽药 母离子(m/z产物离子(m/z eV 碱胺二甲异恶陛 SIZ 268.0 156.0/92.0 13/28 30 碱胺甲嚓二陛 SMT 271.0 92.0/156.0 30/15 30 碱胺二甲喘唛 SMZ 279,1 186,0/92.0 16/28 30 30 磺胺-6-甲氧嗜 SMM 281.0 156,0/92.0 22/35 sM 碱胺对甲氧喘呢 30 281.0 156.0/92.0 18/32 SMPz 281.0 156.0/92.0 15/30 30 碱胺甲氧哒味 sCP 285,1 156.0/92.0 15/28 30 碱胶氯哒嗓 碱胺邻二甲氧密哧 SD0 31l.0 156.0/92.0 15/32 30 碱胺间二甲氧嗜 SDM 31l.1 156.0/92.0 20/32 30 诺氟沙星 NFC 320.1 276.1/233.0 20/25 32 CFC 32 环内沙星 332.2 314.1/288.1 22/18 恩诺沙屋 EFC 22/20 32 360, 316.1/245 o)Fc 261.1/318.1 25/2o 31 氧氟沙星 362.1 诺氟沙星-d NFC-d 325 307 22 340 21 环丙沙星-d CFC-d 322 恩诺沙星-d EFC-d 365 321 定量离子及相应碰撞电压由加粗字体标出 8.6定性定量方法 8.6.1定性方法 在相同实验条件下,被测样品中待测物的保留时间与基质匹配标准溶液中对应的保留时间偏差在 士2.5%之内,且被测样品中待测物的离子相对丰度与浓度相近的基质匹配标准溶液中的对应离子相对 丰度偏差不超过表3规定的范围,则可判定为样品中存在对应的待测物 表3离子相对丰度的允许偏差范围 相对丰度a 允许偏差 a50 十20 50>a>20 士25 20>a>10 士30 as10 士50 8.6.2 定量方法 取试样溶液和基质匹配标准溶液,做多点校准,外标法和内标法定量计算 诺氟沙星、环丙沙星、恩
GB/T40462一202 诺沙星、氧氟沙星(共4种物质)采用内标法定量(或外标法);金刚婉胺、磺胺毗、磺胺哒嗦、磺胺甲恶 瞠、,磺胺嚓、,磺胺甲基啼、磺胺二甲异恶陛、碱胺甲嚓二瞠、磺胺二甲嗜、磺胺-6-甲氧唁畦、磺胺甲 氧哒嗓,磺胺对甲氧嗜、,磺胺氯哒嗦、磺胺邻二甲氧嗜嚏、磺胺间二甲氧密哧(共15种物质)采用外标 法定量 试样溶液和基质匹配标准溶液中各兽药的响应值均应在仪器检测的线性范围之内,超出线性 范围需稀释进样测定,低于线性范围应按8.2和8.3步骤提取净化后,准确量取2.5ml流出液,40O 水浴氮气吹干后用1ml复溶液(5.15)溶解,过0.22m滤膜,待上机测试 19种兽药残留及3种内标 混合标准溶液总离子流图见附录B的图B.1,19种兽药残留及三种内标混合标准溶液选择离子流图见 图B.2,空白有机肥料样品中添加回收的选择离子流图见图B.3 8.7空白试验 除不加试样外,按(8.2一8.,5)规定的步骤与测定试样同时进行 试验数据处理 试样中被测兽药残留量w,以质量分数计,数值以毫克每千克(mg/ke)表示,内标法按式(1)计算 外标法按式(2)计算 计算结果应扣除空白值 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的 算术平均值表示,保留到小数点后两位 0， w内标 m1 式中 -用内标法测得的试样中被测物残留量,单位为毫克每千克(mg/kg); w'内标 内标法(被测物与内标物峰面积之比- 浓度间线性关系)计算的样品制备液中兽药物 p 残留浓度,单位为毫克每升(mg/L); 试样溶液最终定容体积,.单位为毫升(m) 试样溶液所代表试样的质量,单位为克(g) mn p'×A×V .(2 w'外标 A，×mn 式中 用外标法测得的试样中被测物残留量,单位为毫克每千克(mg/kg); w外标 基质标准工作溶液中被测物的质量浓度,单位为微克每毫升(4g/mL); 试样溶液中被测物的色谱峰面积 基质标准工作溶液中被测物的色谱峰面积; 1 y 试样溶液最终定容体积,单位为毫升(mL); 试样溶液所代表试样的质量,单位为克(g) n 10 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值(百分率),应不大于 表4中的相应数值
GB/40462一2021 表4测试结果允许差 被测物含量范围w 平行测定结果的精密度 nmg/kg <0.25 20 0.25 10 试验报告 1 试验报告中应包含样品名称,样品规格型号、标准名称和编号、检测日期、检测条件、检测数据等内 容,格式见附录C
GB/T40462?2021 ? A ) ???? ????A.1 A.1???? ? д CAS ? AMT 768-94-5 amantadine ? SPD l44-83-2 sulfapyridine ? sDz 68-35-9 sulfadiazine SMX 723-46-6 ?? sulfamethoxazole ?± STZ 72-14-0 sulfathiazole ?? 127-79-7 sulfamerazine SMI ? SIZ 127-69-5 sulfisoxazole ?? SMT 144-82-1 sulfamethizole sMZ ?? 57-68-1 sulfamethazine SMM 1220-83-3 ?-6- sulfamonomethoxine 651-06-9 ?? SM sulfamethoxvdiazine SMPZ 80-35-3" ?? sulfamethoxypyridazine ?? SCP 80-32-0 slfachloropyridazine ?? SIO 2447-57-6 sulfadoxine 4-amino-N-(4,6-dimethoxypyrimidin sDM 155-91-9 ? 2-y)benzenesulfonamide ?? NFC 70458-96-7 norfloxacin ? CFC 85721-33-1 ciprofloxacin EFC 93106-60-6 ?? enrofloxacin OFc 82419-36-1 ? ofloxacin 1-2HH5)Ethyl6-fluoro-4-oxo-7 NFCd 1015856-57-1 ??-d 1piperazinyl)-l,4-dihydro-3 quinolinecarboxylicacid CFCd 1216659-54-9 ?-d Ciprofloxacin-d8hydrochloridehydrate EFCd 173021-92-5 Enrofloxacinr-d5 ??-d
GB/40462一2021 附录 B 资料性 典型谱图 19种兽药及3种内标混合标准溶液总离子流图 B.1 19种兽药及3种内标混合标准溶液总离子流图见图B1 RT000.910 国 585 369 选 mi 图B.119种兽药及3种内标混合标准溶液(0.020g/mL)的总离子流图 B.219种兽药及三种内标混合标准溶液选择离子流图 !9种兽药及三种内标混合标准溶液选择离子流图见图B.2
GB/T40462?2021 000 a24an05nn22233? a22dn7da 45 ? 1490931111115410 27665765 mn ?? 4 g39T01Ce 152165 2225T01 4n49951 055?5g?717277 752 ??? 885165 7701 2a ?± 42237g ?? ?? -#f ??? 0520.781O6 15014204 63M435 nn4n 3402 ?? ssn 720740 O27O42055031161271601209253 2S1304 343350391 66692 ?-6- ?? ? 061o124112e1?230720303p4 440 s?sm7779nn ??? 747?n? ?? ?? H mIn ?B.219?3????(0.050g/mL.)?? 0
GB/40462一2021 T0OmaD 诺氟沙星 14ne77da2da USU5E 2UA54 诺氟沙星-d5 em 环丙沙星 说u 环丙沙星-d8 地 Ee aD31gmom2nn 4oAD4Ao 恩诺沙星 0310R409100118 3253390 2844424E85052155EE624 68371777S1824837m B2的22223的 氧氟沙星 3B24质3785B8 恩诺沙星-d5 平掉+ 图B.219种兽药及3种内标混合标准溶液(0.050其g/mL)的选择离子流图(续 B,3空白有机肥料样品中添加回收的选择离子流图 空白有机肥料样品中添加回收的选择离子流图见图B.3 金刚炕胶 o00050uo0 2的m 碱肢毗呢 当般5M4s赖s3197躺n路4e e送进n送n 5O 碱胺哒味 3的424路4的4s的s3 301334 585O53 42657681706737758778 81440 on丝丝3丝3G3E 碱胺甲恶呻 D4线an 横胺嚷陛 e0na的1M1经1的2的的3u315n s的5M012nt0M13707M30A70线d 56T9 碱胺甲基嗜唉 131毕24基e主红5 7.127257的2743 碱胺二甲异恶咩 岂牛 /min 图B.3空白有机肥料样品中添加回收的选择离子流图(0.25mg/kg 1
GB/T40462?2021 RT0o-gm 527 ??? 00000 5056146 237 23.043223563714.O7419 8nwn 1iO10o ?ζ g no. n 4942 479 663 m 12833533 101O13 3D33530371 77 ??? ?-6- ?? e3ss OO081094 40944O48 715 B7P 191m1 22293133o3O 77O7D0m ??? 5e 1015620727027133735 52050 a60731761727 ?? ? 774A70o4200674 ?? mmn RT000-90 ??-d5 ?ew 46nn eRn? 4.33 ? oaa10n1essn2e345354n31515640n 7217475enn0M ?-d8 R 43M3D3624204640n ?? 333D335e 65o75i6n5 ? 4467270e73 O33051 413434467477 0no2o191n02M203723M033n 124?0 ?n0? ??-d5 4?? , ?4?????? min ?B.3?л?????(0.25mg/kg)( 12
GB/40462一2021 录 附 C 资料性 试验报告示例 样品名称:有机肥料 规格型号;×××× 标准名称和编号;有机肥料中19种兽药残留量的测定液相色谱串联质谱法(GB/T××××一 ××××) 检测日期:××××年××月××日 检测条件;仪器型号(××××),实验室温度湿度等 检测结果 样品名称××× 说明 兽药成分 测定值1 测定值2 平均值" 允许差/回收率(%" 金刚烧胺(AMT) 磺胺毗碗(SPD) 碱胺哒嗦(SDZ 瞒胺甲恶幽(SMX 碱胺嚓陛(STZ 磷胺甲基嗜(SMI 碱胺二甲异恶陛(SIZ 碱胺甲嚓二哗(sMr) 碱胶二甲喘唉(SMZ) 碱胺-6-甲氧喘碗(sMM) 瞒胺对甲氧嗜(SMD 磺胺甲氧哒嗓(SMPZ 碱胺氯哒嗦(SCP) 磺胺邻二甲氧(SD(O) 碱胶间二甲氧喘碗(SDM) 诺氟沙星(NFC) 环丙沙星(CFy 恩诺沙星EFC 氧氟沙星(OFC 观察到的异常现象 至少两次以上的精密度范围内测定结果的算术平均值 加标回收率或标准物质比对率 13

有机肥料中19种兽药残留量的测定液相色谱串联质谱法GB/T40462-2021

有机肥料在农业生产中得到广泛使用，而其中可能存在的兽药残留问题也引起了人们的关注。为了保障土壤、作物和人类健康，必须对有机肥料中的兽药残留进行检测。根据国家标准GB/T40462-2021，本文将介绍一种适用于有机肥料中19种兽药残留量测定的液相色谱串联质谱法。

一、试剂与仪器

试剂：乙腈、水、氢氧化铵、甲酸、乙酸乙酯、甲酸乙酯、二氯甲烷、乙酸乙酯、硫酸铵、氨水等。

仪器：液相色谱质谱联用仪、样品制备仪（如加压提取仪）、电子天平等。

二、样品的制备

将样品称取1g，加入50ml甲酸/乙酸乙酯混合溶液中，使用加压提取仪进行提取，离心分离。将上清液转移到10ml量瓶中，加满乙腈至刻度，摇匀即得待测样品溶液。

三、测定过程

1. 色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18（4.6mm×100mm，3.5μm），保护柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18（4.6mm×12.5mm，3.5μm）。

2. 流动相A：0.1%甲酸溶液；流动相B：乙腈。

3. 梯度洗脱程序：

4. 用测定过程中的样品溶液进行上述梯度洗脱程序的进样和分析，检测各兽药残留量。

有机肥料中19种兽药残留量的测定液相色谱串联质谱法的相关资料

和有机肥料中19种兽药残留量的测定液相色谱串联质谱法类似的标准

GB/T32951-2016

有机肥料中土霉素、四环素、金霉素与强力霉素的含量测定高效液相色谱法

2022/10/3 13:19:06 现行

GB/T40462-2021

有机肥料中19种兽药残留量的测定液相色谱串联质谱法

2022/7/13 12:40:59 现行