畜禽肉中九种青霉素类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法

畜禽肉中九种青霉素类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法

国家标准 GB/T20755一2006 畜禽肉中九种青霉素类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Methodtorthedeterminationofnimepenieins residuesin ivestorkandpoultrymuscles- LC-MS-MSmethod 2007-03-01实施 2006-12-31发布 国家质量监督检验检疫总局 发布 中 国国家标准化管委员会国家标准
GB/T20755一2006 前 言 本标准的附录A和附录B为资料性附录 本标准由秦皇岛出人境检验检疫局提出 本标准由国家质量监督检验检疫总局归口 本标准起草单位:秦皇岛出人境检验检疫局 本标准主要起草人;庞国芳,李学民、张进杰、曹彦忠、刘晓茂,范春林,刘永明,赵为 本标准系首次发布的国家标准
GB/T20755一2006 畜禽肉中九种青霉素类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了牛、羊、猪和鸡肉中九种青霉素类药物残留量的液相色谱-串联质谱测定方法 本标准适用于牛、羊,猪和鸡肉中九种青霉素类药物残留量的测定 本标准的方法检出限;禁夫西林为0.254g/kg,青霉素G为0.54g/kg,崛拉西林,青霉素V,苯陛 西林为1.0ug/kg,阿莫西林、,氨节西林、氯陛西林,双氯西林为2.0g/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度正确度与精密度第1部分;总则与定义 (GB/T6379.1一2004,IsO5725-1:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分;确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法(GB/T6379.2一2004,IsO5725-21994,IDT) GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一1992,neqIso3696;1987) 原理 试样中青霉素类药物残留,用0.15mol/几磷酸二氢钠(pH=8.5)缓冲溶液提取,经离心,上清液用 固相萃取柱净化,液相色谱-串联质谐仪测定,外标法定量 试剂和材料 除另有说明外,所用试剂均为优级纯,水为GB/T6682规定的一级水 4.1甲醇;色谱纯 4.2乙睛色谱纯 4.3磷酸二氢纳(NalHPO)). 4.4氢氧化钠 4.5乙酸 4.6乙睛十水(1+1):量取50mL乙睛(4.2)与50mL.水混合 4.7氢氧化钠溶液:5mol/L 称取20g氢氧化钠(4.4),用水溶解,定容至100mL 4.8磷酸二氢钠缓冲溶液0.15molL 称取18.0《磷酸二氢销(4.3),用水溶解,定容至1000mL. 然后用氢氧化钠溶液(4.7)调节至pH=8.5 4.9阿莫西林,氨节西林,哌拉西林、青霉素G青霉素V,苯陛西林,氯幽西林、萦夫西林,双氯西林九 种青霉素标准物质;纯度>99% 4.10九种青霉素标准储备溶液:准确称取适量的每种标准物质(4.9),分别用水配制成浓度为 1.0 mg/mL的标准储备溶液 储备液贮存在一18C冰柜中 4.11九种青霉素标准工作溶液:根据需要吸取适量的每种青霉素标准储备溶液(4.10),用空白样品提
GB/T20755一2006 取液稀释成适当浓度的基质混合标准工作溶液 4.12BUNDELUTC固相萃取柱或相当者500mg,6mL 使用前分别用5mL甲醇(4.1),5ml 水和l0mL磷酸二氢钠缓冲溶液(4.8)预处理,保持柱体湿润 4.130.2pm滤膜 仪器 5.1液相色谐-串联四极杆质谱仪,配有电喷雾离子源 5.2分析天平;感量0.1mg和0.01 g 5.3振荡器 5 固相萃取真空装置 .4 5.5贮液器;50mL . 微量注射器;5L.o山. 5.7刻度样品管;5 tmL,精度为0.1mL 5.8离心机带有50mL具塞离心管 pH计;测量精度0.02pH单位 5.9 测定步骤 6.1试样溶液的制备 称取3g试样(精确到0.01g)置于离心机(6.8)中,加人25mL磷酸二氢纳缓冲亲液(4.8),于振荡 器上振荡10min,然后,以4000r/min离心10min,把上层提取液移至下接UNDELUTC,固相萃取 柱(4.12)的贮液器中,以3mL/nmin的流速通过固相萃取柱后,用2ml水洗柱,弃去全部流出液 用 3mL乙情十水(4.6)洗脱,收集洗脱液于刻度样品管(5.7)中,用乙晴十水定容至3ml,摇匀后,过 Am迪脚(13),供液相色谱-串联质请仪渊定 按照上述操作步骤制备空白样品提取液 0.2 测定 6.2.1液相色谱条件 ,150mm×2.1nmm(内径)或相当者; 色谱柱SumFireCw.3.5wm a b)流动相梯度程序及流速见表1; 柱温:30C; C 进样量;20 d 表1流动相梯度程序及流速 水(含0.3%乙酸 乙晴(含0.3%乙酸)/ 时间/ 流速/ % % min Al/min 0,00 200 95.0 5.0 3.00 200 95,0 5.0 3,01 200 50.0 50.o l3.00 200 50,0 50.0 200 75.0 13.01 25.0 18.00 200 25.0 75.o 18.01 200 95.0 5,0 5.0 25.00 200 95.0
GB/T20755一2006 6.2.2质谱条件 离子源电喷雾离子源， a b)扫描方式:正离子扫描; 检测方式:多反应监测; c 电喷雾电压5500V d 雾化气压力:0.055MPa; e 气帘气压力;0.079MPa; 辅助气流速:6L/min; g h 离子源温度:400C; 定性离子对、定量离子对和去簇电压(DP),聚焦电压(FP),碰撞气能量(CE)及碰撞室出口电 压(CXP)见表2 表2九种青霉素的定性离子对、定量离子对,去簇电压、聚焦电压,碰撞气能量和碰撞室出口电压 定性 定量 碰撞气 去簇 聚焦 碰撞室 称 离子对 离子对 能量 电压/ 电压/" 出口电压/ m/) m/e 阿莫西林 366/114 30 21 366/208 90 10 19 amnoxicilin 366/208 氨节西林 350/192 23 350/16o 20 90 10 ampieillin 350/160 20 眼嗦西林 s18/" 27 160 35 518/143 90 10 5 25 piperacillin 518/143 青霉素G 335/160 23 1( 335/160 90 penieillinG 335/176 青霉素V 351/160 20 40 90 351/160 10 s penieilin” 351/192 苯陛西林 02/160 20 402/16o 23 90 l0 20 oxaeillin 402/243 氯陛西林 436/160 436/16o 20 90 1G 2 coxaeilin 436/277 禁夫西林 15/199 23 415/199 23 90 10 52 nafcillin 415/171 双氯西林 470/160 20 470/160 20 90 10 dicloxaeillinm 470/31 22 6.2.3液相色谱-串联质谱测定 6.2.3.1定性测定 选择每种待测物质的一个母离子,二个以上子离子,在相同试验条件下,样品中待测物质的保留时 间与基质标准溶液中对应物质的保留时间偏差在士2.5%之内;样品色谱图中各定性离子相对丰度与浓 度接近的基质标准溶液的色谱图中离子相对丰度相比,若偏差不超过表3规定的范围,则可判定为样品 中存在对应的待测物
GB/T20755一2006 表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 >50 >2050 >l0~20 10 允许的最大偏差 士20 士25 士30 土50 6.2.3.2定量测定 用九种青霉素标准储备溶液配成的基质混合标准溶液(4.11)分别进样,以标准工作溶液浓度为横 坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准工作曲线 用标准工作曲线对样品进行定量,样品溶液中九种青霉 素的响应值均应在仪器测定的线性范围内 在上述色谱条件下,九种青霉素标准物质的总离子流图参 见图A.1 九种青霉素的保留时间见表4 表4九种青霉素的参考保留时间 青霉素名称 保留时间/min 阿莫西林 2.50 氨芒西林 9.82 睬拉西林 1l.79 青霉素G 12.7 青霉素v 13,48 14.18 苯陛西林 氯哗西林 15.22 夫西林 15.45 双氯西林 17.30 本方法的添加回收率数据参见表B.1 6.3平行试验 按上述步骤,对同一试样进行平行试验测定 6. 空白试验 除不称取试样外,均按上述分析步骤进行 结果计算 试样中青霉素残留量利用数据处理系统计算或按式(1)计算 l000 c×Y义 X= 100o 式中 试样中被测组分残留量,单位为微克每千克(4g/kg); -从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL); 试样溶液定容体积,单位为毫升(mL); m -最终试样溶液所代表的试样质量,单位为克(g) 注计算结果需将空白值扣除 精密度 本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2规定确定的,其重复性和再现性的值 以95%的可信度来计算 8.1重复性 在重复性试验条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r,试样中九种青霉素
GB/T20755一2006 含量范围及重复性方程见表5 表5九种青霉素含量范围及重复性和再现性方程 青霉素名称 含量范围/(g/kg 重复性限r" 再现性限R 阿莫西林 2.020 lgr=0.9248lgm-1.3073 lgR=0.9881lgm一0.9461 氨节西林 2.0~20 lgr=0.9511lgm-1.3831 lgR=0.9857lgm-0.9464 噪拉西林 =0.0182m+0.0362 eR- =0,9930lgm一0,9616 1l0 青霉素G 0.55 lgp=0.3252lgm-1.3260 lgR=0.9683lgm-0,9527 青霉素V 1~1o lgr=1.4963lgm一1.7513 lgR=1.0201lgm-0.975 苯陛西林 1~10 -0.8719lgm-1.4323 lgR=0.9921lgm-0.9616 lgr 氯陛西林 220 lgr=0.8313lgm一l.3317 lgR=0.9973lgm-0.9582 禁夫西林 0,252.5 lgr=0.998olgm一1.4927 R=0.108lm十0.0004 双氨西林 lgr=1.2800lgm一l.6791 lgR=1.0343lgm一0.9823 注，"为两次测定结果的算术平均值 如果两次测定值的差值超过重复性限r,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定 再现性 在再现性试验条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R,试样中九种青霉素 含量范围及重复性方程见表5
GB/T20755一2006 附 录 A 资料性附录 九种青霉素标准物质的总离子流图 九种青霉素标准物质的总离子流图,见图A.1 3.9e5 3.0e5 串 =" 照 2.0e5 s 1.0e5 0.0 /mim" 15 -阿莫西林,2.50min; 氨节西林,9.82min; -噪拉西林,11.79min: 青霉素G,12.71min -青霉素V,13.48min; 苯幽西林,l4. 18min 氯陛西林,l5.22min 綦夫西林,1l5.45 min; -双氯西林,17.30min 图A.1九种青霉素标准物质的总离子流图
GB/T20755一2006 附录 B 资料性附录 收率 九种青霉素添加浓度及其平均回收率的试验数据,见表B.1 表B.1九种青霉素添加浓度及其平均回收率的试验数据 青霉素名称 添加浓度/ug/kg 回收率/% 2.0 73.l 4.0 75.6 阿莫西林 8.0 73.6 20.o 78.6 2.0 82.6 85.7 4.0 氨节西林 8.o 89." 20.o 97.2 1.o 81.7 2.o 90,9 噪拉西林 4.0 98.2 10.0 95." 0.5 85.9 92.5 1.0 青霉素G 2.0 103.4 5.0 89.8 86 " " 89.6 青霉素V 4.o 96.5 10.0 93.4 0.25 82.5 0.5 105.6 紫夫西林 1.0 95.9 2.s 94.3 90.7 1.0 2.0 97.3 苯陛西林 4.0 85.6 0.o 90.5 89.2 2.0 84.7 4.0 氯幽西林 8.0 97.2 20.o 87.6 2.0 87.3 91.7 4.0 双氯西林 8.0 82.4 20.o 97.l