化妆品中螺内酯、过氧苯甲酰和维甲酸的测定高效液相色谱法

化妆品中螺内酯、过氧苯甲酰和维甲酸的测定高效液相色谱法

国家标准 GB/T24800.3一2009 化妆品中螺内酯 过氧苯甲酰和维甲酸的测定 高效液相色谱法 Determinationofspironolacton benzoylperoxideandtretinoinincosmeticsby highperformanceliquidchromatographymethod 2009-11-30发布 2010-05-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T24800.3一2009 引 言 本标准中的被测物质螺内酯、维甲酸是我国《化妆品卫生规范》规定的禁用物质,不得作为化妆品生 产原料即组分添加到化妆品中 如果技术上无法避免禁用物质作为杂质带人化妆品时,则化妆品成品 应符合《化妆品卫生规范》对化妆品的一般要求,即在正常及合理的、可预见的使用条件下,不得对人体 健康产生危害 目前我国尚未规定这些物质的限量值,本标准的制定,仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法
GB/T24800.3一2009 化妆品中螺内酯、 过氧苯甲酰和维甲酸的测定 高效液相色谱法 范围 本标准规定了化妆品中螺内酯、过氧苯甲酰和维甲酸的测定方法 本标准适用于皮肤护理类化妆品中螺内酯,过氧苯甲酰和维甲酸的测定 本标准对于螺内前、过氧苯甲酷的检出限均为2.5mg/kg,定量限均为mg/kg;维甲酸的检出限 为1mg/kg,定量限为2.5mg/kg 原理 以甲醇为溶剂，超声提取、离心,0.45的有机滤膜过滤,溶液注人配有二极管阵列检测器 DAD)的液相色谱仪检测,外标法定量 试剂和材料 除另有规定外,试剂均为分析纯 甲醉;色谱纯 3.2螺内酯,纯度不小于97%;过氧苯甲酰,纯度不小于97%;维甲酸,纯度不小于99.9% 3.3螺内酯标准储备液淮确称取螺内酯0.1g,精确到0.0001g,于50mL烧杯中,加适量甲醉溶解 后移人100mL容量瓶中,用甲醉定容至刻度,即得螺内酯溶液浓度为1000mg/L的标准储备液 冰 箱冷藏保存 3.4过氧苯甲酰标准储备液;准确称取过氧苯甲酰0.1g,精确到0.0001g,于50mL烧杯中,加适量 甲醇溶解后移人100m容量瓶中,用甲醇定容至刻度,即得过氧苯甲酰溶液浓度为1000mg/L的标 准储备液 注，由于过氧苯甲酰遇水易分解,每次使用时需现用现配 3.5维甲酸标准储备液;准确称取维甲酸0.1g,精确到0.0001g,于50ml烧杯中,加适量甲醇溶解 后移人100ml容量瓶中,用甲醇定容至刻度,即得维甲酸溶液浓度为1000mg/L.的标准储备液 冰 箱避光冷藏保存 注:由于维甲酸对光十分敏感,见光容易分解变质,操作应在避光条件下进行 3.6标准混合溶液:分别移取10mL的上述三种标准储备液(3.33.4、3.5)至100mL容量瓶中,用甲 醇定容至刻度,即得三种物质均为 1100mg/L的混合标准储备液 3.7标准工作溶液;用甲醉将上述标准混合溶液(3.6)分别配成一系列浓度1.0mg/L2.0mg/L 5.0mg/L,10mg/L,20mg/L,50nmg/L、100mg/L,200mg/1的标准工作溶液,现用现配 3.80.1mol/几的氢氧化钠溶液;称取氢氧化钠0.4g,精确到0.001g,于50mL烧杯中,加水溶解后 转移至100mL容量瓶中,加水定容至刻度,即得0.1mol/L的氢氧化钠溶液 3.90.025mol/L磷酸二氢钠溶液(pH6.5)称取磷酸二氢钠(NaH,PO 2H.o)3.9g精确至 0.001g于50ml烧杯中,加水溶解，移人1000ml容量瓶中,用水定容至刻度,混匀,即得到 0.025mol/L的磷酸二氢钠溶液 用0.1mol/L氢氧化钠溶液(3.8)调节pH值至6.5
GB/T24800.3一2009 仪器 4.1液相色谱仪,配有二极管阵列检测器" 4.2微量进样器,l0L 4.3超声波清洗器 4.4离心机,大于5000r/ min， 45溶剂过滤器和0.45pm有机过滤膜 4.6具塞比色管,10mL 测定步骤 5.1样品处理 称取化妆品试样约0.2g.精确到0.001g,于10ml具塞比色管中,加人8mL甲醉,在超声波清洗 器中超声振荡20min,冷却后用甲醇稀释至刻度,混匀 取部分溶液放人离心管中在离心机上于 5000r/min离心20min,离心后的上清液经0.45Am有机滤膜过滤,滤液待测定用 5.2测定 5.2.1色谱条件 5.2.1.1色谱柱;komaslc,柱(2350mmXt.昏mm内径.5m) 5.2.1.2流动相:A甲醇,B;0.025nmol/L磷酸二氢钠溶液(pH6.5)(3.9),梯度洗脱条件见表1 表1方法的梯度洗脱条件 时间/min A/% B/% 20 80 80 20 90 10 13 90 10 5.2.1.3流速;l.0ml/min:; 5.2.1.4柱温;25C; 5.2.1.5检测波长;0~9.50min,240nm,9.51nmin13min,335nm; 5.2.1.6进样量;l0aL 5.2.2标准工作曲线绘制 分别移取一系列浓度为1nmg/L、2mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、50mg/L、100mg/L、 200mg/L的混合标准工作溶液,按色谱条件(5.2.1)进行测定,以色谱峰的峰面积为纵坐标,对应的溶 液浓度为横坐标作图,绘制标准工作曲线 标准物质色谱图参见附录A的图A.1 5.2.3试样测定 用微量注射器准确吸取试样溶液(5.1)注人液相色谱仪,按色谱条件(5.2.1)进行测定,记录色谱峰 的保留时间和峰面积,由色谱峰的峰面积可从标准曲线上求出相应的被测物浓度 样品溶液中的被测 物的响应值均应在仪器测定的线性范围之内 被测物含量高的试样可取适量试样溶液用流动相稀释后 进行测定 5.2.4定性确认 液相色谱仪对样品进行定性测定,进行样品测定时,如果检出螺内酯过氧苯甲酰或维甲酸的色谱 峰的保留时间与标准品相一致,并且在扣除背景后的样品色谱图中,该物质的紫外吸收图谱与标准品的 紫外吸收图谱相一致,则可初步判断样品中存在螺内酯、过氧苯甲酰或维甲酸 必要时,阳性样品需用
GB/T24800.3一2009 其他方法进行确认试验 5.3平行试验 按以上步骤,对同一试样进行平行试验测定 5 空白试验 除不称取试样外,均按上述步骤进行 6 结果计算 结果按式(1)计算(计算结果应扣除空白值). ，V X，一 m1 式中: 样品中被测物质的质量浓度,单位为毫克每千克(mg/kg); 标准曲线查得被测物质的浓度,单位为毫克每升(mg/L) e -样品稀释后的总体积,单位为毫升(mL); -样品质量,单位为克g). N 方法检出限与定量限 螺内酯、过氧苯甲酰的检出限均为2.5mg/kg,定量限均为5mg/kg;维甲酸的检出限为1mg/kg 定量限为2.5mg/kg 回收率与精密度 在添加浓度5mg/kg50mg/kg浓度范围内,回收率在85%~110%之间,相对标准偏差小 于10% 允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%
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