牛奶和奶粉中杆菌肽残留量的测定液相色谱-串联质谱法

牛奶和奶粉中杆菌肽残留量的测定液相色谱-串联质谱法

国家标准 GB/T22981一2008 牛奶和奶粉中杆菌肽残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Deteminatonofbaeitracinrestduesimikandmlkpowder LC-MS-MSmethod 2008-12-31发布 2009-05-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T22981一2008 前 言 本标准的附录A,附录B为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口 本标准起草单位;秦皇岛出人境检验检疫局、河北出人境检验检 疫局 本标准主要起草人:段文仲,马育松、郭春海、王凤池、葛娜、艾连峰、窦彩云、吕红英庞国芳
GB/T22981一2008 牛奶和奶粉中杆菌肽残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了牛奶和奶粉中杆菌肽残留量的液相色谱-串联质谱测定方法 本标准适用于牛奶和奶粉中杆菌肽残留量的测定和确证 本标准的方法检出限;牛奶50.04g/kg;奶粉2504g/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度正确度与精密度第1部分:总则与定义 (GB/T6379.12004，ISsO5725-1:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度第2部分;确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法(GB/T6379.2一2004,IS05725-2;1994,IDT) GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T66822008,IsG3696;1987,MOD) 原理 试样中的杆菌肽残留用乙睛-甲醇提取试样中的杆菌肽残留,液相色谱-串联质谐仪测定,外标法 定量 试剂和材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水 甲醇;色谱纯 乙睛,色谱纯 4.2 甲酸;色谱纯 4.3 乙睛-甲醇(2十1)量取200mL乙睛(4.2)与100mL甲醉(4.1)混合 4.5 0.1%甲酸溶液;移取IL甲酸(4.3)于装有约80mL水的1L容量瓶中,用水定容至刻度并混匀 0.1%甲酸甲醉游液;移取】ml甲酸于装有约800mL甲醇的1L容量瓶中,用甲醉定容至刻度 4.6 并混匀 杆菌肽标准物质杆菌肽A(CAs:1505-87-4)纯度大于等于92.0%,以下杆菌肽标准均以杆菌肽 A计 杆菌肽标准储备溶液:准确称取适量的杆菌肽A(4.7)于50ml容量瓶中,用0.1%甲酸甲醇溶液 配制成浓度为0.1mg/ml的标准储备溶液 该溶液在4C保存 杆菌肽标准工作溶液;移取杆菌肽标准储备溶液(4.8)1.0ml于10ml容量瓶中,用0.1%甲酸 甲醇溶液定容,配制成浓度为10.0g/ml的标准工作溶液 该溶液在4C保存 4.10杆菌肽基质标准工作溶液;根据需要吸取适量的杆菌肽标准工作溶液(4.9),用空白样品提取液 稀释成适当浓度的基质标准工作溶液,临用前配制
GB/T22981一2008 仪器和设备 5.1液相色谱-串联质谱仪,配有电喷雾离子源 5.2分析天平;感量0.1mg和0.01g 5.3涡旋振荡器 5. 离心机:转速不低于5000r/min 4 5.5具塞离心管;50ml,带刻度 试样的制备与保存 6.1牛奶 取均匀样品约250g装人洁净容器作为试样,密封置4C下保存,并标明标记 奶粉 取均匀样品约250g装人沽净容器作为试样,密封,并标明标记 测定步骤 7 牛奶样品 称取5g试样(精确到0.01g)置于50mL离心管中,加人10mL乙睛-甲醇(2+1)(4.4),涡旋提取 1min,以5000r/min离心10min,移取上清液于50ml刻度离心管中,以0.1%甲酸溶液(4.5)定容至 15ml,摇匀,用0.22Am滤膜过滤后,供液相色谱-串联质谱仪测定 7.2奶粉样品 称取1试样(精确到0.01g)置于50ml离心管中,加人5nml水,涡旋混匀后,加人10ml乙腊 甲醇(2十1)(4.4),以下操作同牛奶样品 7.3测定条件 7.3.1液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下 色谱柱:苯基柱,5.0m n,l50mm×2.1mm(内径)或相当者 a) D 液相色谱梯度洗脱条件见表1; c)柱温;40C d)进样量;20L 表1液相色谱梯度洗脱条件 时间/min 流速/(L/min 水(含0.1%甲酸/% 乙睛/% 0,00 200 85.0 15.0 5.00 200 60.0 40.0 6.00 200 60,0 40.0 8,00 200 20.0 80.0 8.01 15.o 200 85.0 10.00 200 85.0 15.0 质谱参考条件 7.3.2 质谱谐参考条件如下 离子源:电喷雾离子源; a b)扫描方式:正离子扫描;
GB/T22981一2008 检测方式;多反应监测 d) 鞘气压力;2.07×10Pa; 辅助气压力:5.52×10'Pa; e f 正离子模式电喷雾电压(IS):4000V g 毛细管温度;320C; 源内诱导解离电压,10V. h Q1.,Q3分辨率1Q1为0.4.,Q3为0.7 i 碰撞气:高纯氯气; k)碰撞气压力;0.2Pa 其他质谱参数见表2 表2杆菌肽的参考保留时间、定性离子对、定量离子对和裂解能量 化合物名称 保留时间/min 定性离子对(m/:) 定量离子对(m/:) 裂解能量/eV 475.3/669.3 15 6.42 475.3/669.3 杆菌肚 475.3/869.4 7.3.3液相色谱-串联质谱测定 7.3.3.1定性测定 样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的混合基质标准校准溶液谱图中对应的定性离 子的相对丰度进行比较,偏差不超过表3规定的范围,则可判定为样品中存在对应的待测物 表3定性确证时相对离子丰度的最大允许误差 20GB/T22981一2008 附 录A 资料性附录 标准物质多反应监测(MRN)色谱图 杆菌肽标准物质多反应监测(MRM)色谱图,见图A.1 RT:0.00-10.00 RT:6.42 35000 475.3/669.3 30000 25000 20000 5000 10000 RT;6.19 5000- RT:6.42 RT:0.00-10.00 35000 30000 25000 20000 15000 RT:6.2 475.3/869.4 0000 5000 RT:6.19 RT;6,42 图A.1杆菌肽标准物质多反应监测(MRM)色谱图
GB/T22981一2008 附 录 B 资料性附录 回 收 率 本方法中杆菌肽添加浓度及回收率范围的试验数据.见表B.1 表B.1杆菌肽添加浓度及其回收率范围的试验数据 样品基质 加浓度/4g/kg 回收率范围/% 50 90.2100.0 100 93.8~101.0 牛奶 200 94.0103.0 500 94.4l00.2 250 88.0~101.2 500 93.0l00.2 奶粉 1000 93.8l02.0 2500 95.6~99,6