农药登记毒理学试验方法第18部分：啮齿类动物显性致死试验

农药登记毒理学试验方法第18部分：啮齿类动物显性致死试验

国家标准 GB/T15670.18一2017 部分代替GB/T15670一1995 农药登记毒理学试验方法 第 18部分:啮齿类动物显性致死试验 Ioxieologiealtestmethodsforpestieidesregistrationr Part18:Rodentdominantlethaltest 2017-07-12发布 2018-02-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/T15670.18一2017 -修改了染毒方式内容(见6.4,1995年版的14.7.3); -修改了数据处理内容(见第7章,1995年版的l4.7.6). 本部分由农业部提出 本部分由农业部种植业管理司归口 本部分起草单位;农业部农药检定所 本部分主要起草人:肖杭、环飞、张丽英、陶传江 本部分所代替标准的历次版本发布情况为 GB/T156701995
GB/T15670.18一2017 农药登记毒理学试验方法 第18部分:啮齿类动物显性致死试验 范围 GB/T15670的本部分规定了啮齿类动物显性致死试验的基本原则、方法和要求 本部分适用于为农药登记而进行的啮齿类动物显性致死试验 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB14925实验动物环境及设施 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 显性致死突变dominantlethalmutation 发生于生精细胞的突变,不引起配体的功能异常,但能引起受精卵或发育中的胚胎死亡 试验目的 本试验是一项生殖细胞致突变试验,用来检测受试物对整体哺乳动物生殖细胞的遗传损伤,进一步 确证体外试验或其他试验系统获得的阳性结果,以评价受试物能否引起显性致死突变 试验概述 哺乳动物发育中的精子在物理或化学因素作用下,发生染色体损伤,从而使受精卵在发育中死亡 引起显性致死的染色体损伤主要为染色体断裂 显性致死的主要表现是受精卵着床前丢失或着床后胚 胎早期死亡 通过适当的途径使雄性动物接触受试物,然后与未经染毒且未交配过的雌性动物交配,交配结束 后,取出雌性动物 雌性动物于妊娠后半期处死,剖开腹腔,取出子宫,检查两侧子宫内的胚胎植人数 着床数)、早死胎,晚死胎和活胎数 雄性动物每间隔一定时间再与另一批未经染毒且未交配过的雌性 动物交配,如此共进行数批,以保证覆盖一个精子周期 试验方法 6.1受试物配制 受试物首选蒸僧水作溶剂,如受试物不溶于水,可用食用油(如玉米油、橄榄油等),食用淀粉,0.5%
GB/T15670.18一2017 竣甲基纤维素钠配成乳浊液或悬浊液 受试物应于灌胃前新鲜配制,除非有资料表明以溶液(或乳浊 液、悬浊液)保存具有稳定性 如不是常用溶剂,应有参考资料并说明其成分及选做溶剂的原因 6.2实验动物 6.2.1动物的选择 应选用低背景的显性致死率、高奸娠率、高植人数,健康、性成熟的动物品系,推荐用大鼠或小鼠,动 物品系一般选用两个近交系的杂交一代或远交系动物,所有动物均应性成熟 大鼠雄性为50只,雌性 至少需800只;小鼠雄性为75只,雕性至少需900只;按体重随机分成染毒组和对照组,共五组 雄性 动物给予受试物后每只动物分笼饲养 为避免同一群体动物中保留的劣性致死遗传因子的影响,雌雄 鼠不能来自同一杂交群 6.2.2饲养环境 6.2.2.1检疫、适应时间;检疫、适应3d~5d 饲养环境;应符合GB14925的有关规定 6.2.2.2 6.3剂量与分组 6.3.1染毒组 -般设三个染毒剂量组 剂量水平的确定应参照先前的毒性试验和预试验结果 如已知受试物的 LD.,高剂量的设计约为1/3L.D1/10LD.,高剂量应能使实验动物出现毒性反应或繁殖能力轻微 降低 然后以高剂量组的1/3和1/10作为中剂量和低剂量 若受试物LD不能测出时，可用 5000mg/Ak体重或5mL/kg体重的剂量作为最大剂量 染毒途径一般采用经口染毒 6.3.2对照组设定 6.3.2.1每次试验每一样品都应设置相应的阳性对照和阴性(溶剂)对照,除不给予受试物染毒之外,对 照组动物应与染毒组动物以相同方式进行操作 6.3.2.2阳性对照的染毒途径可不同于受试物染毒途径,以出现预期的阳性结果,证实试验系统敏感 性 常用阳性对照物参见附录A 6.3.2.3阴性对照为溶剂对照 如果没有历史对照资料证明所用溶剂、载体无细胞毒性或无致突变作 用,则应增设空白对照 6.4染毒方式 将雄性动物以设计好的剂量和途径染毒,连续染毒5d,阴性对照组给予相应溶剂 阳性对照组在 第5天时染毒一次 其他的染毒方式应说明理由 6.5试验步骤 6.5.1交配 在最后一次染毒后的当天,将每只雄鼠单放在一只笼内,与2只3只未交配过的雌鼠同笼5d,5d 后移走雌鼠(一般同笼5d,交配率可达90%) 雌鼠放人另外笼中分组群养,直到处死 雄鼠休息2d 后再放人第二批未交配的雌鼠继续交配 小鼠连续6周~8周,大鼠连续8周~12周 为防止鼠龄、体 重对结果的干扰,用于每批交配的雌鼠周龄、体重要近似
GB/T15670.18一2017 6.5.2剖检 把同笼的第3天作为受孕第1天,在受孕第13天至第14天时用颈椎脱臼法处死动物,取出卵巢和 子宫内容物进行检查 检查项目包括黄体数、总着床数、早死胎、晚死胎和活胎数 胚胎鉴别如下 活胎;完整成形,色鲜红,有自然运动,机械刺激后有运动反应 a b 早死胎;胚胎形体较小,外形不完整,胎盘较小或不明显 最早期死亡胚胎会在子宫内膜上隆 起如一小瘤 如已完全被吸收仅在子宫内膜上留一隆起暗褐色点状物,称为吸收胎 晚死胎:成形,色泽暗淡,无自然运动,机械刺激后无运动反应 试验结果和评价 7.1试验结果 7.1.1用表格列出试验中获得的各试验组及对照组动物的全部原始数据,内容应包括雄性动物编号 与之交配的雌性动物编号、染毒剂量、交配时间、体重、各雌性动物的总着床数、活胎数,死胎数、吸收胎 数及黄体数 7.1.2按式(1)式(8)计算各组雌鼠的受孕率、着床前死亡率、着床体死亡率、平均活胎数、平均死胎 数、吸收胎数,有1个以上死胎的孕鼠率及致突变指数 以上指标除致突变指数外,均按周次分别计算 受孕雌鼠数 100% 受孕率- 交配雕鼠数 总着床数=活胎数十死胎数十吸收胎数 黄体数一总着床数 着床前死亡率=- ×100% 黄体数 死胎数十吸收胎数 着床体死亡率 ×100% 总着床数 活胎总数 平均活胎数 =受掌雕鼠总数 死胎或吸收脸总数 平均死胎数或吸收胎数= 受孕雕鼠总数 有1个以上死胎的孕鼠数 有1个以上死胎的孕鼠率- ×100% 受孕雌鼠总数 死亡胜胜数 l100 致突变指数 总着床数 7.1.3对试验组及对照组各数据进行统计学分析及显著性检验 7.1.4可能情况下计算剂量-效应与剂量-反应关系 7.2试验结果的评价 判断阳性结果的标准为: 平均活胎数显著降低; aa b) 平均死胎、吸收胎数显著增加; 有1个或多个死胎的雌鼠率增加 c 染毒组与对照组比较，上述指标随剂量增高而增加且具有统计学意义,或至少显示有一种指标明显 增加并具有统计学意义时,即可判为该受试物在本试验系统中的试验结果为阳性 如果受试物不引起上述指标与剂量有关的有统计学意义的增加,或者在任何剂量水平上均没有可 重复的并有统计学意义的增加,则可认为该受试物在本试验系统中的试验结果为阴性
GB/T15670.18一2017 8 试验报告 试验报告至少应包括以下内容 试验名称、试验单位名称和联系方式,报告编号 a b 试验委托单位名称和联系方式、样品受理日期和封样情况 c 试验开始和结束日期试验项目负责人,试验单位技术负责人、签发日期; d 试验摘要; 受试物名称、有效成分美国化学文摘登录号(CAs号)(如已知)、代码(如有、纯度(或含量)、 剂型、生产日期(批号,理化性质、配制所用溶剂和方法; f 实验动物种属、品系、级别、数量、体重、性别来源(供应商名称,实验动物质量合格证号、实验 动物生产许可证号),检疫,适应情况,实验动物饲养环境,包括温度、相对湿度、饲料单笼饲养 和群饲、实验动物设施使用许可证号; 剂量和组别包括选择剂量的原则或依据、剂量和组别、动物分组方式和每组每种性别动物数; g h试验条件和方法,包括主要仪器设备、染毒途径、染毒方案、交配情况的描述(交配时间、交配结 果、剖检动物的时间 ,试验周期,观察指标等; 试验结果;以文字描述和表格逐项进行汇总,包括各组受孕率、着床前死亡率、着床体死亡率 平均活胎数、死胎数、吸收胎数、有1个以上死胎的孕鼠率及致突变指数,各组数据的计算方法 及计算结果; 试验结论;给出受试物在本试验条件下是否能引起显性致死突变的结论,必要时对有关问题进 i 行讨论; 原始记录保存情况的说明 k
GB/T15670.18一2017 附 录 A 资料性附录 常用阳性对照物 常用阳性对照物见表A.1 表A.1常用阳性对照物 阳性对照物 CAS号 参考剂量与途径 三亚乙基嗜胺(triethylenemelamine) 51-18-3 0.3mg/kg体重(ip) nmg/kg体重I次)(ip 400 甲磺酸乙(ethylmethanesulfonate 62-50-0 100mg/kg体重(5次)(ip 50-18-0 环磷酰胺(eyelophosphami 0mg/kg体重(ip) mide 6055-19-2 50 环磷酰胶(单水)(eyelophosphamidemonohydrat mg/k区体重100mg/kg体重(ip

农药登记毒理学试验方法第18部分：啮齿类动物显性致死试验GB/T15670.18-2017

啮齿类动物显性致死试验是农药登记毒理学试验中的一个重要环节。这个试验可以用于评估农药对啮齿类动物的急性毒性，即在短时间内对实验动物产生致命影响的能力。

该试验主要针对大鼠和小鼠进行，通常采用口服或注射的方式给予实验动物不同剂量的农药，并观察其反应情况。根据实验结果，可以确定该农药的LD50值，即半数实验动物死亡需要接受的农药剂量。

这项试验的标准为GB/T15670.18-2017，《农药登记毒理学试验方法 第18部分：啮齿类动物显性致死试验》。该标准规定了试验所用的实验动物、试验程序、结果判断等方面的具体要求。

在进行啮齿类动物显性致死试验时，需要特别注意实验动物的福利问题。实验室应该提供适宜的环境和饲养条件，并定期检查实验动物的状态，确保它们受到最小化的痛苦和困扰。

总之，啮齿类动物显性致死试验是农药登记毒理学试验中不可或缺的一环。通过该试验可以评估农药对啮齿类动物的急性毒性，为农药的安全使用提供科学依据。

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