GB/T32268-2015
十八烷基键合相(C18)高效液相色谱柱性能测定方法
Methodofperformancetestingforoctadecylbonded(C18)highperformanceliquidchromatography(HPLC)column
- 中国标准分类号(CCS)N04
- 国际标准分类号(ICS)71.040
- 实施日期2016-07-01
- 文件格式PDF
- 文本页数17页
- 文件大小411.21KB
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十八烷基键合相(C18)高效液相色谱柱性能测定方法
国家标准 GB/T322682015 十八炕基键合相(C18)高效液相色谱柱 性能测定方法 MethodofperformmancetestingforoctadeeybondedC18highperformance liquidchromatgraphy(HPLC)column 2015-12-10发布 2016-07-01实施 中毕人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中 国国家标准化管厘委员会国家标准
GB/T32268一2015 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草
本标准由科学技术部提出
本标准由全国仪器分析测试标准化技术委员会(SAC/TC481)归口
本标准负责起草单位;天津博纳艾杰尔科技有限公司
本标准参加起草单位;分析测试协会,北京大学、科学院化学研究所、计量科学研究 院、食品药品检定研究院、北京有色金属研究总院、沃特世科技(上海)有限公司,大连依利特分析仪 器有限公司、北京金欧亚科技发展有限公司
本标准主要起草人;王宛、汪群杰,赵羽、张学云,张庆合,刘国、刘虎威胡昌勤、汪正范、蔡会霞、 汪若梅
GB/T32268一2015 十八炕基键合相C18)高效液相色谱柱 性能测定方法 范围 本标准规定了十八烧基键合相高效液相色谱柱简称“C18HPLC柱”)性能的测定方法 本标准适用于C18HPLC柱性能的测定
规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的
凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件
凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T9008液相色谱法术语柱色谱法和平面色谐法 GB/T32287分析仪器性能测定术语 JG705液相色谱仪检定规程 术语和定义 GB/T9008和GB/T32267界定的以及下列术语和定义适用于本文件 3.1 十八炕基键合相(c18)高效液相色谱柱octadeeylbondedhighperformanceliquidchromatography column 装有键合十八烧基的固定相的高效液相色谱柱
3.2 柱内径columninternaldiameter 色谱柱柱管的内径
3.3 疏水保留因子retentiontactorofhydrophobieity 表征C18固定相的c18烧基链的相对数量的参数,与填料颗粒的比表面积和表面碳覆盖率有关
3.4 疏水选择性因子seleetivityfactorofhydrophobieity aihp 表征C18固定相对被分离物质分子疏水基团的选择识别能力的参数,与填料颗粒的表面碳覆盖率 有关
3.5 立体选择性因子sterieseleetiviyfaector a8 表征C18固定相对被分离物质分子形状的选择识别能力的参数,与填料颗粒表面的官能团键合度
GB/T32268一2015 和碳覆盖率有关
3.6 氢键容量因子hydrogenbondimgeapaeityfactor aH 表征C18固定相的氢键作用的参数,与纯水中填料颗粒表面残留的游离硅羚基数量有关
总离子交换容量因子totalionexchangecapacityfactor aB 表征C18固定相在pH7.60的流动相中离子交换能力的参数,与填料颗粒表面的硅羚基数量及其 他离子交换位点的数量有关
3.8' 酸性环境中离子交换容量因子ionexchangecapacityfactorinaeidicsolutionm aA 表征c18固定相在pH2.60的流动相中离子交换能力的参数,与在pH2.60时填料颗粒表面的离 子交换位点的数量有关
3.9 金属活性因子metalactivityfactor aM 表征c18固定相表面杂质金属的含量及配位能力的参数
3.10 酸性化合物选择性因子seleetiityftaectorforacidieeompound aSA 表征C18固定相对酸性化合物和中性化合物的分离能力的参数
在实际测定中,其下标中可标示 出具体测定物质的名称,如as家船
3.11 碱性化合物选择性因子seleetivityfaetorforbasiceompound as 表征C18固定相对碱性化合物和中性化合物的分离能力的参数
在实际测定中,其下标中可标示 出具体测定物质的名称,如as叫米替林
试剂和材料 除另有说明外,所用试剂的级别应不低于分析纯级,水的级别符合GB/T6682一级水的规定
4.1甲醇(CH,OH):色谱纯
4.2乙睛(CH.cN)色谱纯
4.3磷酸二氢伊(KH.PO,). 4.4磷酸(H,PO.》. 4.5氢氧化俐(NaO) 4.6氢氧化钾(Ko 47 三氟乙酸(CF.cOOH) 4.8三乙胺(C,HN). 4.9尿嗜(CH,N,(O.)
4.10正丁基苯(CH.
GB/T32268一2015 4.11正戊基苯(CH). 4.12邻三联苯(CH)
4.13苯并菲(CH). 4.14咖啡因(C.HN,O.). 4.15苯雨(C.H.oH 4.16笨散(c.H.NH) 4172.3二龄基装(c,H.o,) 4.182,7-二羚基葬(CmH.o). 4.19阿米替林(CHN)
4.20尿苷(C,HN.O.
氢氧化钠调节液 4.21 称取4O《复氧化的,游于100mL水中 4.22氢氧化钾调节液 称取5.60《氢氧化钾,溶于10.0mL水中
4.23磷酸盐缓冲液(pH2.60) 称取1.38g磷酸二氢钾,置于合适的烧杯中,溶解于480.0mL水,用浓磷酸调节p值至2.60,然 后转移并定容于500.0mL的容量瓶中,得到pH2.60的磷酸二氢钾缓冲液
4.24磷酸盐缓冲液(pH5.80) 称取1.36g磷酸二氢钾,置于合适的烧杯中,溶解于480.0ml水,用氢氧化钾调节液(4.22)调节 pH值至5.80,然后转移并定容于500.0ml的容量瓶中,得到pH5.80的磷酸二氢钾缓冲液
4.25磷酸盐缓冲液(pH7.6o) 称取1.36g磷酸二氢钾,置于合适的烧杯中,溶解于480.0ml水,用氢氧化钾调节液(4.22)调节 pH值至7.60,然后转移并定容于500.0mL的容量瓶中,得到pH7.60的磷酸二氢钾缓冲液
5 仪器和设备 5.1高效液相色谱仪 高效液相色谱仪应符合JG705的规定,并满足以下各项要求 a 检测器 nm400nm 高效液相色谱仪配备紫外-可见光检测器,其波长范围覆盖190 即可
流通池和 采集频率的设定办法为: 当测试普通液相色谱柱时,检测器的流通池体积不大于15L,采集频率不小于10Hz
2)当测试超高效液相色谱柱时,检测器的流通池体积不大于5AL,采集频率不小于20Hz
注:超高效液相色谱柱指装填有基于亚2Am硅胶基质或亚3m核壳式硅胶基质的固定相的液相色谱柱
此处所 述硅胶基质包括碳杂化硅胶基质
b柱温箱 高效液相色谱仪需配备柱温箱,其温度设定值最大允许误差为士2C,温度稳定性为不大于 C/h
连接管线 色谱柱需要通过材质为PEEK或者不锈钢的连接管线连接到进样器和检测器之间
色谱柱 和进样器或者检测器之间的连接管线的长度均不超过25cm
连接管线的内径尺寸根据色谱 柱的内径尺寸进行选择 1当色谱柱的柱内径小于2.1mm时,连接管线的内径为0.13nmm
GB/T32268一2015 2)当色谱柱的柱内径大于或等于2.1mm且小于或等于4.6mm时,连接管线的内径为 0.18mm
当色谱柱的柱内径大于4.6nmm且小于21.2mm时,连接管线的内径为0.25mm 3 4当色谱柱的柱内径大于或等于21.2mm时,连接管线的内径为0.5mm
5.2分析天平 准确度级别为I级,实际标尺分度值0.1mg 5.3移液器 量程分别为0.1nmL1.0mL和1.0mL10.0mL
5.4量筒 规格为500.0ml
5.5容量瓶 规格分别为10.0mL,100.0mL和500.0mL
5.6plH计 精度为0.01
6 条件 6.1 仪器工作条件 6.1.1环境温度:15一30C
6.1.2相对湿度;20%80%.
6.1.3供电电源;交流220V士22V,频率50Hz士0.5Hz
6.1.4室内应清洁无尘,具有良好的通风装置,无易燃、易爆和腐蚀性气体
6.1.5仪器应平稳地放在工作台上,周围无影响仪器使用的振动和电磁干扰,仪器接地良好
6.2试验准备条件 6.2.1试验用计量仪器、仪表和玻璃器皿均应按有关规定,经计量检定单位检定合格并满足量程和精 度的要求
6.2.2在试验前将满足5.1要求的高效液相色谱仪调整至正常工作状态,按照各项性能指标测定所需 的液相色谱条件设定好仪器参数,配制好流动相
将选定好的C18HPIc柱通过连接管线正确地连接 在液相色谱仪的进样器和检测器之间
6.2.3启动高效液相色谱仪的泵,进行排气等操作
同时检查各管路接口,确保没有漏液的情况
以 至少10倍柱体积的流动相平衡色谱柱,待基线平稳后,可以进行测定工作
性能指标的测定 7.1总则 分别测定C18HPLC柱的疏水性、立体选择性、氢键容量、总离子交换容量、酸性环境中离子交换
GB/T32268一2015 容量、金属敏感性、酸/碱性化合物的选择性、碱性化合物峰型对称性、柱效、,100%水耐受性、低pH值耐 受性和高pH值耐受性
测定时,部分液相色谱条件参数的设定办法参考附录A 7.2疏水性的测定 7.2.1测试用溶液的配制 称取5.0mg尿喘唯,量取2.50mL正丁基苯和2.50mL.正戊基苯,一起用甲醉溶解并定容于 100.0ml
的容量瓶中,作为储备液
另取1.0ml储备液,用甲醇定容至10.0ml的容量瓶,得到疏水 性测试用溶液
7.2.2液相色谱条件 流动相;甲醇:水=80:20(体积分数) 流速;参考附录A; 检测波长;254nm.: 柱温:30C; 进样体积;参考附录A
7.2.3测定步骤 进样疏水性测试用溶液,等待色谱图中最后一个色谱峰全部出现完,至少1.0min后,停止本次检 测
记录色谱图中各色谱峰的保留时间数值(需精确到0.01min),按式(1)及式(2)计算疏水保留性因 重复测定3次,取平均值
子a
和疏水选择性因子a细
tR成基粮一tR屎膀脱 a 1R尿喘刚 R收x tR屎喘吹 am /RT精苯 lR屎睹脸 式中: 戊基苯的保留时间,单位为分(min); lR戊基辈 丁基苯的保留时间,单位为分(min); /R丁基装 尿喀啶的保留时间,单位为分(min). tR保联腔 7.3立体选择性的测定 7.3.1测试用溶液的配制 分别称取5.0mg尿喘唁,50.0mg邻三联苯,50.0mg苯并菲,用甲醇溶解并定容于100.0ml的容 量瓶中,作为储备液
另取1.0ml储备液,用甲醇定容至10.0mL的容量瓶,得到立体选择性测试用 溶液
7.3.2液相色谱条件 流动相;甲醇:水=8020(体积分数) 流速:参考附录A; 检测波长;254 nm 柱温;30C 进样体积;参考附录A
GB/T32268一2015 7.3.3测定步骤 进样立体选择性测试用溶液,等待色谱图中最后一个色谱峰全部出现完,至少1.0min后,停止本 次检测
记录色谱图中各色谱峰的保留时间数值(需精确到0.01min),按式(3)计算立体选择性因子a
重复测定3次,取平均值
lR苯并菲 lR尿睹吹 3 a城 tR够三联装 lR屎喘脱 式中: 苯并菲的保留时间,单位为分(min); lR辈井林 邻三联苯的保留时间,单位为分(min); lR邻三联辈 -尿密的保留时间,单位为分(min)
lR屎喘刚 7.4 氢键容量的测定 7.4.1测试用溶液的配制 分别称取5.0m尿嘴碗、.50.0mg咖啡因和300.0m苯酌,用甲醉溶解并定容于100.0ml的容量 瓶中,作为储备液
另取1.0mL储备液,用甲醇定容至10.0mL的容量瓶,得到氢键容量测试用溶液 7.4.2测定条件 流动相;甲醇:水=30:70(体积分数); 流速;参考附录A; 检测波长;254nm; 柱温:30C; 进样体积:参考附录A 7.4.3测定步骤 进样氢键容量测试用溶液,等待色谱图中最后一个色谱峰全部出现完,至少1.0min后.停止本次 检测
记录色谱图中各色谱蜂的保留时间数值(需精确到0.01min),按式(4)计算氢键容量因子a 重 aHa 复测定3次,取平均值
lR布睡因一tR尿睹咬 aH lR菜船一1R尿赌处 式中 -咖啡因的保留时间,单位为分(min); /R嘟啡 苯酚的保留时间,单位为分rmin); tR装前 尿喀的保留时间,单位为分(min)
lR尿喘脆 7.5总离子交换容量的测定 7.5.1测试用溶液的配制 分别称取5.0g尿嗜、300.0mg苯酚,量取1.50ml苯胺,一起溶解于甲醇并定容于100.0mL 的容量瓶中,作为储备液
另取1.0m储备液,用甲醇定容至10.0mL的容量瓶,得到离子交换容量 测试用溶液
GB/T32268一2015 7.5.2测定条件 流动相甲醇磷酸盐缓冲液(4.25)=30:70(体积分数). 流速;参考附录A; 检测波长;254nm:; 柱温:30C; 进样体积;参考附录A
7.5.3测定步骤 进样总离子交换容量测试用溶液,等待色谱图中最后一个色谐峰全部出现完,至少1.0min后,停 记录色谱图中各色谱峰的保留时间数值(需精确到0.01 止本次检测
min),按式(5)计算总离子交换容 量因子aw
重复测定3次,取平均值 lR尿喘脱 lR笨胶 a lR尿喘脱 lR笨朋 式中 苯胺的保留时间,单位为分(min) 1R装 苯酚的保留时间,单位为分(min) tR紫前 尿密唁的保留时间,单位为分 min lR尿喘脆 7.6酸性环境中离子交换容量的测定 7.6.1测试用溶液的配制 分别称取5.0mg尿唁,300.0mg苯酚,量取1.50m苯胺,一起溶解于甲醇并定容于100.0mL 的容量瓶中,作为储备液
另取1.0m储备液,用甲醇定容至10.0ml的容量瓶,得到酸性环境中离 子交换容量测试用溶液
7.6.2测定条件 流动相:甲醇:磷酸盐缓冲液(4.23)=30:70(体积分数) 流速;参考附录A; 检测波长;254nm:; 柱温;30C; 进样体积;参考附录A
7.6.3测定步骤 进样酸性环境中离子交换容量测试用溶液,等待色谱图中最后一个色谱峰全部出现完,至少 1.0min后,停止本次检测
记录色谱图中各色谱峰的保留时间数值(需精确到0.01min),按式(6)计算 酸性环境中离子交换容量因子aA
重复测定3次,取平均值 lR股 iR尿胀晚 aA lR苯9 tR尿喘吨 式中 苯胺的保留时间,单位为分(min) 'R苯胶 -苯酚的保留时间,单位为分min); tR苯前 尿喀唁的保留时间,单位为分(min lR尿喘脆
GB/T32268一2015 7.7金属敏感性的测定 7.7.1测试用溶液的配制 分别称取5.0mg尿唁、80.0mg2,3-二羚基茶和20.0mg2,7-二羚基茶,溶解于甲醇并定容于 100.0mL的容量瓶中,作为储备液
另取l.0mL储备液,用甲醇定容至10.0mL的容量瓶,得到金属 活性测试用溶液A
另外称取80.0mg2,3-二胫基禁,溶解于甲醇并定容于100.0m的容量瓶中,作为储备液
另取 1.0m储备液,用甲醉定容至10.0ml的容量瓶,得到金属活性测试用溶液B 7.7.2测定条件 流动相:甲醉水=6535(体积分数) 流速;参考附录A; 检测波长:230nm; 柱温:30C; 进样体积;参考附录A 7.7.3测定步骤 进样金属活性测试用溶液A,等待色谱图中最后一个色谱峰全部出现完,至少1.0min后,停止本 次检测
重复测定3次
取下色谱柱,用两通阀代替色谱柱
基线平衡后进样金属活性测试用溶液B
等待色谱图中最后 个色谱峰全部出现完,至少1.0min后,停止本次检测
重复测定3次
记录溶液A的色谱图中各色谱峰的保留时间数值(需精确到0.01nmin)和2,3-二羚基綦色谱峰的 面积(A,拖尾因子(Tf.3三 a三段林着)的数值
记录溶液B的色谱图中2,3-二羚基茶色谱峰的面积(A2. 按式(7)计算金属活性因子aM,按式(8)计算2,3-二胫基禁的回收率Ra.小二於从着
取3次结果的平均值
lRe2,3-二经基茶 R尿胀唉 a iR尿胀略 R ×100% 2.3-二段基恭 式中: -2,3-二羚基禁的保留时间,单位为分(min); le,3二经基器 -2,7-二胫基禁的保留时间,单位为分(r min; te,7二经基茶 -尿喀唁的保留时间,单位为分(min). lR尿喘吹 7.8酸/碱性化合物的选择性的测定 7.8.1测试用溶液的配制 7.8.1.1酸性化合物选择性测试用溶液 分别称取5.0mg尿喘嚏、150.0mg苯酚和15.0mg慕溶解于甲醇并定容于100.0mL的容量瓶 中,作为储备液
另取1.0mL储备液,用甲醇定容至10.0mlL的容量瓶,得到酸性化合物选择性测试 用溶液
7.8.1.2碱性化合物选择性测试用溶液 分别称取5.0mg尿密晓、50.0mg阿米替林和15.0mg綦溶解于甲醇并定容于100.0ml的容量
GB/T32268一2015 瓶中,作为储备液
另取1.0mL储备液,用甲醇定容至10.0mL的容量瓶,得到碱性化合物选择性测 试用溶液
7.8.2测定条件 流动相如下 a)甲醇:磷酸盐缓冲液(4.23)=70:30(体积分数) b)甲醇:磷酸盐缓冲液(4.25)=70;30(体积分数); 流速:参考附录A; 检测波长:254nm; 柱温:30C; 进样体积:参考附录A
7.8.3测定步骤 分别进样酸/碱性化合物的选择性测试用溶液,等待色谱图中最后一个色谱峰全部出现完,至少 1.01 min后,停止本次检测
记录色谱图中各色谱峰的保留时间数值(需精确到0Imin),校式(9)及式 (10)分别计算pH2.60和pH!7.60时,酸性化合物选择性因子a、和碱性化合物选择性因子a 重复 as
测定3次,取平均值
R笨船 R尿喘哒 9 asA=as装M 'R剂 lR尿喘刚 tR阿米替林 tR保睹腔 10 aSBQs阿米替林 lR恭 tR尿腾奖 式中: 酸性化合物苯酚的选择性因子; as笨厢 碱性化合物阿米替林的选择性因子 as阿米替林 苯酚的保留时间,单位为分(nmin); tR装前 阿米替林的保留时间,单位为分(min); lR阿米替林 禁的保留时间,单位为分(min); /R禁 -尿啼唁的保留时间,单位为分 min lR尿喘 7.9碱性化合物峰型对称性的测定 7.9.1测试用溶液的配制 称取50.0mg阿米替林,溶解于甲醇并定容于100.0mL的容量瓶中,作为储备液
另取1.0mL储 备液,用甲醉定容至10.0ml的容量瓶,得到碱性化合物峰型对称性测试用溶液
7.9.2测定条件 流动相;根据CI8HPLc柱不同的键合方式和封尾方式进行配制
当测试采用单官能团试剂键合,未封尾的c18HPI.c柱时,流动相为甲醇:磷酸盐缓冲液 (4.24)=70:30(体积分数). 当测试其他c18HPLc柱时,流动相为甲醇;磷酸盐缓冲液(4.25)=70:30(体积分数). 流速;参考附录A 检测波长:254nm 柱温;30 进样体积:参考附录A
GB/T32268一2015 7.9.3测定步骤 进样碱性化合物峰型对称性测试用溶液,等待色谱图中最后一个色谱峰全部出现完,至少1.0minm 后,停止本次检测
重复测定3次,将阿米替林的拖尾因子(Tf阿来转样)的结果取平均值
7.10柱效的测定 7.10.1测试用溶液的配制 称取100.0mg尿嗜和10.0mg茶,溶解于甲醉并定容于100.0m的容量瓶中,作为储备液
另 取1.0mL储备液,用甲醇定容至10.0ml的容量瓶,得到柱效测试用溶液
7.10.2测定条件 流动相:甲醉水=85:15(体积分数); 流速;参考附录A; 检测波长;254 nm 柱温:30C 进样体积:参考附录A
7.10.3测定步骤 进样柱效测试用溶液,记录此时的系统压力P,等待色谱图中最后一个色谱峰全部出现完,至少 1min后,停止本次检测
重复测定3次
取下色谐柱,用两通阀代替c18HPLC柱,待液相色谱仪显示的压力稳定后,记录此时的压力P 重复测定3次
记录色谱图中帮色谱峰的柱效N,按式(11)计算柱压P P=P一P
取3次测定结果的平均值
7.11100%水耐受性的测定 7.11.1老化条件 老化流动相:水; 柱温:40C; 流速;参考附录A; 老化时间:4.0h
7.11.2测试用溶液的配制 称取50.0mg尿苷,溶解于水并定容于100.0ml的容量瓶中,作为储备液
另取1.0m储备液 用甲醇定容至10.0mL的容量瓶,得到100%水耐受性测试用溶液
7.11.3以尿苷为测试对象时的柱效测定条件 流动相;水 流速;参考附录A; 检测波长:254nm; 柱温30C; l0
GB/T32268一2015 进样体积:参考附录A
7.11.4测定步骤 按7.11.3的条件预先测试一只c18HPLC柱的柱效,然后用水为流动相老化C18HPLC柱4h,停 止系
至少15min后启动泵,进样100%水耐受性测试用溶液,等待色谱图中最后一个色谱峰全部出 现完,至少1.0min后,停止本次检测
记录色谱图中各色谱峰的保留时间数值(需精确到0.01min) 尿苷的拖尾因子和柱效,以老化后测得结果减去老化前测得的结果,计算得到A原#,ATf眼#和An原开
重复测定3次,取测定结果的平均值
7.12低pH值耐受性的测定 7.12.1三氟乙酸水溶液的配制 量取500.0mL.水,用三氟乙酸调节其pH值至所需数值
该数值为待测c18HPLC柱的说明书上 所宣传的适用pH值范围的下限值
7.12.2老化条件 老化流动相;甲醇;三氟乙酸水溶液=40;60(体积分数); 柱温:60C; 流速;参考附录A 7.12.3低pH值耐受性的柱效测定 见7.10柱效测定 7.12.4测定步骤 按7.l0的柱效测试方法预先测试一只c18HPLc柱的柱效
然后按7.12.2的条件老化该c18 HIPLC柱,每隔24h,按7.10柱效测定的方法测定该色谱柱的柱效
每次进行柱效测定时,需重复测定3次,取测定结果的平均值
以2h为单位,根据每个时间点的 测定结果绘制出一个慕色谱峰的保留时间,拖尾因子及桂效随着老化时间的变化曲线图,即低pH值耐 受性测定结果的曲线图
曲线图示例参见附录B 当紫色谱峰的保留时间、拖尾因子及柱效等3个参数中任意一个参数的变化不小于15%时,结束 测定工作;或者当老化时间达到120h时,即使上述变化均小于15%,也结束测定工作
7.13高p值耐受性的测定 7.13.1三乙胺水溶液的配制 量取500.0mL水,用三乙胺调节其pH值至所需数值
该数值为待测c18HPILC柱说明书上所宜 传的适用pH值范围的上限值
7.13.2氢氧化钠水溶液的配制 量取500.0mL水,用氢氧化钠调节液(4.21)调节其pH值至所需数值
该数值为待测c18HPlc 柱说明书上所宣传的适用pH值范围的上限值
7.13.3老化条件 老化流动相根据不同的pH值范围进行配制 1l1
GB/T32268一2015 当pH值为9.012.0时,流动相为甲醇:三乙胺水溶液=40:60(体积分数); a b)当pH值为12.0~14.0时,流动相为甲醉:氢氧化钠水溶液=40:60(体积分数); 柱温;50C; 流速;参考附录A
7.13.4高pH值耐受性的柱效测定 见7.10柱效测定
7.13.5测定步骤 按7.10的柱效测试方法预先测试一只C18HPLC柱的柱效
然后按7.13.3的条件老化该C18 HPLC柱,每隔24h,按照7.10柱效测定的方法测定该色谱柱的柱效
每次进行柱效测定时,需重复测定3次,取测定结果的平均值
以24h为单位,根据每个时间点的 测定结果绘制出一个禁色谱峰的保留时间、拖尾因子及柱效随着老化时间的变化曲线图,即高pH值耐 受性测定结果的曲线图
曲线图示例参见附录B 当茶色谱峰的保留时间、拖尾因子及柱效等3个参数中任意一个参数的变化不小于15%时,结束 测定工作;或者当老化时间达到120h时,即使上述变化均小于15%,也结束测定工作
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GB/T32268一2015 附录A 资料性附录 流动相的流速和进样体积的确定方法 流动相的流速和C8HPLC柱的柱内径、填料颗粒直径的对应关系
假设流速为Fe(mL/min)柱内径为$(mm),填料颗粒直径为d(m). 表A.1流动相的流速和c18PLc柱的柱内径,填料颗粒直径的对应关系表 流速/mL/min 颗粒直径/" /pm Fe 4.6 2 Fc I. A.2进样体积和c18HPLC柱的柱内径的对应关系
假设进样体积为vl),柱内径为(mm》 表A.2进样体积和c18HIc柱的柱内径的对应关系表 进样体积/L 柱内径/mm V=5 V=10 20 V=50 20 13
GB/T32268一2015 附 录B 资料性附录 十八婉基键合相(c18)高效液相色谱柱性能的测定报告 根据上述测定方法,将某一色谱柱的性能测定结果列出,作为选用色谱柱时的参考
报告格式 如下 色谱柱名称 规格 测试用高效液相色谱仪 疏水性测定结果 氢键容量测定结果 H 立体选择性测定结果 总离子交换容量测定结果 d 酸性环境中离子交换容量测定结果 金属敏感性测定结果 aM Tf.二羚糕茶 R 2",3-二羚基养 酸/碱性化合物的选择性测定结果 pH2.60时 as笨 as阿米替 pH7.60时 as辈份 a啊来铃林 柱效测定结果 柱压变化范围 碱性化合物峰对称性测定结果 T 阿米精林 10 100%水耐受性测定结果 AT/w A川果n A/屎价 14
GB/T32268一2015 1 低pH值耐受性测定结果曲线 保留时间/minm 柱效,单位: 万 推尾因子 20 60 so 100 140 120 时间 高pH值耐受性测定结果曲线 12 保留时间/minm 万 柱效,单位 拖尾因子 1 80 100 120 140 20 60 时间
十八烷基键合相(C18)高效液相色谱柱性能测定方法GB/T32268-2015
高效液相色谱柱是一种常见的分离技术,其性能的好坏不仅影响到分离效果,还会直接影响到后续的分析结果。而 C18 型高效液相色谱柱由于其较强的分离能力和广泛的适用范围,在实际应用中得到了广泛的应用。
为保证 C18 型高效液相色谱柱的质量,GB/T32268-2015制定了关于其性能测定方法的标准。该标准主要包括以下内容:
- 理论板数的测定:通过这项测定可以评估 C18 型高效液相色谱柱的分离效果。测定方法包括使用荧光标准品进行测试,根据检测结果计算出理论板数。
- 保留指数的测定:该项测定主要用于评估 C18 型高效液相色谱柱对化合物的保留能力。具体来说,就是将不同的标准品分别加入到样品中,并通过比较其相对保留时间来进行评估。
- 耐久性的测定:该项测定主要用于评估 C18 型高效液相色谱柱的使用寿命和稳定性。具体来说,就是将柱子经过多次反复使用后,观察其分离效果是否发生变化。
- 扭曲度的测定:该项测定用于评估 C18 型高效液相色谱柱的各向异性。具体来说,就是通过检测流速的变化来评估柱子是否存在扭曲等问题。
以上四项内容是 GB/T32268-2015 标准下对 C18 型高效液相色谱柱的主要性能测定方法。同时,该标准还对 C18 型高效液相色谱柱的相关性能要求进行了规定,主要包括拆分度、耐压性、耐水性等方面。
总的来说,GB/T32268-2015标准对 C18 型高效液相色谱柱的性能测定和相关要求进行了详细规定,为保证其质量和性能提供了可靠的技术支持。同时,在实际应用中也需要注意定期检测和维护,以确保其稳定性和可靠性。