化妆品中香豆素及其衍生物的测定高效液相色谱法

化妆品中香豆素及其衍生物的测定高效液相色谱法

国家标准 GB/T35798一2018 化妆品中香豆素及其衍生物的测定 高效液相色谱法 Determinationofcoumarinanditsderivativesincosmetics Highperformaneeliquidchromatography 2018-02-06发布 2018-09-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/35798一2018 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准由轻工业联合会提出 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会(SAC/TC257)归口 本标准起草单位:检验检疫科学研究院、上海市日用化学工业研究所 本标准主要起草人:孟宪双、马强、王宏伟、吕庆、李俊芳,李亚辉、王峰、沈敏
GB/T35798一2018 引 言 本标准的部分被测物质双香豆素、7-甲氧基香豆素、二氢香豆素、醋硝香豆素、7-甲基香豆素、7-乙 氧基-4-甲基香豆素和环香豆素)是我国《化妆品安全技术规范》规定的禁用物质 禁用物质是指不能作为化妆品生产原料即组分添加到化妆品中的物质 《化妆品安全技术规范》规 定:若技术上无法避免禁用物质作为杂质带人化妆品时,应进行安全性风险评估,确保在正常、合理及可 预见的使用条件下不得对人体健康产生危害 目前我国尚未规定这些物质的限量值,本标准的制定,仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法
GB/35798一2018 化妆品中香豆素及其衍生物的测定 高效液相色谱法 范围 本标准规定了化妆品中香豆素及二氢香豆素等7种香豆素衍生物的高效液相色谱测定方法 本标准适用于水剂、膏霜、香波、散粉和唇膏类化妆品中香豆素及二氢香豆素等7种香豆素衍生物 的测定 本标准的检出限和定量限;香豆素的检出限为4mg/kg,定量限为8mg/kg;二氢香豆素的检出限 为10mg/kg,定量限为20mg/kg;7-甲氧基香豆素、7-甲基香豆素、7-乙氧基-4-甲基香豆素、环香豆素、 g 双香豆素和醋硝香豆素的检出限为5mg/kg,定量限为10mg/ 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 原理 试样经溶剂提取、离心,微孔滤膜过滤后,用高效液相色谱测定,外标法定量,液相色谱-质谱确认 试剂和材料 除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/6682规定的一级水 4.1乙睛:色谱纯 4.2甲醇:色谱纯 4.3二氯甲炕 4.4四氢吠喃 4.5乙酸铵 4.6冰醋酸 4.7氢氧化钠 4.80.05mol/1乙酸铵溶液;称取1.925g乙酸铵(4.5),加水溶解后转移至500mL容量瓶中,用水定 容至刻度,摇匀,备用 4.90.1mol/儿氢氧化钠溶液;称取0.400g氢氧化钠(4.7),加水溶解后转移至100m容量瓶中,定容 至刻度 4.100.1mol/L氢氧化钠-乙睛混合溶液(1十9)(体积十体积):量取90mL乙睛(4.1)至100m容量 瓶中,加人0.1mol/L氢氧化钠溶液(4.9)至刻度,混匀 4.11香豆素、二氢香豆素、7-甲氧基香豆素、7-甲基香豆素、7-乙氧基-4-甲基香豆素、环香豆素、双香豆 素和醋硝香豆素的中文名称,英文名称、CAS号、分子式、结构式和相对分子质量参见附录A中的
GB/T35798一2018 表A.1,标准品纯度均不小于98% 4.12香豆素及其衍生物的标准储备溶液(1000mg/L)分别称取各标准品(4.11)10mg(精确至 0.lmg)至10mL容量瓶中,除双香豆素先用5ml二氯甲烧(4.3)溶解,再用乙睛(4.1)定容至刻度外. 其余标准品均以甲醇(4.2)溶解并定容至刻度,于4“C避光保存,可使用3个月 4.13香豆素及其衍生物的混合标准溶液:分别移取1ml香豆素及其衍生物的标准储备液(4.12)至 10mL容量瓶中,用甲醇(4.2)定容至刻度,根据需要用甲醇(4.2)稀释成适宜浓度的混合标准工作溶 液,于4"C避光保存,可使用3个月 5 仪器和设备 5.1高效液相色谱(HPLC)仪:配有二极管阵列检测器 5.2液相色谱谐-质谱/质谱(IC-MS/MS)仪;配有电喷雾离子源(ESI) 5.3超声波水浴 5.4离心机:转速不低于5000r r/min 5.5涡旋混合器 5.6分析天平:感量为0.0001g和0.001g 5.7具塞比色管:25mL 5.8具塞塑料离心管:10ml 5.9微孔滤膜;0.454m,有机相 6 测定步骤 6.1样品处理 6.1.1水剂、膏霜,香波和散粉类样品 称取0.5g(精确至0.001g)试样于25mL具塞比色管(5.7)中,加人8mL0.1nmol/儿氢氧化钠-乙 睛混合溶液(4.10),涡旋混合后,在超声波水浴(5.3)中超声提取30min,以冰醋酸(4.6)调节pH至中 性,并用乙睛定容至10mL 刻度,混匀 取部分溶液转移至10ml具塞塑料离心管5.8)中,以 5000r/min离心10min,上清液经0.454m微孔滤膜(5.9)过滤,供高效液相色谱测定 6.1.2唇膏类样品 称取0.5g(精确至0.001g)试样于25ml具塞比色管(5.7)中,加人2mL四氢砝喃(4.4),涡旋混 合后再加人6mL0.1mol/L氢氧化钠-乙睛混合溶液(4.10),涡旋混合,以下步骤同6.1.1 6.2测定条件 高效液相色谱测定条件如下 色谱柱:ORBAXSBCw,5Mm. n,250mm×4.6mm(内径),或相当者; a 流动相:见表1; b 流速;l.0mL/min; c d 柱温:30“C; 检测波长;香豆素、二氢香豆素、7-甲基香豆素和环香豆素;280nm,双香豆素和醋硝香豆素 306 nm,7-甲氧基香豆素和7-乙氧基-4甲基香豆素:3201 nm fD 进样量:10!L
GB/35798一2018 表1流动相 0.05mol1乙酸铵溶液 步骤 时间/min 乙肺/% 含0.25%乙酸/% 70 30 45 5.0 55 50 50 8.0 90 8.2 10 90 13.0 10 3.2 95 16.0 95 16.2 70 30 8.0 70 30 注，%表示体积分数 6.3标准曲线的绘制 用甲醉(4.2)将香豆素及其衍生物的混合标准溶液逐级稀释得到浓度为0.24g/mL,0.54g/ml. 1g/'mL.2g/ml.5g/mlL.104g/ml.20/mL的混合标准工作辫液,按6.2的测定条件浓度由低 到高进样测定,以峰面积-浓度作图,得到标准曲线回归方程 香豆素及其衍生物的高效液相色谐图参见附录B中的图B.1 6.4测定 按6.2的测定条件对待测样液进行测定,用外标法定量 待测试样中对香豆素及其衍生物的响应 值应在标准曲线的线性范围内,超过线性范围则应稀释后再进样分析 进行样品测定时,如果检出香豆 素或其衍生物的色谱峰保留时间与标准品相一致,并且在扣除背景后的样品色谱图中,该物质的紫外吸 收光谱与标准品一致,则可初步确认样品中存在被测香豆素或其衍生物 必要时,阳性样品需用液相色 谱-质谱谐进行确认试验,试验方法参见附录C 6.5空白试验 除不称取样品外,均按上述测定条件和步骤进行 结果计算 结果按式(1)计算,计算结果保留两位小数(计算结果应扣除空白值) W #*#* m 式中 w 化妆品中香豆素或其衍生物的含量,单位为毫克每千克(mg/kg) 从标准工作曲线上查出的样液中被测香豆素或其衍生物的浓度,单位为微克每毫升 (4g/mL); -样液最终定容体积,单位为毫升(mL);
GB/T35798一2018 试样的质量,单位为克(g) n 8 检出限和定量限 本标准的检出限和定量限:香豆素的检出限为4mg/kg,定量限为8mg/kg;二氢香豆素的检出限 为l0mg/kg,定量限为20mg/kg;7-甲氧基香豆素、7-甲基香豆素、7-乙氧基-4-甲基香豆素,环香豆素、 双香豆素和醋硝香豆素的检出限为5mg/kg,定量限为10mg/kg 回收率和精密度 在添加浓度8mg/" kg 200mg/kg范围内,回收率在86.5% 100.7%之间,相对标准偏差为 0.8% 9.7% 10允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%.
GB/35798一2018 录 附 A 资料性附录 香豆素及其衍生物的中文名称、英文名称,CAs号分子式、结构式和相对分子质量 香豆素及其衍生物的中文名称、,英文名称,CAS号,分子式,结构式和相对分子质量见表A.1 表A.1香豆素及其衍生物的中文名称、英文名称、CAs号、分子式、结构式和相对分子质量 相对分 中文名称 英文名称 cAs号 分子式 结构式 子质量 香豆素 91-64-5 C,H,(O. 146.15 Coumarin OH 双香豆素 Dicoumarolum 66-76-2 CHO 336.30 HO 7-甲氧基香豆素7-Methoxycoumarin 531-59-9 CH.O 176.17 二氢香豆素 Dihydrocoumarin 1l9-84-6 C,HO. 148.17 NO 醋硝香豆素 Acenocoumarol 52-72-7CHNO 353.33 OH 7-甲基香豆素 2445-83-2 7-Methyleoumarin CH,O. 160.17 7-乙氧基-4 7-Ethoxy-4-met 87-05-8 CHgO 204.22 甲基香豆索 hylcoumarin 518-20-" C 322.35 环香豆素 Pvranocoumarin 得HiO
GB/T35798?2018 ? B ??) ???Ч??? ???Ч????B.1 60 =280nm 40 20 10 1 S 14 60 =306nmm 40 20 6 10 12 80- 320nm 60 40 20 10 16 min ?: -?? ?; 7-?; ?; -?; 7-?? -7--4-??; -?? 8 ?B.1???Ч???
GB/35798一2018 附录 C 资料性附录 确认试验 液相色谱条件 C.1 液相色谱测定参考条件如下 色谱柱:XBridgeC柱,3.5m,150mm×2.1mm(内径),或相当者; a b 流动相见表C.l 流速:0.3mL/min c d 柱温:35C; 进样量;5AL e 表C.1流动相 步骤 时间/minm 水/% 乙睛/% 70 30 35 65 4.5 95 5.0 95 6.0 6. 70 30 8.0 70 30 C.2质谱条件 质谱测定参考条件如下 电离方式;电喷雾电离; a 5 毛细管电压;3.0kV; 萃取电压;3.0V c 小 射频透镜电压:0.0V; 离子源温度150C e 脱溶剂气;氮气,流速1000L/h,温度500C; 锥孔气:氨气,流速50L/h; g h 碰撞气:氯气 扫描模式:多反应监测,香豆素及其衍生物的保留时间、电离方式、定性离子对、定量离子对、锥 孔电压、碰撞能量、相对丰度和允许偏差参见表C.2
GB/T35798一2018 表C.2香豆素及其衍生物的保留时间、电离方式、定性离子对、 定量离子对、锥孔电压、碰撞能量、相对丰度和允许偏差 保留 锥孔 碰撞 相对 电离 定性离子对 定量离子对 允许偏差 中文名称 时间 电压 能量 丰度 方式 1/ /2 eV % min 335.3/161.3 15 100 ESI 335.3/161.3 17 士20% 双香豆素 2.04 39 335.3/117.2 67 147.1/103.l 16 00 2.92 ESsI 147.1/103.1 士20% 香豆素 26 22 147.1/91.1 72 22 100 7-甲氧 177.3/121.3 3.23 ESsI 177.3/121.3 士25% 30 17 基香豆素 177.3/133,3 46 15 149.1/121.1 21 3.4 Esr 149,1/107.1 士25% 二二氢香豆素 26 l6 149.1/107.1 100 7-甲基 161.1/105.2 20 100 3,66 Esr 161.1/105.2 士20% 26 香豆素 161.1/117.2 15 58 22 醋硝香 352.1/295.3 51 BsI 352.1/265.2" 士20% 3.70 36 豆素 352.1/265.2 30 100 7-乙氧基- 18 205,2/177.2 100 4-甲基 4.48 土25" ESI 205,2/177.2 28 205.2/121. 25 30 香豆素 18 323.5/251.4 29 环香豆素 ESI 22 十25% 6.33 323,5/251.4 32 323.5/173.3 100 C.3定性判定 按照上述条件测定试样和标准工作溶液,如果试样中的质量色谱峰保留时间与标准工作溶液一致 变化范围在士2.5%之内),且试样中目标化合物的两个子离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对 丰度一致,相对丰度偏差不超过表c.2规定的范围,则可判断样品中存在对应的香豆素或其衍生物 香豆索及其衍生物的选择离子质量色谱图参见图c.1
GB/35798?2018 100- 100 161.1>105.2 335.>>I61.3 100- 100 352.1>265.2 147.1>103.1 100 100 205.2>177.2 177.3>121.3 100 100 149.1>107.1 323.5>251.4 2.0 4.0 6.0 8.0 H/min 2.0 4.G 6.0 8.0 I/min ?: -??; -?; -7-?; ?; -7-??; -?; -7--4?? -?? ?c.1?????

高效液相色谱法测定化妆品中香豆素及其衍生物

香豆素是一种常见的植物成分，在化妆品中也有广泛的应用。然而，由于香豆素和其衍生物具有潜在的致癌作用，相关监管部门对其含量进行了严格限制。因此，开发一种快速、准确、灵敏的分析方法，对保证化妆品质量及安全至关重要。

GB/T35798-2018标准中规定了一种采用高效液相色谱法对香豆素及其衍生物进行测定的方法。该方法具有简单、可靠、准确、灵敏等优点。

实验中使用的仪器为高效液相色谱-紫外检测系统(HPLC-UV)，采用C18反相柱作为分离柱，以甲醇-水为流动相进行梯度洗脱。通过优化柱温、流速、洗脱方案等参数，可以获得高效、准确的分离结果。

该方法适用于香豆素及其衍生物在0.1~50μg/mL范围内的测定。实验结果表明，该方法具有良好的重现性、精密度和准确度，可用于化妆品中香豆素及其衍生物的定量分析。

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