GB/T38571-2020
植物次生代谢物生物碱的检测液相色谱-质谱法
Determinationofalkaloidsasplantsecondarymetabolites—Liquidchromatography-massspectrometry
- 中国标准分类号（CCS）A21
- 国际标准分类号（ICS）07.080
- 实施日期2020-03-31
- 文件格式PDF
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植物次生代谢物生物碱的检测液相色谱-质谱法
国家标准 GB/T38571一2020 植物次生代谢物生物碱的检测 液相色谱-质谱法 Determinaton.ofallkalodssplantseomdary" metaboliteS" Liquidchrommatography-massspectroetry 2020-03-31发布 2020-03-31实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标涯花警理委员会国家标准
GB/38571一2020 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草
本标准由标准化研究院提出并归口
本标准起草单位:测试技术研究院生物研究所、河北省食品检验研究院、标准化研究院、 河北医科大学、计量大学
本标准主要起草人:张岩、范素芳、马爱进、冯德建、马春玲,文迪、丛斌、王娟、吕品、叶子弘
GB/38571一2020 植物次生代谢物生物碱的检测 液相色谱-质谱法 范围 本标准规定了用液相色谱-串联质谱仪检测植物次生代谢产物生物碱的方法
本标准适用于(-)-东苣若碱、番木鳌碱、乌头碱、次乌头碱、新乌头碱,秋水仙碱、阿托品、士的宁、喜 树碱、毛果芸香碱、鬼白毒素的测定
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 原理 样品经提取液超声提取.离心后,用液相色谱串联质请仪测定,外标法定量 试剂或材料 除非另有规定,所用试剂均为分析纯
水为GB/T6682规定的一级水
4.110%(体积分数)乙睛溶液 0mL乙睛十90mL去离子水,混匀
4.2甲酸 色谱纯
4.30.1%体积分数)甲酸水溶液 准确移取甲酸1.0mL置于11容量瓶中,用水定容,混匀
4.41%(体积分数)甲酸-乙睛溶液 mL甲酸+99mL.乙睛,混匀
4.5100mmo/L乙酸铵溶液 称取乙酸铵3.854g,用去离子水溶解,定容至500mL
4.6乙酸铵-氨水缓冲液,pH9 取100mlL100mmol/L乙酸铵溶液,用氨水调pH到9.0士0.5
GB/T38571一2020 4.7生物碱 纯度均不小于98%
4.81mg/ml生物碱储备液 准确称取0.100甚相应的生物碱分别置于100ml容量瓶中用甲醉定容,配制成浓度为1mg/ml. 的储备液,于4C避光保存,有效期2个月
4.910mg/L混合标准储备液 分别准确移取(-)东苣曾碱,番木鳌碱、乌头碱,次乌头碱、新乌头碱、秋水仙碱、阿托品、士的宁、喜 树碱、毛果芸香碱、鬼白毒素标准储备溶液1.0mL于100mL容量瓶中,用甲醇定容,混匀,配制成 -)-东苣若碱、番木鉴碱、乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、秋水仙碱、阿托品、士的宁、喜树碱、毛果芸香碱 鬼白毒素浓度为10mg/1的混合标准储备溶液,于4C避光保存,可使用一周
4.10微孔滤膜 0.224m,有机相
5 仪器设备 5.1液相色谱-串联质谱仪(LC-MS/MS);配有电喷雾离子源(ESI)和四级杆质量分析器
5.2电子天平;感量为0.0001g和0.001g
5.3离心机:最高转速不低于9500r r/min
5.4超声波清洗仪 5.5氮吹仪
5.6涡旋混合器 5.7匀浆机
5.8离心管;10ml,50ml 6 试样制备 6.1植物组织、动物组织 植物组织、动物组织等固体样品,绞碎并使其均质
6.2体液 血液,尿液等液体样品,将取得的全部原始样品充分混匀后,待测
试验步骤 7.1试样提取 7.1.1植物组织,动物组织 称取植物组织试样1g(精确至0.001g)于50ml离心管中,加人5ml去离子水,涡旋混合2min,加 ,9500 人10mL乙睛,涡旋混合1nmin,超声辅助提取10nmin,加人4g无水硫酸镁,迅速振摇1nmin, r/min
GB/38571一2020 离心5min
取上清液5.0ml在45C水浴中氮吹浓缩至干,用1.0mL10%乙睛溶液复溶,过微孔滤 膜,待测定
7.1.2体液 7.1.2.1血液 取血液试样0.5ml于10mL离心管中,加人1mL乙酸铵-氨水缓冲溶液,涡旋混合1min,加人 2.0mL甲醇,涡旋混合2min,超声辅助提取10min,9500r/min离心5min,取上清液;残渣加人 2.0ml甲醇重复提取一次,合并上清液,45C水浴中氮吹浓缩至干,用1.0mL10%乙晴溶液复溶,过 微孔滤膜,待测定
7.1.2.2尿液 取尿液试样1.0mlL于10mL离心管中,准确加人4.0mL含1%甲酸-乙晴溶液涡旋混合1nmin 后,向离心管中加人1.5g无水硫酸镁,迅速振摇1nmin,9500r/min离心5min
取上清液2.0nml在 5水浴中氮吹浓缩至干,用1.0mL10%乙胯溶液复溶,过微孔滤膜,待测定
7.2仪器参考条件 7.2.1液相色谱参考条件如下 色谱柱:C柱,100mm×2.1mm(内径),2.5m,或相当者
a b 流动相流动相A -0.1%甲酸水溶液;流动相B 乙晴
梯度洗脱,梯度洗脱程序参见 附录A
流速:0.30mL/min. c 柱温:30C d) 进样量;2L e 7.2.2质谱参考条件如下 电离方式;电喷雾电离,正离子模式 a b 喷雾电压;3.5kV; 离子传输温度;350 c 心 d 离子源温度;320 翘气:4.6L/min ee f 辅助气;8.8L/min; 吹扫气:1.5L/min; hh) 扫描模式;多反应监测(MRM)模式,11种生物碱质谱参数参见附录B 7.3混合标准工作溶液的制备 取相应的空白样品,按照6.2步骤进行处理,用得到的空白样品提取液将混合标准储备溶液逐级稀 释得到(-)东苣蓉碱、番木整碱、乌头碱、次乌头碱、新乌头贼、秋水仙碱,阿托品、士的宁、喜树碱、毛果 芸香碱、鬼白毒素浓度为5g/L104g/L,204g/L.504g/L1004g/儿L的系列混合标准工作溶液,浓度 由低到高进行检测,以定量离子峰面积对质量浓度作图,做出标准曲线回归方程
7.4测定步骤 将试样溶液注人液相色谱-串联质谱仪中,得到1l种生物碱的质谱响应值,根据标准曲线得到待测 液中11种生物碱的浓度
样品溶液中各组分的响应值应在标准曲线的线性范围内,超过线性范围则应
GB/T38571一2020 稀释后再进样测定
7.5定性判定 在相同条件测定样品溶液和标准溶液,如果样品溶液中检出的色谱峰的保留时间与标准溶液中的 某种组分峰的保留时间一致(变化范围在土2.5%),并且所选择的两对子离子的质荷比一致,样品溶液 中定性离子相对丰度与浓度相当标准工作溶液中定性离子的相对丰度进行比较时,相对偏差不超过 表1规定的范围,则可判断样品中存在该组分
种生物贼标准物质的总离子流图参见附录c 表1定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 >20%~50% >10%~20% -50% s10% 土20% 土25% 土30% 允许的相对偏差 土50% 7.6空白试验 除不加试样外,均按7.1~7.5测定条件和步骤进行
7.7方法的检出限、定量限 本标准的方法检出限、定量限见附录D. 8 试验数据处理 8.1植物组织,动物组织 植物组织、动物组织组分含量按式(1)计算: ×V×K e X 式中 x -试样中待测组分含量,单位为微克每千克(4g/kg); 由标准曲线得出的测试液中某种组分的质量浓度,单位为微克每升g/L); 定容体积,单位为毫升(mL) 稀释倍数; 试样质量,单位为克(g)
mm 计算结果保留三位有效数字
8.2体液 体液组分含量按式(2)计算 p×V觉容×K X .2 V试样 式中 试样中待测组分含量,单位为微克每升(g/L); x 由标准曲线得出的测试液中某种组分的质量浓度,单位为微克每升(4g/L). p 定容体积,单位为毫升(ml); '定彩 稀释倍数;
GB/38571一2020 V -试样体积,单位为毫升(mL)
试样 计算结果保留三位有效数字
精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%
GB/T38571一2020 附 录 A 资料性附录) 梯度洗脱程序 梯度洗脱程序见表A.1
表A.1梯度洗脱程序表 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 10 0.0 90 2.0 90 10 75 25 6.0 19.0 75 25 10 19.01 90 90 10 22,0
GB/38571一2020 附录 B 资料性附录 11种生物碱质谱参数 1种生物碱质谱参数见表B.1
表B.111种生物碱质谱参数表 母离子 透镜电压 子离子 碰撞能 序号 物质名称 m/2 mn/之 138.1 19 (-)-东苣若碱 304.2 86 15 156.l 244.0 35 番木鳌碱 395.2 158 324.1" 29 31 586.3" 646.4 249 乌头碱 554.3 35 556.3" 30 次乌头碱 616.4 147 524.3 34 572.3" D 新乌头碱 632.4 249 354. 40 310.1 24 秋水仙碱 400.2 137 358.2" 20 124.2" 22 阿托品 290.2 l00 93.2 29 184.1" 36 士的宁 335.2 127 156. 44 21 305.1" 喜树碱 349.3 131 249.2 27 95.1" 29 毛果芸香贼 10 209.1 113 163. 18 247.0" 15 415.0 82 ll 鬼白毒素 397.l 10 定量离子
GB/T38571一2020 录 附 C 资料性附录) 11种生物碱标准物质的提取离子质谱图 11种生物碱标准物质的提取离子质谱图见图C.1
1000000 毛果芸香喊 500000 3000000 阿托品 2000000= 1000 g 1000000 -东芭若碱 00000 400000 士的宁 00000 200000 0 o8 00o 喜树械 20 OL s000O7 200000 番木整碱 100000 10 21314561718192021" 200000 15000o 秋水仙碱 00000 50 og 20000 鬼白毒素 10000 ob 200 15000o 100000 次乌头诚 50000 og 150 00000 新乌头碱 500005 60000 40000 乌头碱 200005 171819202 10 1213 15 保留时间/min 图c.111种生物碱标准物质的提取离子质谱图
GB/38571一2020 录 附 D 规范性附录 方法检出限、定量限 方法检出限、定量限见表D.1
表D.1方法检出限、定量限 血液 尿液 动物组织 中药材 其他植物组织 分析物 检出限定量限检出限定量限检出限定量限检出限定量限检出限定量限 4g/I 4g/I 4g/I 4g/I g/1 g/I 4g/I 4g/I 4g/I 4g/I 毛果芸香以 0.5 0.5 0.5 0.5 阿托品 1.0 0.2 l.0 l1.0 0.5 l1.0 (-)-东荨若贼 10o 10 10 喜树碱 10 番木碱 新乌头碱 秋水仙碱 次乌头贼 乌头贼 10 l0 10 10 士的宁 1o 10 10 鬼白毒素 10
植物次生代谢物生物碱的检测液相色谱-质谱法GB/T38571-2020
背景
植物是一类重要的生物资源，其中含有大量的次生代谢物。这些次生代谢物具有多种生物活性，包括抗菌、抗炎、抗氧化等。生物碱是其中一类重要的次生代谢物，广泛存在于植物中。因此，对于生物碱的检测具有重要的意义。
原理
液相色谱-质谱法是一种高效灵敏、准确可靠的检测植物次生代谢物生物碱的方法。该方法通过将植物样品制备成液态，然后使用液相色谱仪将植物次生代谢物分离出来，并结合质谱技术对其进行鉴定和定量。
操作步骤
1.样品制备：将植物材料研磨并用甲醇提取样品。
2.液相色谱分离：将提取的样品注入液相色谱仪中，通过不同的柱子和流动相进行分离，得到待测生物碱成分。
3.质谱检测：利用质谱技术对待测成分进行鉴定和定量，可以确定样品中生物碱成分的种类和含量。
总结
液相色谱-质谱法是一种高效、准确、可靠的植物次生代谢物生物碱检测方法。在GB/T38571-2020标准中，该方法被作为一种标准方法来使用。本文介绍了该方法的原理和操作步骤，希望能够对专业人士在进行植物次生代谢物生物碱检测方面提供帮助。
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