蜂王浆中十八种磺胺类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法

蜂王浆中十八种磺胺类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法

国家标准 GB/T22947一2008 蜂王浆中十八种磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determinationof18sulfonamidesresiduesinryaljely一 LC-MS-MSmethod 2008-12-31发布 2009-05-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T22947一2008 前 言 本标准的附录A、附录B为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口 本标准起草单位;秦皇岛出人境检验检疫局 本标准主要起草人:贾光群、曹彦忠、张进杰、王占英、石玉秋、姚智慧、庞国芳
GB/T22947一2008 蜂王浆中十八种磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了蜂王浆中十八种磺胺类药物(见表2)残留量液相色谱-串联质谱测定方法 本标准适用于蜂王浆中十八种磺胺类药物残留量的测定 本标准的方法检出限均为5.04g/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度正确度与精密度第1部分:总则与定义 GB/T6379.12004,ISO5725-l:l994,IDT GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度第2部分:确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法GB/T6379.22004,ISO5725-2:1994,IDT GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008,IsO3696;1987,MOD) 原理 蜂王浆中磺胺类药物残留用去离子水提取,三氯乙酸沉淀蛋白,离心后，上清液经OasisMCX离子 交换柱"或相当的固相翠取柱净化,用氨水-甲醉裕液(I+19)洗脱并燕干,残渣用乙睛-0.0mol/几乙 pm滤膜后样品溶液供液相色谱-串联质谱仪测定,内标法定量 酸铵溶液溶解,过0.2 试剂和材料 水:GB/T6682,，一级 4.2甲醇;色谱纯 3 乙睛;色谱纯 4.4乙酸铵;优级纯 4" 三氯乙酸;优级纯 甲酸;优级纯 氨水;分析纯 4.80.o1mol/L乙酸铵溶液;称取0.77g乙酸铵(4.4)溶于1000ml水中 4.92%甲酸溶液;吸取2ml甲酸(4.6),用水稀释至100mL 4.1050%三叙乙酸溶液;称取20g三叙乙酸(4.5)溶于20mL水中 4.11氨水-甲醉溶液(1+19);吸取5mL氨水(4.7)与95ml甲醉(4.2)混合均匀 4 2 乙睛-0.01mol/儿L乙酸铵溶液(3十22);量取12ml乙晴(4.3)与88ml乙酸铵溶液(4.8)混合 均匀 OasisMcx离子交换柱是waters公司产品的商品名称,给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不是表 示对该产品的认可 如果其他等效产品具有相同的效果,则可使用这些等效产品
GB/T22947?2008 4.13?????:?(CAs68-35-9)?±(CAs:72-14-0)? CAs:l44-83-2??(CAs:127-79-7),?(CAS:1220-83-3)?? (CAs:144-82-1(CAs;57-68-1)?(CAs80-35-3)?? (CAS:651-06-9),?(CAs:80-32-0)???(CAs:723-46-6)?? CAs;2447-57-6),?(CAs:127-69-5)?(CAs:127-71-9)?(CAs: 102-65-8),?(CAs;526-08-9),?(CAs;1037-50-9)?(CAs59 40-5)>99% 0.1 /mL??;???????(413),ü?? mg/ 0 mg/mL????4C档 15 5.04g/ml????;????(4.14)0.5ml10nml ?,ü???5.04g/ml????4C档 4.16??;???-D4?-D4,?±-D4>99% 4.17 0.1mg/mL??-D4,??-D4,?-D4???;??? -D4?-D4,?±-D4?(4.16),ü??0.1mg/m?? ??4C档 4.18???;?????-D4,?-D4,?±-D?(4.17 0.5mL10mL?,ü?????4C档 4.19???;????(4.15)20L???(4.18),? /ml???? ???5.0ng/ml,10.0ng/ml,20.0ng/mL,50.0ng/ml100.0 ng ??? 4.20OasisMCx?:150mg,6mL?5ml(4.2)10mL? ? 4.21?;0.2Am. 5.1??-;е? 5.2?;0.1mg0.01 g 5 3 ????;50ml 5.4 5.5? 5.6??á 5.7?;50mL 5.8?? 5.9?:10mL ?? ? ???,???0.5kg??? ??,?,?? 6 ? ?18C?档
GB/T22947一2008 测定步骤 7.1提取 称取2g试样,精确至0.01g 置于50ml具塞的聚丙烯试管(5.3)中,加人20L内标工作溶液 (4.18),然后加人20mL.水,于液体混匀器(5.5)上快速混匀1min,再置于振荡器(5.4)上振荡提取 10min,加人0.5mL三氯乙酸溶液(4.10),快速摇动30s，以3000r/min离心5min,移取上清液至三 角瓶中,再向残渣中加人15mL水,重复上述步骤,合并上清液,待净化 7.2净化 将塞有玻璃棉的玻璃贮液器(5.7)连到OasisMCX柱(4.20)上,把上清液(7.1)倒人玻璃贮液器 中,调节流速小于3ml/min,待样液完全流出后,依次用5ml甲酸溶液(4.9)和5ml甲醉(4.2)洗柱， 弃去全部流出液 最后用5mL氨水-甲醇溶液(4.ll)洗脱,收集洗脱液于10mL浓缩管(5.9)中 用 氮气浓缩仪(5.8)于50C吹干 准确加人1.0ml乙睛-0.01mol/L乙酸铵溶液(4.12)溶解残渣,样液 过0.2m滤膜后,供液相色谱-串联质谱仪测定 按上述操作步骤,制备用于配制系列基质标准工作溶液的空白样品提取液 7.3测定条件 7.3.1液相色谱参考条件 a)色谱柱:AtlantisC,3m150mmX2.1mm(内径)或相当者; 流动相.A乙,B.a.1%甲酸水游液.c.甲醉 梯度洗脱条件见表1 b 流速:0.2mL/min; c d)柱温;35C; 进样量:20AL 表1流动相梯度表 A/% B/% C/% 时间/minm 0.00 10.0 80.0 10.0 3.00 20.0 70.0 10.0 8.00 35.o 55.0 10.0 12.00 70.0 20.0 10.0 12.01 l0.0 80.0 10.0 17.00 10.o 80.0 10.0 7.3.2质谱参考条件 a)离子源:电喷雾离子源; 扫描方式;正离子扫描; b 检测方式;多反应监测; 电喷雾电压;5500V; D 雾化气压力0.07MP 气帘气压力:0.069MPa; 辅助气流速:6L/min:; g h 离子源温度:350C; 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压见表2
GB/T22947?2008 2?????????,???? ? ?? ??? ? m/e) m/: 251/156 23 55 251156 ? sulfadiazine 27 251/185 50 256/156 55 ? 256/156 sulfathiazole 256/107 47 25o/156 50 ? sulfapyridine 250/156 250/184 60 265/156 50 ??? sulfamethoxypyridazine 265/156 265/172 60 281/156 65 ? sulfamonomethoxine 281156 281/215 50 271/156 50 20 ?? sulfamethizole 271/156 R8 271/107 50 279/156 55 ? sulfamethazine 279/156 20 279/204 60 281/156 65 281156 ?? sulfamethoxypyridazine 281/215 50 65 281/156 281156 ?? sulfameter 281/215 50 285/156 50 sulfachloropyridazine 285/156 ?? 50 285/108 254/156 50 ??? sulfamethoxazole 254/156 45 254/147 311/156 31 70 ?? sulfadoxine 31l/156 s 55 311/108 268/156 2 ?? sulfisoxazole 268/156 2 268/113 45 277/156 85 ? 77/156 sulfabenzamide 35 277/108 85 285/156 53 285/156 ?? sulfachloropyrazine 53 285/108 315/156 5 315/156 ? sulfaphenazole 55 315/160 311/156 70 ? sulfadimethoxine 311/156 70 31l1/218 301/156 sulfaquinoxaline 301/156 ?? 301/208 42
GB/T22947一2008 7.4液相色谱-串联质谱测定 7.4.1定性测定 将各被测组分分别选择1个母离子,2个以上子离子,在相同的试验条件下,样品中待测物质的保 留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在士2.5%之内;且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度 接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较,若偏差不超过表3规定的范围,则可判定样品 中存在对应的待测物 表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 以%表示 K>50 20GB/T22947一2008 -试样溶液中内标物的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL) -基质标准工作溶液中内标物的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL); C 基质标准工作溶液中内标物的色谱峰面积; 试样溶液中内标物的色谱峰面积; A -样液最终定容体积,单位为毫升(mL) 试样溶液所代表试样的质量,单位为克(g). 77 计算结果应扣除空白值 精密度 一般规定 本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的,其重复性和再现性的 值是以95%的可信度来计算 重复性 在重复性试验条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r,蜂王浆中十八种瞒 胺类药物添加浓度范围及重复性方程见表5 表5添加浓度范围及重复性和再限性方程 单位为微克每千克 化合物名称 添加浓度范围 重复性限r" 再现性限R 碱胺啖 5.050.0 gr=1.3195lgm-1.5661 lgr=l.2613lgm-1.2872 碱胺嘿哗 5,050,0 lg"=1.4281lgm一1.7573 gr=1.3766lgm-1.3357 =1.183 -0.9735 碱胺毗唉 -0.9337gm一1.0499 5.050.0 gr gr一 0lgm 碱胺甲基嗜 5.050,0 lgr=1.2787lgm一1.4852 lgr=1.2050lgm一1,14 碱胺间甲氧嗜 5.0~50.0 .3061lgm 6252" gr=1.1186lgm .0905 碱胺甲嚓二陛 5.050.0 lg尸=1.0851lgm 4269 =1.1774lgm一1.1627 lg 5.0~50,0 lgr=0.9582lgm" 1850 碱胺二甲喀 0287 lgr=l.0745lg 碱胺甲氧哒嗓 5.050.0 lgr=1.3423lgm gr=1.3141lg川-0.9663 2995 碱胶对甲氧喘唉 5.0~50,0 gr=0.8920lgm-1.0160 gr=0.9875lgm-0.905 碱胺叙哒嗓 5.050. lg" 4363 4154lgm lgr=1.3900lgm一1.1803 5.050.0 lgr=0.8369lgm一1.0303 gr=1.0966lgm-1.1560 磺胺甲基异嘻陛 5.050,0 1.0991 1.181 8 1.0857lg川一0.905" 磺胺邻二甲氧嗜嚏 磺胺二甲异曙陛 5.0~50,0 1470lgm 2670 =1.4686lgm-1.3792 lg lg 碱胺苯酰 5,0~50,0 0569lgm 2776 gr=1.4528lgm 4866 lgr 碱胺氯毗嗓 5,050.0 gr=0.8449lgmm 1208 lgr=0.9769lgm-0.821 碱胺苯毗陛 5.0一50,0 gr=1.1813lgm-l.481l gr=l.3630lgm-1.3707 =1.04771 1.317" 碱胺间二甲氧喘碗 gr- 7lgm一l.3232 lgr=1.3350lgm 5.050,0 碱胶唆嗯啾 g"=0.9185gm-1l.0654 -l.3522lg"一1.1577 gr 注:"为两次测定值的平均值 如果差值超过重复性限r,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定 9 再现性 在再现性试验条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R,蜂王浆中十八种磺 胺类药物添加浓度范围及再现性方程见表5
GB/T22947?2008 ?A ?? ????(MRN)?? ????????(MRM)???A.1 4.45 4,77 5.39 2.c4 2.0e4 2.5e4 l.8e4 2.0e" l.6e4 ?? ?? ? 2.0e4 1.4e4 1.2e4 1.5e4 .e 1.0e4 8000.0 1.0e4 6000.0 5000.0 4000.0 5000.0 2000.0 0.0 0.0 0.0 101214/in 2 I47minm 10 14minm 10 6,20 1.6e4 3.0e41 7.75 1.c4 7.76 1,44 ? 2.5e4 1.0e4 1.2e4 2.0e 8000.0 1.0e4 ??? ? ζt .5e1 6000.0 8000.0 6000.0 1.0e4 4000.0 4000.0 5000.0 2000.0 2000.0 0.0 0.0 0.0 12 Io1214/min" 1o24nin 14minm 10 7.83 8,75 2.5e4 1.ie4 8.01 3.0e4 1.5e4 2.0e4 2.5e4 1.4e4 1.2e4 2.0e4 ? ?ζ 1.5e4 1.0e4 ?? ,5e4 8000.0 1.0e4 600.0 1.0e4 4000.0 5000.0 5000.0 2000.0 0.0 0.0 0.0 0 4min" 4mn 4minm 10 10 3.5ef g.29g 7.0e41 ? 3.54 9.29 8.91 3.1 6.0e4 ? ..04 2.5e4 5.0e4 2.5c4 2.0e4 4.0e4 2.4 1.5e4 3.0e l.5e4 ?? ??? 1.04 ζ 2.0e4 l.04 500.0 5000.0 1.04 0.0 0.0 0.0 4min" 101214/min 1214/minn 2 10 ?A.1??????(MIRMI)??
GB/T22947?2008 10.50 2.0e4 9.72 .41 0, 3.5e4 1.8e4 4.5e4 ? 1.6e4 4.0" 3.0e4 1.4c4 3.5" 2.5e4 1.2:4 3.0e4 ?? ? 2.0e4 l.0e4 2.x4 1.be4 8000.0- 2.0e4 l.5be4 6000.o 1.0e4 1.0e4 4000.o 5000.0 5000.0 2000.0 0.0 0.0 0.0. 4min" T24minm 101214/min 10 11.22 l.l1 11.12 3.5e4 3.5e4 1.e5 3.0e4 1.es 3.0e4 2.c4 1.2e5 2.5e4 ? ?? 1.e5 2.0e4 ?? 2.0e4 B.0e1 ,5e4 1.5e4 6,04 l.0e4 1.0e4 4.0e4 5000.0 5000.0 2.0e4 0.0 a?n 101214/min 10 101214/min ?A.1
GB/T22947一2008 B 附 录 资料性附录 回 收 率 本方法中十八种磺胺类药物添加浓度及其平均回收率的试验数据见表B.1 表B.1十八种磺胺类药物添加浓度及其平均回收率的试验数据 化合物名称 添加浓度/ug/kg 平均回收率/% 104.9 5.0 10.0 l109,6 碱胶喘碗 20.0 99,0 107. 50.0 .0 5.0 99.5 98.5 10.0 磺胺嚷陛 20.0 95.8 50.0 l108,0 92.8 5.0 10.0 89.0 碱胺毗晓 20.0 94 4 50.0 91. 82.9 5.0 10.0 86.8 碱胺甲基喘唉 20.0 84.8 50.0 82.5 5.0 92.2 91.5 10.0 磺胺间甲氧密幡 93.0 20.0 50.0 98. 95.4 5.0 97.9 10.0 磺胺甲嚷二哩 20.0 96.1 50.0 00.2 97.4 5.0 94.5 10.0 碱胺二甲喘唉 20.0 94.1 50.0 97. 5.0 95.3 94." 10.0 碱胶甲氧哒嗓 20.0 92.2 50,0 92.9
GB/T22947?2008 B.1 ?/4g/kg ?/% 5.0 94.4 10.0 97.5 ?? 20.0 98.1 50.0 94.9 5.0 96.5 97.3 10.0 ?? 95.9 20.0 50.0 ll0.5 5.0 l05.8 10.0 109.1 ?? 97.9 20.0 50.0 112.6 5.0 86.5 10.0 93." ?? 20.0 91.6 50.0 96.9 5.0 92.1 10.0 88.9 ?? 0 93. 20.0 50.0 93.2 5.0 93,4 91.6 10.0 ? 20.0 94.8 50.0 102.5 5.0 91.0 90.5 10.o ?? 20.0 89.3 50.0 96.1 5.0 98.6 86.7 0.0 ?? 20.0 80.2 50.0 84.4 5.0 10.5 102.3 10.0 ? 87.4 20.0 50.0 82.6 5.0 86.4 83.4 10.0 ? 20.0 84.2 50.0 85.8 10