国家标准 GB/T38171一2019 金属蛰合层析介质 Metalchelatingchromatgraphiemedium 2019-10-18发布 2019-10-18实施国家市场监督管理总局发布币国国家标准化管理委员会国家标准
GB/38171一2019 前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由标准化研究院提出并归口本标准起草单位:科学院过程工程研究所、标准化研究院、中科森辉微球技术(苏州)有限公司本标准主要起草人;黄永东,赵岚,朱凯、吴学星、马光辉、苏志国、巩方玲、马爱进、杨维兴、王少云
GB/38171一2019 金属蛰合层析介质范围本标准规定了金属整合层析介质的分类,技术要求、检测方法,检验规则、标签、标志,包装运输和贮存本标准适用于金属整合层析介质的生产与检测规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB/T191包装储运图示标志 GB/T5475离子交换树脂取样方法 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法药典(2015年版术语和定义下列术语和定义适用于本文件金属整合层析介质metalchelatingechromatographiemedium 二乙酸或者次氮基三乙酸键合在琼脂糖分离介质上,再整合金属离子Nif+(或其他金属将亚氨基二离子)而形成的一类层析介质分类按整合剂种类分为亚氨基二乙酸型金属整合层析介质(IDA)和次氮基三乙酸型金属整合层析介质 NTA 技术要求 5 5.1外观要求金属整合层析介质应球形饱满、表面光滑,在光学显微镜下应具有透明性 5.2性能要求应符合表1中的规定
GB/T38171一2019 表1金属鳌合层析介质的主要性能要求指标项目 DA NTA 范围粒径比(W载经/% 90" 粒径平均粒径(/m 90.0士13.5 最高流速"/(cm/h >270 15.00 配基密度"/4mol/ml 36,00 动态载量(Q)'mg/mL 40.00 100 菌落总数/CFU/mL pH3.0 <0.16 0.35 5-羚甲基糠醛脱落量/(4g/mL. pH13.0 <0.1o <0.15 粒径在45.04m165.0Am范围内试样颗粒的体积与全部试样颗粒体积之比在0.10MPa压力下可达最高流逃每毫升介质对Ni?+的赘合量毫升介质对孔酸脱氢膀(HtisugedLDH)的吸附量每 o 检测方法 6.1外观 6.1.1样品处理按照GB/T5475直接从产品中抽取5mL样品,置于50mL.G3型号砂芯漏斗中抽干5min 用符合GB/T6682的三级水清洗5次,每次2" ,最后用真空泵在0.1MPa压力下抽干5min 将洗净的 min 金属整合层析介质置于烧杯中,向其中补加三级水,保证金属赘合层析介质上应有2cm的三级水混匀后得到金属赘合层析介质与水的混合体系 6.1.2样品观测用塑料吸管吸取混合体系置于载玻片上,调整显微镜放大倍数以视野里80%以上面积均为金属整合层析介质为标准,用塑料吸管增减载玻片上的金属整合层析介质,最后用盖玻片压上调节光学显微镜焦距,使视野中的影像清晰拍摄金属鳌合层析介质照片并保存 6.2粒径 6.2.1样品处理方法同6.1.1 6.2.2样品检测设置激光粒度仪参数如下;测量颗粒类型为通用型,分散剂类型为水,分析模式为单峰模式,添加样品进行测定
GB/38171一2019 6.2.3结果计算 6.2.3.1 范围粒径比按式(1)计算: w较楼式中范围粒径比,%; w轻6 w 粒径为k(nm)颗粒的体积与全部试样颗粒体积之比,% 6.2.3.2平均粒径按式(2)计算了一 2 式中所统计的一定数量介质颗粒的平均粒径,单位为微米(m), d 单个颗粒的粒径单位为微米(pm) N -所统计的介质颗粒的数目在重复性条件下获得的三次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10% 6.3最高流速 6.3.1样品处理方法同6.1.1 6.3.2样品装柱选用中1.60cm×20.00cm的层析柱,堵住柱子出口,将介质与水的混合浆液倒人层析柱中,静置，控制介质床层高度为10.00em士0,20em,柱子上端充满水打开柱子人口,以0.5mL/min的流速连续向柱中通人10个柱体积的三级水,床层稳定后即可进行测试 6.3.3样品测定将层析柱连人中低压层析系统测定时,从零开始设定一定流速u,(mL/min),保持该流速51 min 后,记录此时柱压,(MPa) 继续增加流速,并测定相应流速下的柱压直到压力达到0.10MPa为止,此时对应流速记录为o 6.3.4结果计算按式(3)计算 60oa1 F，式中 F -最高流速,单位为厘米每小时(em/h); nmax 在0.10MPa压力下的体积流速,单位为毫升每分(mL/min). U0.
GB/T38171一2019 -层析柱截面积,单位为平方厘米(cemi); 60 分钟转化为小时的换算系数在重复性条件下获得的三次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10% 6.4配基密度 6.4.1溶液配制 6.4.1.1 氨-氯化铵缓冲液甲,pH10.0 将氯化铵68.00g溶于300ml三级水中,加浓氨水570ml,用三级水稀释,调pH为10.0,最后定容至1000mL 6.4.1.2氨-氯化铵缓冲液乙,pl10.0 称取氯化铵5.40g,加三级水50ml溶解后,加35mL浓氨水,用三级水稀释,调pH为10.0,最后定容至100mL 6.4.1.35/L铬黑T指示液称取0.50g铬黑T加盐酸胫胺4.00g溶于100ml乙醇中 6.4.1.4紫脉酸胺指示剂称取紫脉酸胺1.00g,加氯化钠100.00g于研钵内研成粉状,装人棕色干净的广口瓶中备用 6.4.1.50.10mol/L乙二胺四乙酸二钠简称EDTA标准溶液称取40.00g乙二胺四乙酸二钠溶于1000ml三级水中,冷却,摇匀 6.4.1.60.10mol/L，EDTA标准溶液的标定称取0.2500g于800灼烧至恒重的基准氧化锌,称准至0.0001g 用少量三级水湿润,加5ml 20%的盐酸溶液使样品溶解,加10ml三级水,用10%氨水溶液中和至pH78,加10ml氨-氯化铵缓冲液甲(pH10)及5滴5g/L铬黑T指示液,用配制好的EDTA标准溶液滴定至溶液由紫色变为纯蓝色同时作空白试验 6.4.1.7EDTA标准溶液浓度计算按式(4)计算: C:TA V一V×0.08138 式中乙二胺四乙酸二钠标准溶液的浓度,单位为摩尔每升(mol/L) TN 氧化锌质量,单位为克(g); V 乙二胺四乙酸二钠溶液用量,单位为毫升ml); V，空白试验用乙二胺四乙酸二钠用量,单位为毫升(mL) 0.08138 1.00ml乙二胺四乙酸二钠标准溶液转化为相当质量氧化锌的换算系数 6.4.1.80.05mol/LNi(NO)标准溶液称取1.45gNi(NO 6H.0溶于100ml三级水中
GB/38171一2019 6.4.1.90.05mol/LNiNo)，标准溶液的标定准确量取50mL上述配制的Ni(NO溶液置于250ml三角瓶中,用氨水调节pH值至7~8,加人50ml氨-氯化铵缓冲液乙,0.,25g紫脉酸胺指示剂,用0.1mol/儿的EDTA标准溶液进行滴定至溶液由黄色变为紫色为终点记录所消耗的EDTA标准溶液的体积VrAa 6.4.2样品处理按照GB/T5475直接从产品中抽取5m样品,置于50mL.G3型号砂芯漏斗中用三级水清洗 5次,每次2min,再用0.1mol/儿EDTA溶液清洗5次,每次5min,将介质上整合的金属离子清洗净，最后用三级水清洗5次,每次2min,真空泵在0.1MPa压力下抽干5” min 6.4.3样品装柱称取2.00【抽干的介质,将其与水的混合浆液倒人层析柱中,堵住柱子出口,静置,待柱床层稳定打开柱子人口,连续向柱中通人三级水(10个柱体积),保持床层稳定 6.4.4样品测定准确量取50mlNi(NO)标准溶液,匀速通过柱内,立即收集流出液;再用50ml三级水洗涤，同时收集流出液,将所有收集的流出液混合上述收集的Ni(NO.)流出液用氨水调节pH值至78,加人50ml氨-氯化铵缓冲液乙,0.25g 紫脉酸胺指示剂,用0.1mol/L的EDTA标准溶液进行滴定至溶液由黄色变为紫色为终点记录所消耗的EDTA标准溶液的体积Vn ETA,1o 6.4.5结果计算根据式(5)计算 CTA(VETA.O V EDTA1 ×1000 5 pN记 n1×l.4 式中金属赘合层析介质配基密度,单位为微摩尔每毫升(4mol/mL): pNe -EDTA标准溶液浓度,单位为摩尔每升(mol/L) CEDT Ni(NO.标准溶液消耗EDTA标准溶液体积,单位为毫升(mL). VErA0 V -收集到的Ni(NO流出液消耗EDTA标准溶液体积,单位为毫米mL); EIA, 金属聋合层析介质质量,单位为克(g); m 金属赘合层析介质质量转化为体积的换算系数 1.4 在重复性条件下获得的三次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10% 6.5动态载量 6.5.1溶液配制 6.5.1.1缓冲液A,pH7.4 准确称取5.80gNaHPO12H,O,0.59gNaH.PO2H,O,5.84gNaCl和3.40g咪幽,用三级水溶解,调节pH至7.4,再定容至1000mL,最后用0.454m孔径的滤膜过滤 6.5.1.2缓冲液B,pH7.4 准确称取2.90gNaeHPO12H.O,0.29gNaHPO2H.O,2.92gNaCl和17.02g咪陛,用三
GB/T38171一2019 级水溶解,调节pH至7.4,再定容至500mL,最后用0.45m孔径的滤膜过滤 6.5.1.3 Histua2elLDH样品(纯度>95% 称取300.0mgHis-taggedlDH冻干粉(用二级水透析后冻干,纯度>95%),溶解于100ml缓冲液A中,浓度为3.0mg/mL,按照《药典(2015年版)(0731)考马斯亮蓝法标定蛋白浓度,再用0,.45Mm孔径的滤膜过滤 6.5.1.41%(体积分数)丙酮溶液准确量取01mL丙酬,加三级水混合,定容至" 10ml 6.5.2样品处理方法同6.1.1 6.5.3样品装柱选用1.60cm×20.00cm的层析柱,堵住柱子出口,将介质与水的混合浆液倒人层析柱中,静置控制介质床层高度为5.00cm士0.20cm,柱子上端充满水打开柱子人口,以2.0ml/ /min的流速连续向柱中通人10个柱体积的三级水,床层稳定后即可进行测试 6.5.4样品测定将层析柱连在层析系统中,并检测280nm处紫外线(UV)信号,对载量测定过程进行监控动态结合载量用50%穿透值表示测量并记录样品HlietaggedLDH的100%UV信号,包括不结合到介质上的HistaggedLDH的紫外吸收用缓冲液A以2.0ml/min流速平衡层析柱至紫外基线平衡,以2.0mL/min流速上样,待流穿曲线中HistaggedLDH的UV信号浓度为50%的样品浓度时上样结束,记录上样体积上样结束后用缓冲液A以2.0mL/min的流速平衡紫外信号至基线;用缓冲液B以2.0mL/min的流速进行洗脱计算动态载量非保留条件下穿透体积测定;将层析柱连在层析系统中,并检测280nm处UV信号，上样10l 1%丙酮,记录下出现UV信号最大时对应的体积 6.5.5结果表示按式(6)计算: C,(V-V Qo V 式中 Qm% 介质的动态载量,单位为毫克每毫升(mg/mL); C 蛋白起始浓度,单位为毫克每毫升(mg/ml); V 柱出口蛋白浓度C达到人口蛋白浓度C.的50%时流出液体俱,单位为毫升(mL) V 非保留条件下穿透体积,单位为毫升(mL); 介质体积,单位为毫升(mL. 'ee 在重复性条件下获得的三次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10% 6.6菌落总数 6.6.1样品前处理方法同6.1.1
GB/38171一2019 6.6.2样品测定参照《药典(2015年版)(ll05)非无菌产品微生物限度检查--微生物计数法进行取lmL抽干介质,加人ml三级水,采用涡旋混合器混匀样品将含有30mL胰蛋白陈大豆琼脂培养基的锥形瓶121.0C灭菌20min,放人40.0C恒温箱中,待培养基冷却到40.0C时,用微量移液器吸取1mL混匀后的样品加人该锥形瓶中,混匀,把混合物倒人培养皿中,盖好上盖在室温下使混合物凝固把培养皿置于恒温箱中35.0C孵育5d 6.6.3结果计算孵育期后检查培养皿计数菌落形成单位数(CFU) 在重复性条件下获得的三次独立测定结果的不得超过5CFU/mL悬浮液 6.75-羚甲基糠醛脱落量 6.7.1溶液配制 10%(体积分数)甲醇水溶液 6.7.1.1 准确量取100ml色谱纯无水甲醇,与900mL二级水混合均匀,再用0.224m孔径的滤膜过滤,超声除气泡 6.7.1.25-胫甲基糠醛标准储备溶液准确称取20.0mg5-羚甲基糠瞪标准物质于1o0ml容量瓶.用10ml.10%甲醉水游液溶解,定容,配成0.20mg/mL的标准储备液 6.7.1.31mmo/L，盐酸溶液，pH3.0 量取0.083ml浓盐酸(12mol/L)稀释定容为1000ml,调节pH为3.0. 6.7.1.4100mmol/L氢氧化钠溶液，pH13.0 准确称取4.00g氢氧化钠固体,溶于100mL三级水中,待冷却至室温后用三级水定容为1000mL 调节pH为13.0. 6.7.1.5标准工作溶液分别吸取5-胫甲基糠醛标准储备溶液5AL、15AL25AlL40L50AL、100AL、1ml、2ml至 /ml、 100mL容量瓶中,用10%甲醇水溶液稀释至刻度，配成0.014g/ml、0.03 s/'ml.005e/" 0.08从g/ml,0.104g/ml,0.204g/ml、l.004g/ml2.004g/mL标准工作溶液现配现用 6.7.2样品处理清洗方法同6.1.1 然后取若干份1.00g抽干金属赘合层析介质置于带盖玻璃试管内分别取 10 mLpH3.0和pH13.0的溶液置于各试管内样品管在40.0C条件下培养 7d后将上层清液转移到干净的试管内上层清液经旋转燕发(60.0C,50r/min),定容至2mL,加人等体积12mol/儿盐酸,100.0C水解 lh 定容至5mL 用0.45m滤膜过滤,得到样品待测液 6.7.3样品测定高效液相色谱条件;色谱柱选择Cu,5m,250mmX4.6mm(内径) 流动相是10%甲醇水溶液
GB/T38171一2019 流速1.0mL/" /min 检测波长285nm 柱温30.0C 进样量10AL 以上述高效液相色谱条件对标准工作溶液和样品待测液进行检测记录标准工作溶液的保留时间以及峰面积,以峰面积对相应浓度绘制标准工作曲线以标准工作溶液的保留时间对样品进行定性,并记录下该保留时间处峰的面积,用标准工作曲线对样品进行定量 6.7.4结果计算按式(7)计算: CV X 1.4 m1× 式中 -每毫升介质中5-羟甲基糠醛的脱落量,单位为微克每毫升(4g/mL); 从工作曲线求得的试样溶液中5-羚甲基糠醛的浓度,单位为微克每毫升(4g/mL); V 试样经盐酸水解后最终的定容体积,单位为毫升(mL); -称取的金属整合层析介质的质量,单位为克(g); n 1.4 金属整合层析介质质量转化为体积的换算系数在重复性条件下获得的三次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10% 检验规则 7.1组批同一工艺周期生产,质量均一的产品为一批 7.2抽样按GB/T5475的规定进行 7.3出厂检验每批产品出厂前应进行检验,检验合格的产品方可出厂出厂检验项目为第5章中规定的粒径、最高流速、配基密度、动态载量和菌落总数 7.4型式检验 7.4.1正常生产时,每半年应进行一次型式检验,有下列情况之一时应进行型式检验 a 新产品试制鉴定时; b 正常生产后,如原料、工艺、设备有较大变化,可能影响产品性能时; c 产品停产半年以上恢复生产时; d 出厂检验结果与上次型式检验有较大差异时; 监督机构提出要求时 e 7.4.2型式检验项目为第5章中规定的所有项目 7.5判定规则 7.5.1出厂检验判定和复检 7.5.1.1出厂检验项目符合7.3中项目要求,判定本批为合格品 7.5.1.2出厂检验项目12项不符合要求,应复检,复检后如仍有1项不符合要求,则判定该批为不合
GB/38171一2019 格品 7.5.1.3出厂检验项目超过2项不符合要求,判定该批产品为不合格品 7.5.2型式检验判定和复检 7.5.2.1型式检验项目符合7.4中项目要求,判为合格品 7.5.2.2型式检验项目13项(含3项)不符合要求,应复检,复检后如仍有1项不符合要求,则判定该批为不合格品 7.5.2.3型式检验项目超过3项不符合要求,判定该批产品为不合格品标签、标志、包装,运输和贮存 8.1标签应至少包括以下内容: 产品名称; a b)型号; 体积; c d生产批号; e 生产组织; f 生产日期; 有效期; hh) 注意事项 8.2标志包装储运标识应符合GB/T191的规定 8.3包装宜选用塑料瓶包装,包装材料应确保产品在运输、贮存时不被污染和泄漏 8.4运输应在常温环境下运输,避免过冷或过热,且采取措施防止产品失水 8.5贮存应在4C8C环境下贮存,有效期为五年,超过有效期可按本标准规定进行复验,若复验结果符合标准要求,仍可使用

金属螯合层析介质GB/T38171-2019介绍

一、定义

金属螯合层析介质是指具有特定金属离子配位团的多孔材料，用于分离和富集化合物混合物中的目标分子。其中，金属离子配位团可以是氨基、羧基、磷酸基、吡啶基等。

二、分类

根据金属离子配位团的不同，金属螯合层析介质可以分为以下几类：

以氨基为配位团的层析介质，如IDA-Ni、IDA-Cu、IDA-Zn等；
以羧基为配位团的层析介质，如IDA-Fe、IDA-Al、IDA-Ca等；
以磷酸基为配位团的层析介质，如IMAC-Ag、IMAC-Ni、IMAC-Cu等；
以吡啶基为配位团的层析介质，如NTA-Ni、NTA-Fe、NTA-Cu等。

三、性能指标

金属螯合层析介质的性能指标包括以下几个方面：

化学稳定性：介质在不同溶液条件下的耐受性；
选择性：介质对目标分子的选择亲和力；
容量：介质可结合的目标分子的数量；
动态吸附/解吸性能：介质对目标分子的快速吸附和洗脱能力；
再生性：介质的可再生性及重复使用次数。

四、GB/T38171-2019标准

GB/T38171-2019是中国国家标准化委员会发布的关于金属螯合层析介质的行业标准。该标准规定了金属螯合层析介质的命名、分类、性能指标、测试方法、使用要求等内容，对于保证金属螯合层析介质的质量和应用具有重要意义。

五、总结

金属螯合层析介质是一种重要的分离材料，具有广泛的应用前景。GB/T38171-2019标准为行业提供了一致的标准规范，将有助于推动金属螯合层析介质的研究和应用。