蜂蜜中甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑残留量的测定液相色谱-串联质谱法

蜂蜜中甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑残留量的测定液相色谱-串联质谱法

国家标准 GB/T20744一2006 蜂蜜中甲硝哗、洛硝哒陛、二甲硝咪哗 残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Methodforthedeterminationofmetronmidazole,ronidazoleand dimmetridazoleresiduesinhoney LC-MS-MSmethod 2007-03-01实施 2006-12-31发布 国家质量监督检验检疫总局 发布 中 国国家标准化管委员会国家标准
GB/T20744一2006 前 言 本标准的附录A和附录B为资料性附录 本标准由秦皇岛出人境检验检疫局提出 本标准由国家质量监督检验检疫总局归口 本标准起草单位:秦皇岛出人境检验检疫局、山东农业大学 本标准主要起草人:庞国芳、刘永明、曹彦忠、范春林、张进杰,李学民、吴艳萍、李金,连玉晶、林忠 本标准系首次发布的国家标准
GB/T20744一2006 蜂蜜中甲硝陛、洛硝哒陛,二甲硝咪陛 残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了蜂蜜中甲硝陛、洛硝哒陛、二甲硝眯陛残留量的液相色谱-串联质谱测定方法 本标准适用于蜂蜜中甲硝幽,洛硝哒幽、二甲硝咪幽残留量的测定 本标准的方法检出限甲硝陛检出限为0.1ug/kg;洛硝哒陛和二甲硝咪陛检出限均为0.24g/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度正确度与精密度第1部分:总则与定义 (GB/T6379.1一2004,IsO5725-l:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度第2部分;确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法(GB/T6379.2一2004,ISO5725-2;1994,IT GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一1992,neqIsO3696;1987) 原理 蜂蜜中三种硝基咪陛类药物残留用乙酸乙酯提取,提取液浓缩后,经过固相萃取柱净化,液相色谱 串联质谱仪测定,外标法定量 试剂和材料 水为GB/T6682规定的一级水 甲醉;色谱纯 4.2乙睛.色谱纯 4.3乙酸乙酯;色谱纯 甲酸优级纯 4.5无水硫酸钠;分析纯 在650C马弗炉中灼烧6h,贮存于干燥器中 4.6洗脱剂甲醉+乙情+0.1%甲酸水(40十18十42) 甲硝陛、洛硝哒陛、二甲硝咪陛标准物质;纯度>98% 4.8甲硝陛、洛硝哒陛、二甲硝咪哗标准储备溶液1.0mg/mL 准确称取适量的甲硝幽,洛硝哒陛 二甲硝咪陛标准物质,分别用甲醇配成标准储备液 储备液在低于4C时可保存两个月 4.9甲硝哗,洛硝哒陛、二甲硝咪幽混合标准工作溶液A和B;根据需要吸取适量甲硝幽,洛硝哒陛 二甲硝咪陛标准储备溶液,用甲醉稀释成甲硝陛为1.04g/ml,洛硝哒幽和二甲硝咪陛均为2.0g/ml 的混合标准工作溶液A 再吸取适量混合标准工作溶液A用甲醇稀释成甲硝哗为0.0104g/ml,洛硝 哒陛和二甲硝咪陛均为0.0204g/mL的混合标准工作溶液B 混合标准工作溶液A和B应现用现配 4.10甲硝陛、洛硝哒陛、二甲硝咪陛混合基质标准工作溶液:根据需要吸取适量甲硝陛洛硝哒陛、二
GB/T20744一2006 甲硝咪哗混合标准工作溶液A和B,用空白样品提取液稀释成浓度分别为0.25ng/mL,0.50ng/ml 1.00ng/mL.5.00ng/mL的混合基质标准工作游液 混合基质标准工作溶液应现用现配 4.11BAKERBONDCarboxylicAcid固相萃取柱或相当者:500mg,3ml 使用前用4ml.乙酸乙醋 预处理,保持柱体湿润 4.12滤膜:0.20Am 仪器 5.1液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾离子源 5.2分析天平;感量0.1mg和0.01 g 5.3液体混匀器 固相萃取真空装置 5 4 5.5振荡器 5.6具塞玻璃离心管50mL 5.7 真空泵;真空度应达到80kPa 5.8 离心机 5.9旋转燕发器 10刻度样品管5ml. 5. 5.11梨形瓶150mL 5.12筒形漏斗 试样的制备与保存 试样的制备 对无结晶的实验室样品,将其搅拌均匀 对有结晶的样品,在密闭情况下,置于不超过60C的水浴 中温热,振荡,待样品全部融化后搅匀,迅速冷却至室温 分出0.5kg作为试样 制备好的试样置于样 品瓶中,密封,并做上标记 6.2试样保存 将试样于常温下保存 测定步骤 提取 称取10g试样(精确到0.01g)置于50mL具塞玻璃离心管中,加人10tmL水,在液体混匀器上混 匀,加20ml.乙酸乙酯,于振荡器上振荡20min,以3000r/min离心5min,取上清液过盛有25g无水 硫酸钠筒形漏斗至梨形瓶中 再用20m乙酸乙酯提取一次,过无水硫酸钠简形漏斗,合并上清液,用 旋转蒸发器于45C水浴上减压蒸发至约2mL,待净化 7.2净化 将上述浓缩液移至CarboxylicAeid固相萃取柱中,再分别用4mL乙酸乙酯和4mL乙睛洗涤梨 形瓶和萃取柱,弃去全部流出液 在65kPa的负压下,减压抽干萃取柱2min,用2ml洗脱剂以 <3mL/min流速洗脱,收集洗脱液于5ml刻度样品管中,用洗脱剂定容至2 ,过0.20m滤膜,供 n 液相色谱-串联质谱仪测定 7.3测定 7.3.1液相色谱条件 a 色谱柱:AtlantisdC,3m,150mm×2.1mm(内径)或相当者 b 流动相:乙腊十0.1%甲酸水(30十70);
GB/T20744一2006 流速;200L/min; ce d 柱温:30C; 进样量;20l e 7.3.2质谱条件 离子源;电喷雾离子源(ESI); a b)扫描方式;正离子扫描; 检测方式;多反应监测; 电喷雾电压;5500V d 雾化气压力.a.oMPa 气帘气压力:0.069MPa; 辅助气流速:6L/min; g h)离子源温度;700C; 定性离子对,定量离子对,去簇电压和碰撞能量见表1 表1三种硝基咪陛药物的质谱参数 中文名称 英文名称 定性离子对(m/e)定量离子对(m/) 去簇电压/V 碰撞能量/V 30 19 172.1/128. 甲硝哗 172.1/128.1 metronidazole 34 172.1/82.1 30 201.1/140.2 2 1 洛硝哒陛 ronidazole 201.1/140,2 20 201.1/110.1 26 22 142.2/96.1 40 二甲硝咪坐 dimetridazole 142.2/96.1 40 l42.2/81.2 40 7.3.3液相色谱-串联质谱测定 在仪器最佳工作条件下,用甲稍瞪,洛稍哒唯、二甲刚咪瞪混合基质标准工作溶液分别进样,以峰而 积为纵坐标,混合基质标准工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线,用标准工作曲线对样品进行定 量,样品溶液中甲硝幽,洛硝哒幽,二甲硝咪幽的响应值均应在仪器测定的线性范围内 甲硝哗洛硝哒 陛、二甲硝眯陛标准物质总离子流图参见图A.1 在上述色谱条件和质谱条件下,甲硝瞠、洛硝哒哗、二 甲硝咪幽的参考保留时间见表2 表2三种硝基咪陛药物的参考保留时间 中文名称 保留时间/min 甲硝哗 2.80 洛硝哒 3.12 二甲硝咪陛 3,57 本方法的添加回收率数据参见附录B. 平行试验 按以上步骤,对同一试样进行平行试验测定 7.5空白试验 除不称取试样外,均按上述步骤同时完成空白试验 结果计算 结果按式(1)计算:
GB/T20744一2006 x=cx×I 1000 式中 试样中被渊组分残留量,单位为微克每千克(g/ke) -从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL) 样品溶液最终定容体积,单位为毫升(mL.); 样品溶液所代表最终试样的质量,单位为克(g) 7 注，计算结果应扣除空白值 精密度 本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GBT6379.2的规定确定的,重复性和再现性的值 以95%的可信度来计算 重复性 在重复性测定条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r 蜂蜜中甲硝幽、洛 硝哒陛,二甲硝咪陛含量范围及重复性方程见表3 表3含量范围及重复性和再现性方程 名 称 含量范围/ 重复性限r 再现性R /4g/kg) 0.051.0 lg"=0,8439lg一0.9316 gR=0,9502lgm一0.7466 甲硝陛 洛硝哒幽 0.12.0 lgr=1.2008lgm-0.5954 lgR=1.110olgm一0.5884 二甲硝咪陛 0.1~2.0 r=0.1519m+0.0003 lgR=0.9557lgm-0.788l 注:朋为两次测定结果的算术平均值 如果差值超过重复性限,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定 9.2再现性 在再现性测定条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R 蜂蜜中甲硝瞠.尚 硝哒陛、二甲硝咪陛的含量范围及再现性方程见表3
GB/T20744?2006 ? A ?? ?? ?????,?A.1 3.57 2.3e4 2.80 2.2e 2.le4 2.0e4 .9c4 1.8 L.7e4 .6c4 .5he4 .4e4 .3e4 1.2e4 .le4 " 1.0e4 9 000.0 8000.0 7000.0 6000.0 5000.0 000.0 000.0 2000,0 000.G /min ?A.1衢?????
GB/T20744一2006 附录 B 资料性附录 收率 本方法中甲硝幽、洛硝哒幽、二甲硝咪幽添加浓度及其平均回收率的试验数据,见表B.1 表B.1甲硝陛,洛硝哒陛、二甲硝咪呸添加浓度及其平均回收率的试验数据 药物名称 添加浓度/ug/kg 平均回收率/(% 0.05 76.0 0.1o 79.0 甲硝哗 0.20 77.0 82.4 1.00 0.1o 69,5 0.20 78.5 洛硝哒刚 0.40o 73.9 2.00 71.7 0.10 75.6 0.20 74.9 二甲硝咪陛 5 0.40 2.00 81.7