GB/T23884-2021
动物源性饲料中生物胺的测定高效液相色谱法
Determinationofbiogenicaminesinanimal-derivedfeeds—Highperformanceliquidchromatography
- 中国标准分类号（CCS）B46
- 国际标准分类号（ICS）65.120
- 实施日期2022-05-01
- 文件格式PDF
- 文本页数7页
- 文件大小493.09KB
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动物源性饲料中生物胺的测定高效液相色谱法
国家标准 GB/T23884一2021 代替GB/T23884一2009 动物源性饲料中生物胺的测定 高效液相色谱法 Determimation.ofbiwgenicaminesinamimalderived feeds Highperformaneeliquidchromatography 2021-10-11发布 2022-05-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标涯花管理委员会国家标准
GB/T23884一2021 前 言 本文件按照GB/T1.1一2020标准化工作导则第1部分;标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草
本文件代替GB/T23884一2009《动物源性饲料中生物胺的测定高效液相色谱法》，与 GB/T23884一2009相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下 增加了色胺,苯乙胺和章鱼胺的测定;增加了虾粉、鸡肉粉、猪肉粉、血粉、羽毛粉、鱼溶浆、乌贼 膏和蚕蛹粉8种动物源性饲料原料;修改了方法的检出限,增加了定量限(见第1章,2009年 版的第1章); 修改了衍生剂、衍生条件和衍生后处理方法(见5.ll,8.2,2009年版的4.1、7.1.2、7.1.3); 修改了色谱梯度洗脱程序(见表1,2009年版的表1); -别除了“种生物胺的化学名称、分子式和相对分子质量"(见2009年版的附录A): 修改了生物胺液相色谱图见附录A.2009年版的附录B). 请注意本文件的某些内容可能涉及专利
本文件的发布机构不承担识别专利的责任
本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(sAce70提出并归m 本文件起草单位;农业大学
本文件主要起草人杨文军,田颖、张丽英,陈义强
本文件于2009年首次发布,本次为第一次修订
GB/T23884一2021 动物源性饲料中生物胺的测定 高效液相色谱法 范围 本文件规定了动物源性饲料原料中色胺,苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、章鱼胺、酪胺、亚精胺和精胺的 高效液相色谱测定方法
本文件适用于鱼粉、虾粉、鸡肉粉、猪肉粉、肉骨粉血粉、羽毛粉、鱼溶浆、乌贼膏和蚕蛹粉等动物源 性饲料原料中色胺,苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、章鱼胺、酪胺、亚精胺和精胺九种生物胺的测定
本文件检出限为5mg/kg,定量限为10mg/ke" 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款
其中注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 试样的制备 GB/T20195动物饲料 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义
原理 试样中的生物胺经高氯酸溶液提取、丹磺酰氯衍生,用高效液相色谱仪测定,外标法定量
试剂或材料 S 除非另有规定,仅使用分析纯试剂
5.1水:GB/T6682,一级
5.2乙晴;色谱纯
5.3丙酮
5.4氨水
5.5乙酸铵色谱纯
5.6乙酸铵溶液(5mmol/L);称取0.38g乙酸铵(5.5),加水溶解,定容至1L
5.7高氧酸提取液(0.4mol/L);准确量取高氯酸32.3mL,用水定容至1L
5.8氢氧化钠溶液(2mol/L):准确称取8g氢氧化钠,用水定容至100mL 5.9饱和碳酸氢钠溶液;向水中加人足量的碳酸氢钠固体直到无法再溶解
5.10盐酸溶液(0.1mol/L);准确量取8.3ml浓盐酸,用水定容至1L
GB/T23884一202 5.11丹磺酰氯衍生溶液(10mg/mL);称取1g丹磺酰氯(CAs号;605-65-2,>99%),用丙酮溶解,定 容至100mL
临用现配 5.12标准储备溶液(1mg/mL):分别称取色胺(CAs号:l476-39-7,纯度>99%)12mg、苯乙胺(CAsS 号;64-04-0,纯度>98%)13mg、腐胺
二盐酸(CAs号;333-93-7,纯度>98%)18mg、尸胺(C'As号: 462-94-2,纯度>98.8%)10mg、组胺(CAs号:51-45-5,纯度97%)10mg,章鱼胺
一盐酸(CAs号: 70-05-9,纯度>99.3%)12mg,酪胺(CAs号;51-67-2,纯度>98%)10mg、亚精胺三盐酸(CAS号; 334-50-9,纯度>99.9%)17nmg、精胺(CAs号;71-44-3,纯度>98%)10mg(精确至0.01mg),分别置于 10ml棕色容量瓶中,用盐酸溶液(5.10)溶解并定容
于一18C以下保存,有效期为6个月
注:标准溶液的配制浓度以各生物胺的单体计算,称取标准品时对其中的盐酸盐进行折算
所有标准溶液配制好 后转移至密闭棕色容器中 ，怪光存 5.13混合标准中间溶液 1004g/mL):准确移取各生物胺标准储备溶液(5.12)1ml于10ml棕色容 量瓶中,用盐酸溶液(5.10)定容
于2C8C保存,有效期为1周
5.14混合标准系列溶液;准确移取适量混合标准中间溶液(5.13)于10mL棕色容量瓶中,用水(5.1)稀 释定容配成系列标准溶液,浓度分别为:0.254g/mL,0.54g/ml5.04g/ml,10.04g/ml、25.04g/mL、 50.04g/mL、,100.04g/mL
临用现配
5.15微孔滤膜:0.224m,有机系
o 仪器设备 6.1高效液相色谱仪;配有紫外检测器或二极管阵列检测器
6.2分析天平;感量0.1mg和0.01nmg
6.3恒温摇床:控温精度士1
6.4旋涡混匀器
6.5离心机转速不低于5000!/min. 6.6氮吹仪
6.7超声波清洗器
6.8匀浆机 样品 7.1固体 按GB/T20195制备样品，,至少100g,粉碎使其全部通过0.42mm孔径的分析筛,充分混匀,装人 磨口瓶中,避光保存,备用
7.2膏浆状 按GB/T20195制备样品,至少100g,用一台机械搅拌器或均质器混合样品,边摇边用勺或大口吸 管转移100g或100ml样品到磨口瓶中,避光保存,备用
8 试验步骤 8.1提取 平行做两份试验
称取试样1g,准确至0.0001g,置于50mlL离心管中,准确加人10mL高氯酸提
GB/T23884一2021 取液(5.7),涡旋混匀(膏浆状样品均质30s),置于摇床上,室温下200r/min振荡10min,于5000 r/min 离心10min,上清液倒人另一50ml离心管中,残渣再用10mL.高氯酸提取液(5.7)提取,重复上述操 作,合并上清液,备用
8.2生化 准确移取上清液(见8.1)1mL,放人15mL具塞离心管中,依次加人200氢氧化钠溶液(5.8) 300饱和碳酸氢钠溶液(5.9)和2mL丹磺酰氧衍生溶液(5.11).涡旋混匀,置摇床上,45C避光反 应45nmin
加人100AL氨水(5.4)终止反应,混匀,静置15min,45C氮气吹去丙啊,用乙睛(5.2)定 容至5mL,超声复溶,混匀,用0.224m有机微孔滤膜(5.15)过滤备用
精确量取混合标准系列溶液(5.14)各1ml与试样溶液同时进行衍生 8.3液相色谱参考条件 色谱柱;C18柱,长250mm,内径4.6mm,粒径5m,或性能相当者
柱温:30C
检测波长;254nm
流动相:乙酸铵溶液(5.6)和乙睛(5.2)(用前超声脱气)
流速;l.0mL/min. 进样量:10L
梯度洗脱程序见表1 表1高效液相色谱梯度洗脱程序表 时间 乙酸铵溶液 乙晴 % min 40 60 40 60 12 25 75 20 95 21 40 60 25 40 60 8.4测定 8.4.1混合标准系列溶液和试样溶液测定 在仪器的最佳条件下,分别取混合标准系列溶液和试样溶液(见8.2)上机测定
生物胺标准溶液的 液相色谱图参见附录A
8.4.2定性 以保留时间定性,试样溶液中生物胺保留时间应与混合标准系列溶液(浓度相当)中生物胺的保留 时间一致,其相对偏差在士2.5%之内
8.4.3定量 以生物胺的浓度为横坐标,色谱谐峰面积响应值)为纵坐标,绘制标准曲线,其相关系数应不低于
GB/T23884一202 0.999
试样溶液中生物胺的浓度应在标准曲线的线性范围内
如超出范围,应将上清液(见8.1)用高 氯酸提取溶液(5.7)稀释后,重新衍生测定
单点校准定量时,试样溶液中生物胺的浓度与标准溶液浓 度相差不超过30%.
试验数据处理 试样中生物胶的含量以质量分数w，计,数值以毫克每千克(mg/kg)表示
多点校准按公式(1)计 算;单点校准按公式(2)计算 "xYxwx1o0 7'= T又m又1000 式中 -从标准曲线查得的试样溶液生物胺i的质量浓度,单位为微克每毫升(g/mL): p 试样提取溶液的体积,单位为毫升(mL.) 氮气吹干后复溶的体积,单位为毫升(mL). 衍生化时所用试样提取溶液的体积,单位为毫升mL); 试样质量,单位为克(g)
n A，×p,×V×V×1000 7 A×V×m×100o 式中 试样溶液中生物胺i的色谱峰面积 A -标准溶液中生物胺的质量浓度,单位为微克每毫升(4g/mL) " 试样提取溶液的体积,单位为毫升(mL); V -氮气吹干后复溶的体积,单位为毫升mL); -标准溶液中生物胺i的色谱峰面积; A 衍生化时所用试样提取溶液的体积,单位为毫升(mL); 试样质量,单位为克(g).
n 测定结果以平行测定的算术平均值表示,保留3位有效数字
10精密度 在重复性条件下,两次独立测定结果的绝对差值不大于该算术平均值的10%.
GB/T23884一2021 附 录 A 资料性 生物胺标准溶液液相色谱图 9种生物胺标准溶液的液相色谱图见图A.1
mAU 100- 80- 60- 40- 20 18 20 min 1o 标引序号说明 色胺; 苯乙胺; 腐胺; 尸胺; -组胺 -章鱼胺; -酪胺 -亚精胺; -精胺
图A.19种生物胺标准溶液(25g/mL)的液相色谱图
动物源性饲料中生物胺的测定高效液相色谱法GB/T23884-2021
动物源性饲料是畜禽养殖业中常见的饲料之一，其成分复杂，其中含有一些生物胺类物质。这些生物胺可能对动物健康造成不良影响，因此需要进行检测。
GB/T23884-2021标准中，使用高效液相色谱法测定动物源性饲料中的生物胺。该方法基于前列腺素衍生化学发光检测技术（PDA），可以同时检测多种生物胺，包括亚硝基胺、亚硝酸盐、组胺等。
该方法具有以下优点：
- 准确性高：采用高效液相色谱法测定，可以准确地分离出目标物质并进行定量分析。
- 灵敏度高：PDA技术具有高灵敏度，可以检测到极低浓度的生物胺。
- 选择性强：该方法可以同时检测多种生物胺，且不会受到其他物质的干扰。
总之，GB/T23884-2021标准中关于动物源性饲料中生物胺的测定方法，采用了高效液相色谱法，具有准确性、灵敏度和选择性等优点，可为畜禽养殖业提供科学依据。
