植物源产品中三聚氰胺、三聚氰酸一酰胺、三聚氰酸二酰胺和三聚氰酸的测定气相色谱-质谱法

植物源产品中三聚氰胺、三聚氰酸一酰胺、三聚氰酸二酰胺和三聚氰酸的测定气相色谱-质谱法

国家标准 GB/22288一2008 植物源产品中三聚氰胺、三聚暂酸一酰胺、 三聚酸二酰胺和三聚酸的测定 气相色谱-质谱法 Determinationofmelamine,ammeline,ammelideandcyanuric acidinoriginalplantproduets一GC-NMSmethod 2008-08-12发布 2008-12-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T22288一2008 前 言 本标准附录A、附录B和附录C均为资料性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本标准起草单位:检验检疫科学研究院、江苏出人境检验检疫局 本标准主要起草人:李淑娟、李刚、李建中、安娟陈冬东、蔡会霞、丁涛、蒋原、彭涛、代汉慧、唐英章
GB/T22288一2008 植物源产品中三聚氮腔、三聚氮酸一酰胺、 三聚酸二酰胺和三聚酸的测定 气相色谱-质谱法 范围 本标准规定了植物源产品中三聚氰胺、三聚夙酸一酰胺、三聚饥酸二酰胺和三聚饥酸测定的气相色 谱/质谱检测方法 本标准适用于小麦粉、玉米粉,大米粉中三聚氮胺、三聚酸一酰胺、三聚氮酸二酰胺和三聚饵酸含 量的测定 原理 试样用溶剂提取,提取液经氮吹仪浓缩后用硅婉化试剂衍生,使用GC-MS在选择监测离子模式下 对三聚氮胺、三聚氧酸一酰胺、三聚氮酸二酰胺和三聚氮酸进行检测和确证,外标法定量 试剂与材料 除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为蒸憎水或相当纯度的水 二乙胺 3.2乙睛;色谐纯 3.3毗院;纯度>99% 4 3 硅炕化试剂:含有1%三甲基一氯硅烧(TMCS)的N,0-双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA 3.5提取溶剂二乙胺-水-乙晴(10十40十50,体积比). 3.6三聚氢胺:纯度>99.0%.cAs编号:108-78-1 3.7三聚氛酸二酷胺;纯度>99.0%.,CAs编号64593-2. 3.8三聚氛酸一酰胶;纯度>99.5%,CAs编号.645-92-1 3.9三聚缸酸;纯度>99.0%.cAs编号;108-80-5 3 10标准储备溶液;分别称量10.0mg精确到0.1mg)的标准品,用二乙胺-水20十80，体积比) 超声溶解并分别定容于100mL容量瓶中,一18C以下冷冻避光保存,有效期3个月 3.11混合标准中间溶液;分别移取1.0mL 四种标准储备液于同一10ml容量瓶中,用提取溶剂 (G.5)定容,充分摇匀,得到浓度为10.0p&/mL的混合标准工作液 0七一4七冷藏避光保存,有效期 1个月 仪器和设备 4.1气相色谱-质谱联用仪;配有电子轰击(EI)源 4.2天平;感量为0.1mg和0.001g 4.3超声波清洗器 4.4氮吹仪 4.5离心机 4.6涡旋混合器
GB/T22288一2008 4.7样品粉碎机:配40目样品筛 4.8恒温培养箱 试样制备和保存 取有代表性的样品,用密封袋或样品瓶封装后于0C一4C保存,每份样品量应大于100g,并标明 标记 如果样品颗粒较大,应用样品粉碎机将其粉碎并使其全部通过40目的样品筛后再保存 制样操 作过程中应防止样品受到污染或发生含量的变化 分析步骤 6.1提取 称取试样0.5g(精确至0.001g)于50mL具塞离心管中,加人20mL提取溶剂3.5)涡旋1min,超 声提取30min 然后于4000r/min下离心5min,取200L上层清液于10ml尖底具塞玻璃比色管 中,在70C下经氮气吹干 6.2衍生化 向吹干后的比色管中加人300L毗哧(3.3)和200L硅婉化试剂(3.4),超声lmin,涡旋1min后 于70下衍生45min,衍生化溶液供气相色谐-质谐测定 6.3测定 6.3.1气相色谱-质谱条件 a)色谱柱:HP5MS毛细管柱(30mX0.25mm×0.25Am,5%-苯基-甲基聚硅氧烧)或相当者; 程序升温:初始温度为70,保持1min;先以15C/min的速率升至250C;再以30C/min b 的速率升至300C并保持5min; 进样口温度:280 色谱/质谱接口温度;280C; d 载气;氨气 e 流速:l.0mL/min; 电离方式:EI; 电离能量;70eV 离子源温度;230C; 四级杆温度:150C 监测方式;选择离子监测(sIM)方式; k 进样方式:不分流方式,溶剂延迟6min; 进样量:lL; m 待测物保留时间、监测离子及相对丰度参见附录A n 6.3.2标准工作曲线 将混合标准中间溶液(3.11)逐级稀释至20ng/ml、40ng/ml100ng/ml,200ng/ml、400ng/mL的混 合标准工作溶液,分别移取各浓度混合标准溶液0.5ml,于70C经氮气吹干后,按照6.2进行衍生化,供 气相色谱-质谱分析测定 以标准工作溶液浓度为横坐标,色谱峰面积为纵坐标,绘制标准工作曲线 6.3.3定性测定 .1仪仅器条件下如果样品中三聚氮胶、三聚氮酸一酰胶、三聚氮酸二酰股和三聚氮酸的选择 在6.3 离子质量色谐图的保留时间与标准工作液相同,并且在扣除背景后的样品质谱图中,所选离子均出现 并且所选择离子的丰度比与标准品对应离子的丰度比在允许范围内(所选范围见表1),则可判定样品 中存在对应的待测物 相关标准物质谱图参见附录B.
GB/T22288一2008 表1定性确证时相对离子丰度的最大允许相对偏差 相对离子丰度 >50% >20%50% >10%20% 10% 士20% 士50% 允许的相对偏差 10% 15% 士 士 定量测定 根据样液中被测物的含量情况,选定浓度相近的混合标准工作溶液 标准工作溶液和样液中被测 物的浓度均应在标准曲线线性范围内 如果样液中被测物的浓度超出标准曲线线性范围,应按比例提 高6.1中提取溶剂的体积 在6.3.1仪器条件下,三聚氰酸、三聚氛酸二酰胺、三聚氛酸一酰胺和三聚 氮胺的保留时间依次为9.9min、10.7min、ll.4min和l1.9min 6.3.5空白实验 除不称取试样外,均按上述分析步骤进行 结果计算 试样中待测物的含量按式(1)计算 ci-co.V X Xs m又1000 式中: 试样中待测物含量,单位为毫克每千克(mg/kg); -从标准工作曲线上得到的样液中待测物含量,单位为纳克每毫升(ng/mL); 5 -从标准工作曲线上得到的空白实验中待测物的含量,单位为纳克每毫升(ng/mL) Cn V -样品溶液最终定容体积,单位为毫升(ml); 稀释倍数 -所称样品的质量,单位为克(g). 测定低限 本方法中三聚氮胺、三聚氮酸一酰胺、三聚氮酸二酰胺和三聚氛酸的测定低限均为2.0mg/kg 回收率与精密度 回收率及精密度数据参见附录C
GB/T22288一2008 附 录A 资料性附录 三聚氧胺,三聚氧酸一酰胺、三聚氧酸二酷胺和三聚氮酸保留时间,选择监测离子及相对丰度 表A.1各待测物保留时间、选择监测离子及相对丰度 开始监 保留时间 定量离子 定性离子(相对丰度)/ 组分 测时间/ 相对丰度)/% min min 三聚氮酸 6.0 9.9 345(100 346(287 347(13 330(32) 三聚酸二酰胺 10.4 10.7 344(100 345(26 346(13 329(49 三聚酸一酰胶 11.2 1l.4 328(100 329(28 343(75 344(20 三聚氮胺 11.7 1l.9 327(100 328(31) 342(57) 343(18
GB/T22288一2008 附 录 B 资料性附录 三聚氮胺、三聚氮酸一酰胺,三聚氮酸二酷胺和三聚氧酸的衍生物的总离子流色谱图， 各衍生产物在全扫描模式下的质谱图 Abundance 34000 32000 30000 28000 26000 24000 22000 20000 18000 警 14000 1 12000 10000 8000 6000 4000 2000 直.0 12D” minm 9.00 9.50 10.00 10.50 1.00 12.00 图B.1标准物质衍生物总离子流色谱图 Abundance 73 6000007 550000 500000 345 450000 400006 300006 14?7 20000G 100 15000G 100006 50000d 188 127 半， 484丝_4q3些 o 0 5 Som/ o0 150o 350 图B.2三聚酸标准物质衍生物质谱图
GB/T22288一2008 Abundance 344 400000 38000g 360000 34000g 32000g 171 73 0 10 198 6000g 4000g I 286 20000 Ll4s 33 54 457 190 370395422 2 3oo 0o 5 50 50 100 350 m/z 图B.3三聚氮酸二酰胺标准物质衍生物质谱图 Abundance 328 450000 00000 350000 171 300000 73 250000 200000 150000f 214 285 000003 50000 130 240 26o -华,华 但 Bp O 巅 40 6 m/z 而 T5O 20o 25o 300 50 100 图B.4三聚氮酸一酰胺标准物质衍生物质谱图
GB/T22288一2008 Abundance I327 800000 700000 600000 500000 171 400000 300003 73 20000 99 285 100000 213 - 463e 54 ,24395 397418,44446749 新 20o 350 50 100 150 300 B m/z 40o 450 图B.5三聚氮胺标准物质衍生物质谱图
GB/T22288一2008 G 附录 资料性附录 三聚氮胺,三聚酸一酰胺,三聚氮酸二酰胺和三聚暂酸在小麦粉、 玉米粉,大米粉中的添加回收率及精密度 表c.1回收率及精密度数据 待测物名称 添加浓度/(mg/kg) 回收率/% 精密度/% 2.0 80.05~1ll.65 9,0014.34 三聚氢酸 4.0 80.41l12.53 8.4110.14 l0.0 81.08l12.08 8.369.90 81.50108.65 2.0 5.149，46 83.18~106.05 3.64一7.86 三聚氮酸二酰胶 10,0 79.88~106.23 7.68~8.84 2.0 80.15~111.80 8,5912.16 三聚氛酸一酰胺 4.0 83.13ll1.95 5.048.68 10,0 80.00~107.41 7.768.99 2.0 75.75一102.80 7.81一9.33 三聚氮胶 4.0 73.10~96.10 4.549.27 73.2997.21 6.169.02 l0.0