饲料酸化剂中柠檬酸、富马酸和乳酸的测定高效液相色谱法

饲料酸化剂中柠檬酸、富马酸和乳酸的测定高效液相色谱法

国家标准 GB/T23877一2009 饲料酸化剂中柠檬酸、富马酸和 乳酸的测定高效液相色谱法 Determinationofeitricaeid,fumaricacidandlacticacidinfeedacidifier一 Highperformmanceliquidehromatography 2009-05-26发布 2009-10-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T23877一2009 饲料酸化剂中柠檬酸、富马酸和 乳酸的测定高效液相色谱法 范围 本标准规定了测定饲料酸化剂中柠檬酸、富马酸和乳酸含量的高效液相色谱法 本标准适用于饲料酸化剂中柠檬酸、富马酸和乳酸含量的测定 本方法的定量限为:柠檬酸800mg/kg、富马酸8.0mg/kg、乳酸800mg/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 原理 试样中柠檬酸、富马酸和乳酸加水超声提取后,稀释至适当的浓度,用高效液相色谐仪进行测定,外 标法计算柠檬酸、富马酸和乳酸的含量 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为符合GB/T6682二级规定的用水 乙睛;色谱纯 4.2磷酸;色谱纯 4.30.1%磷酸溶液准确吸取1.00m磷酸(4.2),用符合GB/T6682规定的一级用水溶解并定容至 1000ml 柠檬酸标准品;纯度>99.5% 4.5富马酸标准品:纯度>99.5% 4.6柠檬酸标准储备液;准确称取柠檬酸标准品0.5025g于50ml容量瓶中,用水溶解并定容至刻 度 此溶液浓度为10.0 C条件下储藏,保存期3个月 mg/ml,4 富马酸标准储备液;准确称取6 0g富马酸标准品于100ml容量瓶中,用水溶解并定容至刻 .l000 度 此溶液浓度为1.0mg/ml,4C条件下储藏,保存期3个月 4.8乳酸标准储备液;制备和标定方法见附录A 混合标准储备液;取10.0ml柠檬酸标准储备液(4.6),1.0ml富马酸标准储备液(4.7)和10.0mL 4. 9 乳酸标准储备液(4.8)于50mL容量瓶中,用水定容至刻度,混匀 4C条件下储藏,保存期1个月 4.10混合标准工作液;准确吸取0.10ml.0.25mL、0.50ml、1.00ml、2.50ml5.00mL 10.00ml混合标准储备液(4.9)于10.0ml容量瓶中,用水定容至刻度,混匀 此为混合标准工作液， 现配现用
GB/T23877一2009 仪器和设备 5.1实验室常用仪器设备 5.2分析天平;感量为0.0001g 5.3超声波清洗器 5.4微孔滤膜:孔径0.45Am 5.5高效液相色谱仪(配有紫外检测器或二极管阵列检测器) 试样的制备 按GB/T14699.1规定,取有代表性的样品1kg,四分法缩减取200g,装人磨口瓶中备用 分析步骤 试样溶液制备 称取试样1g一5g(精确至0.000lg),置于100ml容量瓶中,加60ml.水,在50C水浴中超声提 取20min冷却至室温,用水定容至刻度,摇匀,过滤 取滤液稀释,使最后稀释液中各种有机酸的浓度 取部分稀释液过0.45um滤膜,滤液作为试样溶液 均落在A.10的工作曲线之内 7.2高效液相色谱条件 色谱柱:Ca柱,长2:50mm,内径4.6mm,粒度5pm(极性色谱柱》. 柱温:35C 流动相:乙腊十磷酸溶液(4.3)=2.5十97.5(体积比) 流速:l.0ml/min 检测波长;210nm 进样量.20AL. 7.3液相色谱测定 分别取混合标准工作液(4.10)和试样溶液(7.1),按7.2列出的条件进行液相色谱分析测定 以混 合标准工作液作多点校准,并用色谐峰面积积分值定量 测定中应调整试样溶液的浓度,使柠檬酸、富 马酸和乳酸的积分值分别落在标准曲线的相应范围内 结果计算与表述 试样中柠檬酸、富马酸和乳酸的含量X,以质量分数表示,按式(1)计算 X" cX X= ×100% m000000 式中: 由标准曲线得出的试样液中柠檬酸或富马酸或乳酸的浓度,单位为微克每毫升4g/'mL). 试样液总体积,单位为毫升(mL); 稀释倍数 试样的质量,单位为克(g) 测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留3位有效数字 重复性 在重复性条件下,完成两个平行测定的结果的相对偏差不大于5%
GB/T23877一2009 附 录A 规范性附录 乳酸标准储备溶液的制备和标定 A.1试剂和材料 A.1.1乳酸;纯度约为90% A.1.20.1mol/1氢氧化钠标准滴定溶液;按GB/T6o1配制和标定 A.1.31%酚酞指示剂溶液;l只酚敢溶于60mL95%乙醇中,用水稀释至100mL A.2仪器和设备 A.2.1电热套:500mL A.2.2圆底烧瓶;500mL A.2.3球形冷凝管:l00ml A .3 制备和标定 称取乳酸约3.0g于500mL圆底烧瓶中,加270mL水,装上球形冷凝管,接通冷却水,加热回流 15h,冷却至室温 移取20mL溶液,加40ml60mL水及0.2ml1%酚酞指示剂,用0.1mol/L.氢 氧化钠标准滴定溶液滴定至微红色30s不褪色,记录消耗0.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数 V) 乳酸标准储备液的浓度c,,单位为微克每毫升4g/mL),按式(A.1)计算 V ×90.08×1000 A.1 式中 氢氧化钠溶液的浓度,单位为摩尔每升(mol/L) V 滴定乳酸溶液所消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积,单位为毫升(mL). V 空白试验时所消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积,单位为毫升(mL); V 乳酸溶液的体积,单位为毫升(mL); 乳酸的摩尔质量 90.08 此标准储备液在4C下可保存3个月
GB/T23877一2009 附录 B 资料性附录 柠檬酸、富马酸和乳酸标准品的色谱图 柠檬酸、富马酸和乳酸标准品的色谱图见图B.1 AU 富马酸 0.090 柠檬股 0.080 0.070 0.060 乳酸 0.050 0.040 0.030 0.020 0.010 0.00o 5.0o 9.o0 1.00 1.00 2.00 3.00 4.00 6.00 7.00 8.00 10.00 12.00 min 图B.1标准溶液色谱图