蜂产品中环己烷氨基磺酸钠的测定液相色谱-质谱/质谱法

蜂产品中环己烷氨基磺酸钠的测定液相色谱-质谱/质谱法

国家标准 GB/T23405一2009 蜂产品中环己炕氨基磺酸钠的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determinatonofsodiumeyelamateinhee produects一LC-MS/MSmethod 2009-03-28发布 2009-07-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T23405一2009 前 言 本标准的附录A和附录B为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口 本标准起草单位;江苏出人境检验检疫局 本标准主要起草人:林宏、赵增运、张婧、陈惠兰、沈崇钰、杨安南、李公海、蒋原、陶宏锦
GB/T23405一2009 蜂产品中环己炕氨基磺酸钠的测定 液相色谱-质谱/质谱法 范围 本标准规定了蜂产品中环已烧氨基磺酸钠的液相色谱-质谱/质谱的测定方法 本标准适用于蜂蜜和蜂王浆中环已炕氨基磺酸钠的测定 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008,ISO3696;1987,MOD) 方法提要 蜂蜜样品用盐酸溶解,蜂王浆样品用乙睛提取浓缩后用盐酸溶解,用弱阴离子交换柱净化.液相色 谱-串联质谱法测定,外标法定量 试剂和材料 除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水 乙睛 4.1 4.2甲醇;HPLC级 4.3氨水:含量25%一28% 4.4盐酸;含量36%一38% 4.55%氨水-甲醇溶液(5十95,体积比);量取25mL氨水(4.3)加人475mL甲醇(4.2)中,摇匀 4.6 mol/儿盐酸溶液;用量筒量取8.3ml盐酸(4.4)于1L容量瓶中,用水稀释至1L 环己婉氨基碱酸纳(sodiumeyelamate,CAs号139-05-9)标准物质:纯度大于或等于98% 环己婉氨基碱酸钠标准储备溶液:1.0mg/mL 准确称取适量的环己氮基碱酸钠标准品 储备液蛇存在4c冰箱中】年有效 4 ,用甲醇(4.2)配成1.0mg/ml的标准储备液 环己烧氨基磺酸钠标准工作溶液:用甲醇-水(3+7,体积比)将环己婉氨基磺酸钠标准储备溶液 4.8)稀释配成浓度为200ng/ml,l00ng/ml,50ng/ml,20ng/ml,l0ng/ml,5ng/ml的标准工作 溶液,用于绘制标准工作曲线 弱阴离子交换柱:60mg,3ml小柱,或同等者 仪器和设备 液相色谱-质谱/质谱仪(串联四极杆):配有电喷雾离子源 5.2分析天平;感量分别为0.01g和0.1lg 5.3氮吹仪 5.4涡旋混匀器 5.5高速离心机
GB/T23405一2009 5.6有机相、水相过滤膜,0.45Am. 5.7移液器，5ml..20o 0l 5.8离心管:50ml,具塞 5.9 固相萃取装置 试样的制备与保存 试样的制备 将蜂蜜样品或自然解冻至室温的蜂王浆样品搅拌均匀,分出0.5kg作为试样 制备好的试样置于 样品瓶中,密封,并做上标记 在制样的操作过程中,应防止样品污染或发生残留物含量的变化 6.2试样的保存 蜂蜜样品于室温状态下保存,蜂王浆样品保存于-18C冰柜中 测定步骤 提取和净化 提取 蜂蜜 称取5g蜂蜜(精确至0.01g),置于50ml具塞离心管中,加人15ml.0.1nmol/I的盐酸溶液 (4.6),于涡旋混匀器上快速混合1nmin,过滤 7.1.1.2蜂王浆 称取2g蜂王浆(精确至0.01g),置于50ml具塞离心管中,加人10ml乙睛(4.1)于涡旋混匀器 上快速混合1min,离心,取上清液浓缩至近干,加人3mL0.1mol/L.的盐酸溶液(4.6) 7.1.2净化 弱阴离子固相萃取小柱(4.10)用3mL甲醇、3mL水活化将样品溶液以1mL/min左右的流速过 柱,用3ml.水和3ml甲醇洗柱,抽干后用3nml.5%氨水-甲醇溶液(4.5)洗脱,收集洗脱液,于45C下 用氮气吹干,用1.0mL甲醇-水(3十7,体积比)定容,过0.45um的滤膜到进样瓶中,供液相色谐-质谱 质谱仪测定 7.2测定 7.2.1液相色谱条件 a)色谱柱:C色谱柱150mmX2.0mm内径),粒径5Am或相当者; 流动相:0.02mol/L乙酸铵水溶液(流动相A)，甲醇(流动相B),流速0.25mL/min,梯度洗 D) 脱程序参见附录A: e柱温;室温 d 进样量;25L 7.2.2串联质谱条件 a)离子源:电喷雾离子化电离源(ESI),负离子监测; D) 扫描方式;选择离子监测(SRM); 雾化气、鞘气为高纯氨气,碰撞气为高纯氨气 d)喷雾电压,碰撞电压等电压值均优化至最佳灵敏度; 选择离子对,母离子178,碎片离子178/80.2,178/95,定量离子178/80.2 7.2.3液相色谱-质谱/质谱测定 定性测定 进行样品测定时,如果检出的质量色谱峰保留时间与标准样品一致,并且在扣除背景后的样品谱图
GB/T23405一2009 中,各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比,最大允许相对偏差不超 过表1中规定的范围,则可判断样品中存在对应的被测物 表1定性确证时相对离子丰度的最大允许相对偏差 相对离子丰度/% 50 >2050 >10一20 10 允许的相对偏差/% 士20 士25 士30 士50 7.2.3.2定量分析 标准工作溶液(4.9)在液相色谱串联质谱设定条件下分别进样,以标准面积为纵坐标,工作溶液浓 度(4g/kg)为横坐标,绘制6点标准工作曲线,用标准工作曲线对样品进行外标法定量,样品溶液中标 准的响应值均应在仪器测定的线性范围内 在上述色谱条件下,标准物质的总离子和选择离子色谱图 及质谱/质谱图参见图B.1、图B.2 7.3空白试验 除不称取样品外,均按上述(7.17.2)步骤进行 结果计算 结果按式(1)计算 AXex X= A，文mo0 式中: 试样中环己婉氨基磺酸钠含量,单位为毫克每千克(mg/kg); 样液中环已婉氨基碱酸钠的峰面积; 标准工作溶液中环己炕氨基磺酸钠的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL); -样液最终定容体积,单位为毫升(mL) -标准工作溶液中环己婉氨基磺酸钠的峰面积 称取的试样量,单位为克(g. 注:计算结果需扣除空白值 测定低限和回收率范围 本标准环己婉氨基碱酸钠测定低限为0.010mg/kg 蜂蜜中环己婉氨基碱酸钠添加浓度及回收率范围的试验数据 添加水平为0.010mg/lkg时,回收率范围为74.1%87.0% 添加水平为0.025mg/kg时,回收率范围为78.2%94.2% 添加水平为0.050mg/kg时,回收率范围为80.7%一89.8% 添加水平为0.100mg/kg时,回收率范围为81.6%87.4% 蜂王浆中环已烧氨基碱酸钠添加浓度及回收率范围的试验数据 添加水平为0.010mg/kg时,回收率范围为73.1%85.5% 添加水平为0.025mg/kg时,回收率范围为72.0%一92.4%; 添加水平为0.050mg/kg时,回收率范围为80.0%88.1% 添加水平为0.100mg/kg时,回收率范围为79.7%一87.2%
GB/T23405一2009 附 录A 资料性附录 梯度洗脱程序表 表1梯度洗脱程序表 流动相比例/% 梯度时间 /min 流动相A 流动相B 90 1o l0 4.0 90 90 6.0 10 6.1 10 90 90 10 8.0
GB/T23405一2009 B 附 录 资料性附录 标准品色谱图及二级质谱碎片图 保留时间4.52 1003 NL:4.99E3 m TIc 0 0 a 0 保留时间4.52 NL.4.98E3 w0" m/z-79.73-80.73 " 0 o 0 40 s0 n 10 0 图B.1环己婉氨基磺酸钠标准溶液选择反应监测(SRM)色谱图
GB/T23405?2009 10 80.2 ?? 95 90 85 80 75 70 65 55 50 45 35 30 25 20 15 10 95.0 T TTTTm" 80.22680.22880.23080.23280.234 95.02095.02295.02495.02695.028 m/2 m/z ?B.2????