多肽抗氧化性测定DPPH和ABTS法

多肽抗氧化性测定DPPH和ABTS法

国家标准 GB/T39100一2020 多肽抗氧化性测定 DPPH和ABIS法 Determinationofantioxidantactiityforpolypeptides DPPHandABTSmethods 2020-09-29发布 2021-04-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标涯花警理委员会国家标准
GB/39100一2020 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准由全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC387)提出并归口 本标准起草单位:河北科技大学、河北农业大学,北京工商大学,华测检测认证集团股份有限公司、 北京萨姆伯科技有限公司,武汉明了生物科技有限公司浙江东杰生物科技有限责任公司、市场监督管 理总局食品审评中心,检验检疫科学研究院 本标准主要起草人:王志新、田益玲、贾英民、马爱进、郝帅、彭海、刘文秋、杨志坚、郑刚、姜雨、 邹明强、孙宇、齐小花
GB/39100一2020 多肽抗氧化性测定DPPH和ABIS法 范围 本标准规定了DPPH和ABTS法测定多肽抗氧化性能的方法 本标准适用于多肽体外抗氧化性能的测定 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 多肽polypeptides 介于氨基酸和蛋白质之间,由2个或2个以上氨基酸通过肽键连接形成的一类化合物 3.2 抗氧化能力antiosidantactivitsy 消除自由基的能力.以待测多肽半数清除量与谷胧甘肚半数清除量的比值(AO值)来表示 缩略语 下列缩略语适用于本文件 ABTs;2,2-联氮-二3-乙基-苯并嚷幽-6-磺酸)二铵盐[2,2'-azino-bis3-ethylbenzothiazoline-6- sulfonicacid)diammoniumsalt] AO;抗氧化能力(antioxidantactivity) DPPH:1,1-二苯基-2-三硝基苯阱(1,l-dipheny-2picrylhydrazyl DMSO:二甲基亚硕(dimethylsulfoxide ECa;半数清除量(halfmaximaleflectiveconcemtraion) 试剂或材料 除非另有说明,本方法所用的试剂均为分析纯,试验用水为GB/T6682规定的一级水 5.1谷胱甘肽 L还原型,纯度>98%
GB/T39100一2020 5.2过硫酸钾 分析纯 5.3二甲基亚讽 分析纯 5.4DPPH溶液 称取DPPH5.0mg,适量无水乙醇溶解,避光超声使其充分溶解,再用无水乙醉定容至 100.0ml， 配制成50.04g/mL.的DPPH溶液 该溶液应现配现用 5.5ABrS溶液 称取ABTs200.0mg,过硫酸钾34.4g,溶于50.0ml燕僧水,摇匀,室温避光放置24h后,作为 ABTS母液 取适量ABTS母液,用95%乙醇稀释至吸光度值在0.70土0.02内(OD;a4),作为ABTS测 定溶液,该溶液应现配现用 注:可以根据分光光度计的灵敏度配制合适浓度的ABTS测定溶液 仪器设备 6 6.1分光光度计:;波长范围为400nm一800nm,吸光度值精确至0.001 6.2电子天平;感量为0.000lg DPPH自由基清除法 7.1原理 DPPH是一种暗紫色棱柱状结晶,在无水乙醉溶液中呈深紫色,DPPH自由基在可见光区517nm处 具有较强吸收峰 该方法通过DPPH提供的1个稳定的DPPH自由基与抗氧化性多肽提供的1个 电子配对结合,使DPPH自由基的特征性紫色消失,变为无色或浅黄色,采用紫外可见分光光度计测 定反应后的吸光度 通过与谷胱甘肽的清除能力进行比较,采用相对半数清除量来判定多肽的抗氧化 能力AO值 7.2试验步骤 7.2.1样品制备 7.2.1.1待测样品溶液 称取多肽样品10.0mg,水溶性好的样品采用蒸僧水溶解与定容,水溶性差的样品先溶于DMSsO 再用蒸水定容,定容至1.0ml,充分混合均匀,配制成10.0mg/mL的母液 用燕水将母液稀释至 不同倍数,得到不同浓度的待测样品溶液 待测样品溶液浓度的选择应使其清除率在35%一65%,且 线性方程的R'>0.9500. 7.2.1.2谷胱甘肽溶液 称取L-还原型谷胱甘肽10.0mg,蒸水定容至1.0mL,充分混合均匀,配制成10.0mg/ml的母 液 用蒸憎水将母液稀释至不同倍数,得到不同浓度的谷胱甘肽溶液 谷胱甘肽溶液浓度的选择应使
GB/39100一2020 其清除率在35%~65%,且线性方程的R'>0.9500 7.2.2测定 7.2.2.1对照组 取3支试管,分别编号为1、2,3号,每支试管中按照表1的组合添加试剂 表1试剂添加量 1号(A. 2号(A. 3号(A. 溶液名称 DPpH溶液 3.0ml 3.0ml 谷胱甘肽溶液 1.0mL 1.0ml 样品溶剂溶液 l.0ml 无水乙醇溶液 3.0ml 在1号试管中加人3.0mLDPPH溶液和1.0mL谷胱甘肽溶液,作为试验组(A,);在2号试管中 加人1.0mL谷胱甘肽溶液和3.0ml无水乙醇溶液,作为对照组(A.);在3号试管中加人3.0mL DPPH溶液和1.0mL样品溶剂溶液,作为空白组(A) 分别充分混合均匀后,室温避光反应30min. 于波长517nm条件下,用紫外分光光度计测定其吸光度值(样品溶剂调零校准). 7.2.2.2样品组 用待测样品溶液代替谷胱甘肽溶液,其他操作同7.2.2.1 7.2.3试验数据处理 按式(1)计算 ×100% P-(1-- A 式中: 清除率; A 待测溶液与DPPH溶液混合液的吸光度; 待测溶液与无水乙醉溶液混合液的吸光度; A -DPPH溶液与样品溶剂溶液混合液的吸光度 A 以待测溶液浓度的自然对数值为横坐标,以清除率为纵坐标,建立待测溶液浓度自然对数值与清除 率的线性方程(R'>0.9500),计算半数清除量EC,按式(2)计算多肽样品的抗氧化能力Ao值 ECS AO ECR) 式中: 抗氧化能力 AO EC(S) -多肽样品的半数清除量,单位为毫克每升(mg/L); EC(R) -谷胱甘肽的半数清除量,单位为毫克每升(mg/L) 计算结果以平行测定值的算术平均值表示,保留三位有效数字 ABIs'自由基清除法 8.1原理 ABTS经氧化后生成较稳定的蓝绿色ABTs自由基,在可见光区734nm处有最大吸收峰,抗氧
GB/T39100一2020 化性多肽与ABTs自由基反应后使其褪色,在734nm处的吸光值降低,采用紫外可见分光光度计测 定反应后的吸光度 通过与谷胱甘肽的清除能力进行比较,采用相对半数清除量来判定多肽的抗氧化 能力Ao值 8.2试验步骤 8.2.1样品制备 8.2.1.1待测样品溶液 称取多肽样品10.0mg,水溶性好的样品采用蒸憎水溶解与定容,水溶性差的样品先溶于DMSO 再用蒸僧水定容,定容至1.0mL,充分混合均匀,配制成10.0mg/ml.的母液 用95%乙醇将母液稀释 至不同倍数,得到不同浓度的待测定溶液 待测样品溶液浓度的选择应使其清除率在35%65%,且 线性方程的R=>0.9500. 8.2.1.2谷胱甘肽溶液 称取L还原型谷胱甘肽10.0mg,燕僧水定容至1.0mL,充分混合均匀,配制成10.0mg/mL的母 液 用95%乙醇将母液稀释至不同倍数,得到不同浓度的测定溶液 谷胱甘肽溶液浓度的选择应使其 清除率在35%65%,且线性方程的R'>0.9500 8.2.2测定 8.2.2.1对照组 取2支试管,分别编号为1,2号,每支试管中按照表2的组合添加试剂 表2试剂添加量 溶液名称 1号(A, 2号(A ABTS溶液 3.6ml 3.6ml 谷胱甘肽溶液 0.4ml 样品溶剂溶液 0.4ml 在1号试管中加人3.6mlABTs溶液和0.4m谷胱甘溶液,作为试验组(A,);在2号试管中 加人3.6mLABTs溶液和0.4mL样品溶剂溶液,作为空白组(A);分别充分混合均匀后,室温避光反 应5min,于波长734nm条件下,用紫外分光光度计测定其吸光度值(样品溶剂调零校准) 8.2.2.2样品组 用待测样品溶液代替谷胱甘肽溶液,其他操作同8.2.2.1 8.2.3试验数据处理 按式(3)计算 1A，一A .(3 P尸=e ×100% A， 式中: P 清除率; A -ABTS溶液与样品溶剂溶液混合液的吸光度;
GB/39100一2020 -待测溶液与ABTS溶液混合液的吸光度 以待测溶液浓度的自然对数值为横坐标,以清除率为纵坐标,建立待测溶液浓度自然对数值与清除 率的线性方程(R'>0.9500),计算半数清除量ECa,按7.2.3中的式(2)计算多肽样品的抗氧化能力 AO值 计算结果以平行测定值的算术平均值表示,保留三位有效数字 重复性 在重复性条件下获得的不低于3次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的20%

多肽抗氧化性测定DPPH和ABTS法GB/T39100-2020

什么是多肽抗氧化性测定？

多肽是由两个或多个氨基酸残基连接而成的生物大分子，其抗氧化性能与人体健康密切相关。多肽抗氧化性测定是评估多肽的抗氧化性能的方法。

DPPH法测定多肽抗氧化性

DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）法是一种常用的抗氧化性测定方法。该方法利用DPPH自由基的吸收光谱变化来评估样品的抗氧化性能。在测定中，将DPPH自由基与多肽样品混合后，通过比较DPPH自由基的吸收光谱变化来评估多肽的抗氧化性能。

ABTS法测定多肽抗氧化性

ABTS（2,2'-联氨基二(4-甲基-6-叔丁基苯)）法是另一种常用的抗氧化性测定方法。该方法利用ABTS离子自由基的吸收光谱变化来评估样品的抗氧化性能。在测定中，将ABTS离子自由基与多肽样品混合后，通过比较ABTS离子自由基的吸收光谱变化来评估多肽的抗氧化性能。

GB/T39100-2020标准中的应用

GB/T39100-2020是中国国家标准化管理委员会发布的《食品安全国家标准 食品中多肽含量的测定》标准。该标准中规定了多肽含量的测定方法，其中包括使用DPPH法和ABTS法测定多肽的抗氧化性能。

结论

多肽抗氧化性测定是评估多肽抗氧化性能的重要方法。DPPH法和ABTS法是常用的多肽抗氧化性测定方法，它们在GB/T39100-2020标准中也得到了应用。

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