GB/T27623.1-2011
渔用抗菌药物药效试验技术规范第1部分：常量肉汤稀释法药物敏感性试验
Pharmacodynamictesttechnicalspecificationforaquacultureantimicrobialagent-Part1:Antibioticssusceptibilitytestofmacro-brothdilutionmethod
- 中国标准分类号（CCS）B50
- 国际标准分类号（ICS）11.220
- 实施日期2012-04-01
- 文件格式PDF
- 文本页数8页
- 文件大小318.44KB
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渔用抗菌药物药效试验技术规范第1部分：常量肉汤稀释法药物敏感性试验
国家标准 GB/T27623.1一2011 渔用抗菌药物药效试验技术规范 部分常量肉汤稀释法 药物敏感性试验 Pharacodynamictesttechnicalspeeificationforaquacultureantimierobial agent一Part1;Antibiotiessuseeptibiltytestofmaer-brothdlutionmethod 2011-12-30发布 2012-04-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/T27623.1一2011 前 言 GB/T27623《渔用抗菌药物药效试验技术规范》分为两个部分: -第1部分:常量肉汤稀释法药物敏感性试验; 第2部分;人工感染防治试验
本部分为GB/T27623的第1部分
本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草
本部分由农业部提出
本部分由全国水产标准化技术委员会(SAC/Tc156)归口 本部分起草单位
水声科学研究院黄海水产研究所 本部分主要起草人;刘淇、李健、王群、戴芳钼
GB/T27623.1一2011 渔用抗菌药物药效试验技术规范 第1部分常量肉汤稀释法 药物敏感性试验 范围 GB/T27623的本部分规定了渔用抗菌药物的常量肉汤稀释法药物敏感性试验所需的试剂和材 料、仪器设备,操作步骤和质量控制
本部分适用于渔用抗菌药物的常量肉汤稀释法药物敏感性试验
规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的
凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件
凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 兽药典(2010年版)农业部公告第1521号 试剂和材料 3.1化学试剂 除非另有说明,本部分使用确认为分析纯的化学试剂
3.2实验用水 除非另有说明,应符合GB/T6682中三级水的规格
3.3Mueller-Hinton琼脂(M-H琼脂)培养基 按产品说明用干粉培养基制备平板,其中用于弧菌试验的M-H琼脂培养基中需添加1.5%的氯 化钠
rrHinton肉汤(MH肉汤)培养基 3.4Mueller 按产品说明用干粉培养基制备M-H肉汤,其中用于弧菌试验的M-H肉汤培养基需添加氯化钠至 终浓度为1.5%
每一批M-H肉汤培养基的pH值在室温下应为7.2~7.4,应含有20mg/L25g/L Ca和10mg/L12.5mg/LMg+
如果采用原子吸收光谱法等方法测得培养基Ca十和Mg含量不 够时,应向培养基中漆加适量无菌的c”租M”游液(镁离子和钙离子溶液的制备方法见附录A);漆 加了Ca十和Mgt的M-H肉汤培养基不可再次高压灭菌
3.50.85%无菌生理盐水 称取8.50g(精确到0.01g)分析纯氯化钠,加人1I蒸水溶解后121C15min高压灭菌
GB/T27623.1一2011 3.6实验菌株 3.6.1实验菌株应选用来自国家级微生物菌种保藏中心的标准致病菌株或具有资质的菌种保藏机构 提供的分类地位明确的致病菌株,也可以使用临床分离的致病菌株,使用临床分离的致病菌株时应至少 鉴定至属
其中质控菌株为荧光假单胞菌(AS1.180)和副溶血弧菌(AS1.1614),质控菌株应来自国家 级微生物菌种保藏中心或具有资质的菌种保藏机构
3.6.2 日常使用的质控菌株荧光假单胞菌应在M日琼脂上副溶血弧菌应在添加1.5%氧化钠的 M-H琼脂上于4C一8C的冷藏箱中保存;质控菌株的使用代次为3代14代;质控菌株应至少一个 月更换一次,由冻干或超低温冷冻保存菌种移种或购买新菌种 3.7质控药物;盐酸土霉素,含量95%以上,应符合《兽药典(2010年版)》要求
仪器设备 4.1恒温箱;可满足28C士1C
4.2 移液器;量醒40l一200lL.I0,l~l00,Ll0Al.一500L 4. 3 无菌操作台;可满足无菌要求的洁净工作台,生物安全柜或无菌室等
分析天平:精确至1mg
4 4. 操作步骤 5.1抗菌药物母液的制备 抗菌药物母液的浓度 抗菌药物母液的浓度应至少为最高测试浓度的10倍,但对于某此溶解性低的抗菌药物可以制备较 低浓度的母液
5.1.2溶剂和稀释液 用于制备抗菌药物母液的溶剂和稀释液见附录B
除燕憎水可高压灭菌外,其余应采用0.224mm 微孔滤膜过滤除菌
母液的制备 5.1.3 称取不低于0.10运抗菌约物,稍确到1mg;在无菌条件下使用瓦..2中落剂和稀释液配制抗菌约 物母液
5.2抗菌药物药液浓度的建立 抗菌药物药液的浓度按倍比稀释来建立,试验要在无菌条件下于适宜的玻璃试管中进行
试验中 取10支试管排成一列,在第1管中加人适量的渔用抗菌药物母液和M-H肉汤总体积以2ml10mL 为宜),使其浓度为试验的最高浓度
第210管均加人第1管总体积二分之一的M-H肉汤
第1管 混匀后取二分之一的量加人第2管中,混匀后从第2管中取二分之一的量加人第3管中,依次类推到第 8管,混匀后第8管吸取二分之一的量弃掉,第9,10管不加药物,第9管作为细菌生长情况对照,第 10管作为无菌控制对照
GB/T27623.1一2011 3 55. 菌液接种 5.3.1起始培养菌落 接种的菌落由新鲜的M-H琼脂培养基平板划线待测菌的单菌落来制备,孵育温度为28C,除非是 缓慢生长菌株,否则平板培养时间不应超过24h
5.3.2接种菌液的制备 接种菌液通过在0.85%无菌生理盐水中,乳化至少3个起始培养单菌落来制备
用0.85%无菌生 理盐水校正菌液浓度与0.5麦氏单位标准比浊管相同标准比浊管见附录C),即菌液浓度为 1×10'CFU/ml2×10'CFU/nmL
然后用M-H肉汤稀释至所需浓度
菌液接种 5.3.3 菌液接种后的最终浓度约为5×10'CFU/ml
一旦接种菌液在M-H肉汤中被稀释,则15minm 内,接种菌液应加人每个试管中,但作为无菌控制的试管除外 5.4孵育 接种菌液后应尽快放人28C恒温箱中孵育,标准孵育时间为24h,但对缓慢生长菌株(如爱德华氏 菌)孵育时间为48h. 读取试验结果 抗菌药物敏感性试验结果用最小抑菌浓度(minimuminhibitoryconcentration,MIC)表示,即肉眼 观察试管中细菌生长完全被抑制时的最小抗菌药物浓度记录为MIC;同时测定质控药物对质控菌株 的MIC
质量控制 6.1最小抑菌浓度(MIc)的控制限值 根据实验菌株的特性,选用荧光假单胞菌AS1.180)或副溶血弧菌(AS1.1614)为质控菌株,使用 盐酸土霉素为质控药物
盐酸土霉素对荧光假单胞菌的MC质控范围均为2.0mg/L8.0mg/L;对 副溶血弧菌的MIC质控范围均为1.0mg/儿~4.0mg/L;当质控药物对质控菌株的MIC超出质控范围 时,MIC结果需舍弃重做
6.2污染和细菌生长控制 无菌控制的培养基试管出现污染或不含抗菌药物的试管细菌未见明显生长时需舍弃全部M1C结 果;任何一列(排)出现跳管现象时,该列(排)Mc结果应舍斧 结果报告 试验结果的报告包括受试药物对实验菌株的MIc,质控药物对质控菌株的MIc和实验菌株的名 称,来源、孵育时间
GB/T27623.1一2011 附 录A 规范性附录 镁离子和钙离子溶液的制备 将8.36区的MgC
6H,0溶解于100mL蒸榴水中Mg汁浓度为10mg/mL.)制成镁离子溶液 将3.68g的CaCl2H.0溶解于100ml燕僧水中(Ca+浓度为10mg/mL.)制成钙离子溶液
0.22um微孔滤膜过滤除菌后于4C保存
GB/T27623.1?2011 ? B 淶?? ??????? B.1??????? ? ?? ???濨 λ?,pH6.0,0.1mol/L λ?,pH6.0,0.1mol/L λ?pH8.0,0.1mol/1 λ?,pH8.0,0.1mol/ ù 95% ? ?? ? ?? ? ? ? λ?pH6.0,0.1mol/1 λ?pH6.0,0.1mol/1 ?? ??,0.10%,11.9mmol/I ? ? ??,10.0% ? λ?,pH6.0,0.lnmol ? ? ?ù,??ù 95% ? ù 0.05mol/ ?? ? ù λ?,pH6.0,0.1mol/L ??????? ???,μ1mol/L ?? ????? ? ? λ?pH7.2,0.1mol/I λ?pH7.2,0.1mol/1 ?? 0.04mol/L(1.5h2h) λ?,pH6.0,0.1mol/1 ?( ? ? ??? ? ? 2.5mol/L? 10%0.05nmol/L ?(??) ?:?????а??????塢?????? ,??,??,?,??,?,??,?,?,??,? ??,ù?ù?ù???,,η,, ,ù???,?ù,?(),ù,ù,ù?
GB/T27623.1一2011 c 附 录 规范性附录 标准比浊管 C.1用硫酸镇比浊管(0.5麦氏单位标准比浊管),标定接种菌液浓度
C.2比浊管制备方法;取0.048mol/L氯化镇(BaCl,)质量体积分数为1.175%的BaCl2H.O) 0.5mL,加到99.5mL的0.18mol/L硫酸(体积分数为1%)溶液中,制成标准比浊管
用光径为lem 的分光光度计测定吸光度来标定比浊管
0.5麦氏单位标准比浊管在625nm波长的吸光度应为 0.08一0.10
选管径与制备菌液试管相同的螺口试管,每管分装4ml6mL
将试管帽拧紧,放室温 暗处保存
比浊管用前在旋转振荡器上混匀
如出现较大颗粒,应更换比浊管
每个月更换比浊管或 复验比浊管的浊度
渔用抗菌药物药效试验技术规范第1部分：常量肉汤稀释法药物敏感性试验GB/T27623.1-2011
渔业生产中，抗菌药物的应用是一种重要的手段，但同时也带来了抗性菌株的产生和食品安全问题。为了保障渔产品质量和消费者健康，GB/T27623.1-2011标准规定了渔用抗菌药物药效试验技术规范第1部分：常量肉汤稀释法药物敏感性试验，以下简称“本试验方法”。本试验方法是一种常用的测定渔用抗菌药物药敏性的方法。
1. 试验原理
本试验方法采用常量肉汤稀释法，通过测定不同浓度抗菌药物对细菌的作用，得到最低抑菌浓度（MIC），从而判断细菌对抗菌药物的敏感性。
2. 试验步骤
本试验方法包括以下步骤：
- 准备试验菌株和培养基：选取已知抗菌药物敏感性的菌株，接种于适宜的培养基中。
- 制备抗菌药物溶液：按规定浓度制备抗菌药物溶液，通常为两倍MIC。
- 进行细菌的常量肉汤稀释：将细菌的培养物连续稀释至一定浓度，使每毫升含有10^5CFU/ml的菌落形成单位。
- 加入抗菌药物：在不同稀释程度的细菌悬液中分别加入抗菌药物溶液和控制菌株溶液，然后进行培养。
- 观察结果：记录各组的生长情况，测定最小抑菌浓度。
3. 结果判定
本试验方法根据MIC值来判断菌株对抗生素的敏感性，MIC值越小说明菌株对该抗生素越敏感。一般来说，MIC≤4μg/ml表示菌株对该药物敏感，MIC＞16μg/ml则表示菌株对该药物耐药。
总之，渔用抗菌药物药效试验技术规范第1部分：常量肉汤稀释法药物敏感性试验GB/T27623.1-2011是一种科学、规范的测定渔用抗菌药物药敏性的方法，可以保证渔产品质量和消费者健康。
渔业生产中，抗菌药物的应用是一种重要的手段，但同时也带来了抗性菌株的产生和食品安全问题。为了保障渔产品质量和消费者健康，GB/T27623.1-2011标准规定了渔用抗菌药物药效试验技术规范第1部分：常量肉汤稀释法药物敏感性试验，以下简称“本试验方法”。本试验方法是一种常用的测定渔用抗菌药物药敏性的方法。
1. 试验原理
本试验方法采用常量肉汤稀释法，通过测定不同浓度抗菌药物对细菌的作用，得到最低抑菌浓度（MIC），从而判断细菌对抗菌药物的敏感性。
2. 试验步骤
本试验方法包括以下步骤：
- 准备试验菌株和培养基：选取已知抗菌药物敏感性的菌株，接种于适宜的培养基中。
- 制备抗菌药物溶液：按规定浓度制备抗菌药物溶液，通常为两倍MIC。
- 进行细菌的常量肉汤稀释：将细菌的培养物连续稀释至一定浓度，使每毫升含有10^5CFU/ml的菌落形成单位。
- 加入抗菌药物：在不同稀释程度的细菌悬液中分别加入抗菌药物溶液和控制菌株溶液，然后进行培养。
- 观察结果：记录各组的生长情况，测定最小抑菌浓度。
3. 结果判定
本试验方法根据MIC值来判断菌株对抗生素的敏感性，MIC值越小说明菌株对该抗生素越敏感。一般来说，MIC≤4μg/ml表示菌株对该药物敏感，MIC＞16μg/ml则表示菌株对该药物耐药。
总之，渔用抗菌药物药效试验技术规范第1部分：常量肉汤稀释法药物敏感性试验GB/T27623.1-2011是一种科学、规范的测定渔用抗菌药物药敏性的方法，可以保证渔产品质量和消费者健康。
渔用抗菌药物药效试验技术规范第1部分：常量肉汤稀释法药物敏感性试验的相关资料
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- 渔用抗菌药物药效试验技术规范第2部分：人工感染防治试验GB/T27623.2-2011
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- 渔用抗菌药物药效试验技术规范第1部分：常量肉汤稀释法药物敏感性试验GB/T27623.1-2011
- 渔用抗菌药物药效试验技术规范第1部分：常量肉汤稀释法药物敏感性试验GB/T27623.1-2011
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