几丁质酶活性检测方法

几丁质酶活性检测方法

国家标准 GB/T34799一2017 几丁质酶活性检测方法 Determinationoftheactivityofehitinase 2017-11-01发布 2018-05-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/34799一2017 分析步骤 7.1试验液的制备 7.1.1固体样品待测酶液制备 称取10mg样品,精确至0.1mg,加人溶液A至固体样品完全溶解,并适当稀释,使得最后的溶液 中含有0.8U/ml1.0U/mL的酶活力 7.1.2液体样品待测酶液制备 将液体酶样适当稀释,使得最后的溶液中含有0.8U/ml1.0U/ml的酶活力 7.2雨促反应 取2只离心管,其中样液处理管加人0.8mL溶液B,0.2mL试验液 空白对照管加人0.8mL溶 液B.0.2mlL水 盖紧高心管,涡旋震荡,使几丁质保持悬浊状态 样液处理管和空白对照管在37C 反应2h 反应结束后,100它水浴终止反应,冷水浴冷却到37 每管中加人0.16ml的溶液G 7C涡旋震荡反应30min 离心后取上清 7.3分光光度分析 取8只离心管,分别标记为0号~5号管、样液测试管和空白测试管 0号一5号管用于绘制标准 曲线,加样方法如表1所示 样液测试管加人0.5ml样液处理管上清液,l.0ml.水,0.75mL溶液E 空白测试管取0.50mL空白对照管上清,1.0ml水,0.75ml溶液E 100C水浴5min 结束后冷却 到室温,在540nm处测吸光度值,记录每管的A 540nm 表1标准曲线加样方法 溶液 0号管 1号管 2号管 3号管 4号管 5号管 溶液H/ml 0.0 0.1 0,2 0.3 0.4 0.5 水/ml 1.5 1.4 l.3 1.2 1. l.0 0.75 0.75 0.75 溶液E/ml 0.75 0.75 0.75 结果计算 8.1标准曲线 1号5号管AAs为其A0与0号管A的差值 1号5号管对应的N-乙酰葡萄糖量分 别为0.05nmg,0.10mg,0.15mg,0.20mg,0.25nmg 以1号5号管对应的N-乙酰葡萄糖量为横坐 标,AAn为纵坐标,采用最小二乘法拟合线性回归方程 样品的4As的为样品测试管A0与空白 测试管A0,的差值 通过标准曲线计算生成的N-乙酰葡萄糖的量
GB/T3479g一2017 8.2样品酶活性计算 8.2.1液体样品按式(1)计算: m×1.16×d X 12×0.5又0. 式中: 几丁质酶活性,单位为酶活力单位每毫升(U/mL); -由标准曲线计算出催化生成的N-乙酰葡萄糖的质量,单位为毫克(mg); m 样品稀释倍数 d 1.16 样液处理管反应液最终体积,单位为毫升(mL):; 120 反应时间,单位为分钟(min); 0 5 取样液处理管上清的体积,单位为毫升(mL); 参与反应的试验液体积,单位为毫升(mL). 0.2 计算结果保留三位有效数字 8.2.2固体样品按式(2)计算: nm1×1.16×V×d X m2又120×0.5又0,.2 式中 X -几丁质酶活性,单位为酶活力单位每克(U/g); 由标准曲线计算出催化生成的N-乙酰葡萄糖的质量,单位为毫克(mg); m V 样品溶解液体积,单位为毫升(mL); 样品稀释倍数; d 样品质量,单位为克(g); m 样液处理管反应液最终体积,单位为毫升(mL); 1.l6 反应时间,单位为分钟(min) 20 取样液处理管上清的体积,单位为毫升(mL)1 0.5 参与反应的试验液体积,单位为毫升(mL) 0.2 计算结果保留三位有效数字 8.3重复性 在重复性条件下获得的两次独立测定结果差值的绝对值不得超过算术平均值的10%

几丁质酶活性检测方法GB/T34799-2017

简介

几丁质酶是一种水解几丁质的酶，广泛存在于自然界中，如微生物、昆虫、甲壳动物等。由于几丁质在生物体内的分布很广泛，故几丁质酶的研究也具有重要意义。几丁质酶活性检测方法GB/T34799-2017是由国家标准化管理委员会发布的全国标准，该标准规定了几丁质酶活性的测定方法。该标准适用于从微生物、植物、动物和环境样品中测定几丁质酶的活性。

方法

几丁质酶活性检测方法GB/T34799-2017主要包括以下步骤：

• 准备试样

将待测的几丁质酶样品和反应底物溶液分别稀释到一定的浓度。如若需要进行前处理，按照相应方法进行前处理。

• 准备酶反应体系

将适量的准备好的几丁质酶、反应底物、缓冲液和其他辅助试剂混合制成酶反应体系，使其充分混合，达到最适宜的反应条件。

• 开始反应

将准备好的反应体系加入设备中，在一定的温度和时间下引发酶反应，并记录反应时间和温度，保证实验数据的可靠性。

• 终止反应

用适当的试剂迅速终止反应，停止几丁质酶活性的变化，如不同试剂对几丁质酶具有不同的终止作用，应根据实际情况选择合适的试剂。

• 测定反应产物

对反应产物进行检测，包括生成产物的浓度、吸光度等。

• 计算几丁质酶活性

据反应产物的检测结果，计算几丁质酶的活性值。如果需要进行数据处理，可以采用一些常见的统计学方法。

应用

几丁质酶活性检测方法GB/T34799-2017广泛应用于生物制品、环境监测等方面。在生物制品中，几丁质酶活性检测可以用于评估生物制品的纯度和质量；在环境监测中，几丁质酶活性检测可以用于评估土壤、水体等环境样品中几丁质酶的分布和活性，对于环境污染的监测和评估具有重要意义。

总结

几丁质酶活性检测方法GB/T34799-2017是一种标准化的几丁质酶活性测定方法，在生物制品、环境监测等领域有着广泛的应用。在实际操作中，需要根据样品的特点选择合适的前处理方法和反应条件，保证实验结果的精确性和可靠性。

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