河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中角黄素残留量的测定液相色谱-紫外检测法

河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中角黄素残留量的测定液相色谱-紫外检测法

国家标准 GB/T22958一2008 河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中角黄素 残留量的测定 液相色谱-紫外检测法 Determinationofcanthaxanthinresiduesinfugu,eelandbakedeel HPLC-UVmethod 2008-12-31发布 2009-05-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T22958一2008 前 言 本标准的附录A,附录B附录C为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口 本标准起草单位:秦皇岛出人境检验检疫局、青海出人境检验检疫 局和福建出人境检验检疫局 本标准主要起草人:薄海波、星玉秀、余孔捷、贾光群、曹彦忠、雏丽丽、贾红卫、庞国芳
GB/T22958一2008 河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中角黄素 残留量的测定 液相色谱-紫外检测法 范围 本标准规定了河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中角黄素(canthaxanthin)残留量的液相色谱-紫外检测方法和液 相色谱-串联质谱确证方法 本标准适用于河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中角黄素残留量的测定和确证 本方法的检出限为0.05mg/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度正确度与精密度第1部分:总则与定义 GB/T6379.1一2004,IsO5725-1:1994,IDT (GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度第2部分;确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法(GB/T6379.2一2004,IsO5725-2;1994,IDT) GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008,IsO3696;1987,MOD 原理 试样中的角黄素用乙晴提取,正已熔脱脂净化,高效液相色谱-紫外检测,外标法定量 高效液相色 谱-串联质谱法确证 试剂和材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯 水:GB/T6682,一级 4.2乙睛:色谱纯 4.3正己熔;色谱纯 乙睛饱和的正已炕;取少量乙腊(4.2)加人正己炕(4.3)中,充分混匀 静止分层后,取用上层正 己婉 4.5甲酸;优级纯 4.6无水硫酸钠;用前在650C灼烧4h,置于干燥器中冷却后备用 4.7焦性没食子酸 4.80.1%甲酸:移取1ml甲酸(4.5),以水定容1L 当天配制 4.9角黄素标准物质(CAs:514-78-3):纯度>95% 4.10标准储备溶液准确称取角黄素标准品5.0mg(精确到0.1nmg),用乙睛(4.2)溶解,转移至 50ml棕色容量瓶中并定容至刻度 该溶液浓度为100g/ml 储备液贮存在一18C冰柜中 4.11标准中间溶液:吸取1.00mL标准储备溶液(4.l0),移人10mL棕色容量瓶中,用乙睛定容,该
GB/T22958一2008 溶液浓度为10g/mL 4C冰箱中保存 4.12标准工作溶液;吸取一定量标准中间溶液(4.11),用流动相稀释至所需浓度 使用前配制 4.13滤膜:0.24m.a 仪器和设备 5.1高效液相色谱仪:配有紫外检测器 5.2液相色谱-串联质谱仪;配有电喷雾离子源(Es源). 5.3分析天平-感量0.lmg和0.0l《各一台 5.4旋涡混匀器 5.5离心机5000; / mln 5.6移液器;lml 5.7聚丙烯离心管.50mL 5.8旋转蒸发仪 5.9均质器 试样制备与保存 试样制备 抽取河豚鱼、鳗鱼及烤鳗等样品约500g,取可食用部分,绞碎,充分混匀,分装人洁净的容器内,密 闭并做好标记 在制样的操作过程中,应防止样品受到污染,且尽可能避光操作,尽量减少氧气接触机 会并尽快完成 在样品提取时严格控制操作温度,最高不超过35C,以防止角黄素含量发生变化 6.2试样保存 试样于一18C以下冷冻保存 测定步骤 7.1提取 称取5g试样(精确至0.01g)于50ml聚丙烯离心管中,加人10g无水硫酸钠,0.1g焦性没食子 酸,加乙睛2×20mL,均质提取1min 以3000r/min离心3min 合并提取液于另一个50mL聚丙 烯离心管中 待净化 7.2净化 在乙晴提取液中加人20ml乙晴饱和的正已炕(4.3),涡旋混匀后振荡3min,以2000r/min离心 2 min,弃去上层正己烧,取下层乙睛20ml，旋转蒸发近干,用5mL乙睛定容,过0.2Am滤膜,待 测定 测定条件 7 3 7.3.1液相色谱参考条件 a 色谱柱;BEHC,1.74m，50mm n×2.1mm(内径)或相当者; b 流动相:乙睛十0.1%甲酸溶液(97十3) e流速;0.30mL/min; d 柱温:30C; 进样量;5.0L 检测波长:470nm 7.3.2 色谱测定 根据试样中被测物质的含量情况,选取响应值适宜的标准工作液进行色谱分析 标准工作液和待 测样液中角黄素的响应值应在仪器线性响应范围内 标准工作液与待测样液等体积进样 在上述色谱
GB/T22958一2008 条件下,角黄素反、顺式异构体的保留时间分别为1.10min和1.26min 根据标准溶液色谱峰的保留 时间和峰面积,对样液的色谱峰进行定性并用外标法定量 角黄素标准溶液的液相色谱图参见附录A 中的图A.1 角黄素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图参见附录B中的图B.1 角黄素添加浓度 及其平均回收率的试验数据参见附录C中的表C.1 7.4确证 7. .41液相色谱参考条件 色谱柱;:BEHCw,1.7Am，50mm×2.1mm(内径)或相当者; 流动相:乙睛(4.2)十0.1%甲酸(4.8)(97+3); b 流速:0.40ml/min; d 柱温;35C; 进样量;5.0A山. e 质谱参考条件 离子源;电喷雾源EsI,正离子模式(EsI+) a b)扫描方式:多反应监测(MRMA); 毛细管电压;3.5kV; 锥孔电压:38V; 离子源温度:120C; 去溶剂气温度:400C 去溶剂气(氮气)流量:800L/h; g 锥孔气(氮气)流量(N-):50L/h:; 碰撞能量:20V:; 碰撞气流量;0.1L/h; 检测离子对:;定量;565.5/203.l;定性:565.5/203.1,565.5/133.1 k 7.4.3液相色谱-串联质谱确证 将各被测组分分别选择1个母离子,2个以上子离子,在相同的试验条件下,样品中待测物质的保 留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差士2.5%之内;且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接 近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较,若偏差不超过表1规定的范围,则可判定样品中 存在对应的待测物 表1定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 以%表示 20之K一50 10GB/T22958一2008 -从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL):; -样品溶液定容体积,单位为毫升(mL) -样品溶液所代表试样的质量,单位为克(g) n 计算结果应扣除空白值 精密度 9.1 一般规定 本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2规定确定的,其重复性和再现性的值 是以95%的可信度来计算 9.2重复性 在重复性试验条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r,试样中角黄素添加 浓度范围及重复性方程见表2 表2角黄素添加浓度及重复性和再现性方程 单位为毫克每千克 化合物名称 添加浓度范围 重复性限" 再现性限R 一0.G738k-0.549R=0.5387 0.05~2.0 lgm一0.5289 角黄素 lg"= 注:m为两次测定结果的平均值 如果两次测定值的差值超过重复性限r,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定 再现性 9. 3 在再现性试验条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R,试样中角黄素添加 浓度范围及再现性方程见表2
GB/T22958一2008 附 录A 资料性附录 标准物质液相色谱图 角黄素标准物质液相色谱图见图A.1 0.040 0.035 0.030 0.025 0.020 a.15 0.010 0.005 0.000 0.60 0,80 .00 1.20 1.40 1.60 1.80t/min 角黄素反式体 角黄素顺式体 图A.1角黄素标准物质液相色谱图
GB/T22958一2008 附 录 B 资料性附录 标准物质的多反应监测(MRM)色谱图 角黄素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图见图B.1 100- 8 0.50 .00 1.50 2.00 2.50 /mim 角黄素反式体 -角黄素顺式体 图B.1角黄素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图
GB/T22958一2008 c 附 录 资料性附录 回 收 率 角黄素添加浓度及其平均回收率的试验数据见表c.1 表c.1角黄素添加浓度及其平均回收率的试验数据 样品基质 添加浓度/mg/kg 平均回收率/% 0.05 87.6 0.10 92.3 河豚鱼 85.8 1.00 2.00 95.5 0,05 86.0 0.10 91.7 鳗鱼 1.00 92.4 2.00 89.9 0.05 88.3 0.10 94.4 烤鳗 97.o 1.00 2.00 87.5