GB/T39995-2021
甾醇类物质的测定
Determinationofsterols
- 中国标准分类号（CCS）A40
- 国际标准分类号（ICS）07.080
- 实施日期2021-11-01
- 文件格式PDF
- 文本页数10页
- 文件大小801.09KB
以图片形式预览甾醇类物质的测定
甾醇类物质的测定
国家标准 GB/T39995一2021 笛醇类物质的测定 Determinationofsterols 2021-04-30发布 2021-11-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标涯花管理委员会国家标准
GB/39995一2021 前 言 本文件按照GB/T1.1一2020<标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草
请注意本文件的某些内容可能涉及专利
本文件的发布机构不承担识别专利的责任
本文件由全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC387)提出并归口
本文件起草单位;测试技术研究院生物研究所、计量大学、四川大学、惠州市食品药品检验 所、北京工商大学、浙江省检验检疫科学技术研究院、河北省食品检验研究院、北京萨姆博科技有限 公司
本文件主要起草人:冯德建、张雅芬、李延芳,吴微、叶子弘,黄秀丽、王晓琴、马爱进、李怀平将俞晓平、 黄超群,叶善蓉、周李华、崔海峰,许益鹏、申屠旭萍、李翼,陈丽,吴娟,贾英民,张岩,郝帅
GB/39995一2021 笛醇类物质的测定 范围 本文件规定了笛醇类物质的液相色谱-质谱/质谱测定方法
本文件适用于猪油、菜籽油、核桃、山楂、油麦菜、葛根、大米,小麦、黑青豆中游离态的胆笛婉醇、菜 籽笛醇、菜油笛醇、豆笛醇、户-谷笛醇、岩藻笛醇、羊毛笛醇、豆笛婉醇,麦角笛醇含量的测定
规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款
其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T15687动植物油脂试样的制备 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件
3.1 笛醇类物质sterols -类含环戊炕阱多氢菲碳架结构的化合物
原理 样品经无水乙醇回流提取,提取液过0.22m尼龙滤膜后供液相色谱-质谱/质谱仪测定,标准曲线 内标法定量
试剂或材料 除非另有说明,本方法使用的试剂均为分析纯
水为GB/T6682规定的一级水
5.1甲醇:色谱纯
5.2无水乙醇;色谱纯
5.3笛醇标准品:胆笛烧醉,菜籽笛醉,菜油笛醇,豆笛醉、8谷笛醉、岩藻笛醉,羊毛笛醉、豆笛婉醇,麦 角笛醇、6-酮胆笛皖醇,化合物信息参见附录A中表A.1,纯度均>93%
5.4内标储备液;准确称取适量6-酮胆笛婉醇标准品(精确至0.01mg),用无水乙醉溶解并配制成质量 浓度为500mg/L的内标储备溶液,于0C4下避光保存备用,有效期为1个月
5.5内标工作溶液:准确移取内标储备液2.0ml于1000ml.容量瓶中,加无水乙醇稀释并定容至刻 度,混匀,配制成质量浓度为1.0g/ml内标工作溶液,现配现用
5.6笛醉醇单一标准储备液;分别准确称取适量的笛醇标准品精确至0.01mg),用无水乙醇溶解并配制
GB/T39995一202 成质量浓度均为500mg/L的笛醇单一标准储备溶液,于0C4C下避光保存备用,有效期为1个月
5.7笛醉混合标准溶液;分别准确移取各笛醇单一标准储备液2.0ml于50ml具塞离心管中,于 40下氨气吹干,准确加人10mL内标工作溶液复溶,混匀,配制成质量浓度均为100mg/L的笛醇 混合标准溶液,现配现用
5.8笛醇混合标准工作溶液:准确移取适量笛醇混合标准溶液,用内标工作溶液稀释配制成质量浓度 /L、5mg/L2.5 分别为20mg/L、10 /I、l.0g/L,0.5mg/L,0.25mg/1的系列笛醉混合标准 mg/ mg/ 工作溶液,现配现用 5.90.22丛m尼龙滤膜
仪器设备 6 6.1液相色谱-质谱/质谱仪(LC-MS/Ms):配大气压化学离子源(APCcI. 6.2分析天平;感量为0.0001g,0.01只和0.01nmg 6.3涡旋混匀器
6.4回流冷凝装置
6.5氮吹仪
6.6粉碎机 6.7匀浆机
6.8离心机
样品 7.1猪油、菜籽油 按GB/T15687的规定进行制备
7.2核桃山楂、大米、小麦、油麦菜、葛根、黑青豆 取核桃、山楂、大米、小麦、黑青豆等有代表性干制样品约1kg,用粉碎机粉碎,混匀,制备好的试样 均分成两份,装人洁净的盛样容器内,密封并标识,于0C一4C下避光保存,尽快测定
取油麦菜、葛根等有代表性新鲜样品约1kg,用匀浆机制成匀浆,制备好的试样均分成两份,装人 洁净的盛样容器内,密封并标识,现制现用 试验步骤 8.1试样处理 8.1.1猪油,菜籽油 称取试样0.4g(精确至0.001g)于250m圆底烧瓶中,加人70mL内标工作溶液(5.5),称重,充 分混匀后放人回流冷凝器中,加热并保持提取液微沸,30min后停止加热并冷却至室温,用无水乙醇 5.2补足失重,混匀,吸取5ml提取液于8000r/min下离心5min,取2m上清液过0.22m尼龙 滤膜,待测
8.1.2核桃,山楂,大米、小麦,油麦菜、葛根,黑青豆 称取试样1.0g(精确至0.001g)于250ml圆底烧瓶中,加人70mL内标工作溶液(5.5),称重,充
GB/39995一2021 分混匀后放人回流冷凝器中,加热并保持提取液微沸,30min后停止加热并冷却至室温,用无水乙醇 5.2补足失重,混匀,吸取5ml提取液于8000r/min下离心5min 1,取2mlL上清液过0.22Hm尼龙 滤膜,待测 8.2测定 8.2.1液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下所示 n×150t 色谱柱:C柱,l.8Mm,3.0 mm,或同等性能的色谱柱 a m b 流动相:流动相A为水,流动相B为甲醇,梯度洗脱程序见表1 流速;0.5mL/min; c d 柱温;30; 进样量:5"L 表1流动相梯度洗脱程序 时间 流动相A体积分数/" 乌 流动相B体积分数/% /min 20 80 15 100 30 00 30.1 20 80 40 20 80 注:不同型号仪器可做适当调整
8.2.2质谱参考条件 质谱参考条件如下所示 a)离子源;大气压化学离子源(APCI). b) 扫描方式;正离子模式; 检测方式;多反应监测(MRM); c d)干燥气、雾化气、碰撞气均为高纯氮气;使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要 求,参考条件参见附录B; 喷雾电压、源内碎裂电压、碰撞气能量等参数应优化至最佳灵敏度,参考条件参见附录B
e 注:不同型号仪器可做适当调整
8.2.3定性测定 在相同试验条件(见8.2.1,8.2.2)下进行样品测定时,如果样品中待测物质的保留时间与标准工作 溶液中对应的保留时间一致(变化范围在土2.5%以内),且样品谱图中被测组分监测离子的相对丰度和 标准品的相对丰度一致,允许偏差不超过表2规定的范围,则可判断样品中存在对应的被测物
表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/% >50 >2050 >l020 10 允许的相对偏差/% 士20 士25 士30 士50
GB/T39995一202 8.2.4定量测定 在相同试验条件(8.2.1、8.2.2),将笛醇系列混合标准工作溶液由低到高浓度依次进样分析,以被测 物和内标物的定量离子峰面积之比为纵坐标,以被测物浓度为横坐标,绘制内标标准工作曲线,用内标 标准工作曲线对样品进行定量,应使样品溶液中各被测物的响应值在仪器测定的线性范围内,如果含量 超过标准工作曲线范围,应稀释到合适浓度后再进样分析
在上述条件下,各笛醇类物质的参考保留时 间参见附录B中表B.1,多反应监测图参见附录C
8.3平行试验 按8.1和8.2的规定对同一试样进行两次平行测定 试验数据处理 样品中待测物含量的计算见式(1): p×V X- 7m 式中 试样中被测组分含量,单位为毫克每千克(mg/ke); X 从内标标准工作曲线上得到的被测组分溶液质量浓度,单位为微克每毫升(ug/mL) 试样溶液定容体积,单位为毫升(mL) 试样的质量,单位为克(g)
mm 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留两位小数
10 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%
其他 1 本方法测定9种笛醇的定量限参见表A.1
GB/39995一2021 附 录 A 资料性) 笛醇化合物信息及定量限 笛醇化合物信息及定量限见表A.1
表A.1笛醇化合物信息及定量限 定量限/mg/kg 相对分子 中文名称 CAS号 序号 英文名称 分子式 猪油、核桃.山楂、葛根,油麦菜 质量 菜籽油 大米、小麦、黑青豆 57-87-4 麦角醉 0.70 Ergosterol CH0 396.7 3.50 474-67-9 398.7 3.50 0.70 菜籽笛醉 Brassicasterol aH.O 岩藻笛醇 Fucosterol 17605-67-3 CHO 412.7 3.50 0.70 CHO 0,70 羊毛笛醇 79-63-0 426.7 3.50 Lanosterol 胆笛炕醉 8Cholestanol 80-97-7 CHO 388.7" 3.50 0.70 豆笛醇 Stijgmasterol 83-48-7 CHO 412.7 140.00 28.00 菜油笛醉 Campesterol 474-62-4 CHO 400.7 3,50 0.70 吕谷笛醇 8-Sitosterol 83-46-5 414.7 3.50 0.70 C2HO 19466-47-8 16,7 35.00 7.00 H 豆笛烧醉 C Stigmastanol 10 175-06-0 402.7 6-围胆笛婉醇6-Ketoceholestanol C27H6(O
GB/T39995一2021 录 附 B 资料性 液相色谱-质谱/质谱参数参考条件 参考质谱条件如下 离子源;大气压化学离子源(APCI); a b) 扫描方式;正离子模式; 检测方式;多反应监测(MRM); c 干燥气、雾化气、碰撞气均为高纯氮气 d 雾化气压力:0.14MPa(20psi); 离子喷雾电压;3000V; 电晕针电流:44A:; 日 干燥气温度:350C; h 雾化器温度:350C; 干燥气流速;5.0L/min; kk 定量离子对、定性离子对、碰撞气能量和源内碎裂电压见表B.1
表B.110种笛醇的保留时间、监测离子对、碰撞气能量和源内碎裂电压 保留时间/nmin定量离子对m/E 定性离子对m/ 序号 中文名称 碰撞气能量/V源内碎裂电压/V 麦角肖醉 16.64 25;10 125 379,4/69,0 379,4/69,0;379,4/125,0 7.39 菜籽笛醉 81.4/69.o 381.4/147.0;381.4/69.0 25;35 115 17.87 395.5/81.o 395.5/81.0;395.5/147.0 40;30 95 岩藻笛醉 羊毛笛醇 8.15 409.4/109,0 409,4/109.0;409.4/149.0 30;25 20 胆笛烧醇 8.20 371.4/81.1 371.4/81.l;371.4/109.0 40;25 110 豆笛醇 8.32 4ll.3/109.0 4l1.3/109.0;4l1.3/139.0 25;lo 100 菜油留醉 8.36 383,4/161.l 383.4/161.l;383.4/95.1 20;40 30 谷笛醉 100 19,16 397.5/161.0 397,5/161.0;397.5/135.l 25;25 19.98 399.5/81.1 105 399.5/81.1;399.5/190 豆笛烧醉 40;20 3.13 385.3/367.4 385.3/367.4;385.3/159.2 10;25 160 10 6-阴胆笛烧醉 注:所列参数是在Agilent6 6460质谱仪上完成的,列出试验用仪器型号仅供参考,标准使用者可采用不同厂家或型 号的仪器
GB/39995?2021 ? C ) 10??Lc-MIs/NS??? 0??IC-MS/MS????C.1??c.10 +MRM(385.3>367.)std6.d +MRM(379.4->69.)sSTD-er +MRM(381,4->69.0)brassie x10 3.13min xI0 16.64min x10 17.39min 0.8 0.8 0.8 0.6 0.6 0.6 0.4 0.4 0.4 0.2 0.2 0.2 13 6.5 17 17.5 l/min lmin min ?C.16-??MRM? ?C.2??MIRM? ?C.3??MRM? +MRM(395.5>81.0)sTD-ftu +MRM(409.4->109.)sD-1 +MRM(371.4>81.)sTD-eh 17.87min 18.15min 18.20minm xI0 xI0 XI0 .5 1.25 0.75 0.5 0.5 0.25 17.5 18 18 18 lmin lmin min ?C.4?MRM? ?C.5??NMRM? ?c.6?MRM? +MRM(4ll.3->109.O)STD-s +MRM(383.4->161.1STD-e +MRM(397.5-161.0)STD-b 18.32min 18.36min 19.16min xI0 xI0 xI0 0.8 0.6 2 0.5 0.2 18 18.5 19 19 /min H/min lmin ?C.7?MRM? ?C.8??RM? ?C.9-??NMIRM?
GB/T39995?2021 +MRM(399.5->81.DSTD-sti x0 19.98min 19.5 20 /min ?c.10?MIRM?
甾醇类物质的测定GB/T39995-2021
甾醇类化合物是一类含有四环结构的化合物，具有多种生物活性。因此，对于甾醇类物质的测定方法具有重要意义。GB/T39995-2021作为最新的标准，提供了测定甾醇类物质的方法和技术规范。 该标准适用于食品、保健品、化妆品等行业中甾醇类物质的测定。其中主要涉及到试样的制备、仪器设备、测定方法和结果的计算等方面。测定方法包括高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法等。 在具体实验过程中，首先需要将样品进行处理，以获得可靠的分析数据。对于不同的样品类型，可以采用不同的处理方法。比如，在食品中测定甾醇类物质时，可以使用溶剂抽提的方法进行处理。而在保健品中测定甾醇类物质时，则需要采用其他方法进行处理。 在测定甾醇类物质的过程中，还需要使用一些仪器设备，如高效液相色谱仪、气相色谱仪、质谱仪等。这些仪器设备可以有效提高测定的准确性和可靠性。 总之，GB/T39995-2021为甾醇类物质的测定提供了标准化的方法和技术规范，对于保障相关行业产品的质量具有重要意义。
