动物源性食品中多种B-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法

动物源性食品中多种B-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法

国家标准 GB/T22286一2008 动物源性食品中多种卜受体激动剂 残留量的测定液相色谱串联质谱法 Determinationof卜agomistsresiduesinfoodstuffofamimalorigin Liquidchromatographywithtandem-massspeetrometricmethod 2008-08-12发布 2008-12-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T22286一2008 前 言 本标准的附录A为资料性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本标准起草单位;上海出人境检验检疫局、上海市疾病预防控制中心、上海水产大 学、浦江出人境检验检疫局 本标准主要起草人:郭德华、汪国权、金玉娥、李波、王锡昌、钟一亮、邓晓军、靳海彤杨景贤
GB/T22286一2008 动物源性食品中多种卜受体激动剂 残留量的测定液相色谱串联质谱法 范围 本标准规定了动物源性食品中沙丁胺醇(salbutamol)、特布他林(terbutaline),塞曼特罗(eimat erol),塞布特罗(cimbuterol),莱克多巴胺(ractompamine),克仑特罗(clenbuterol),澳布特罗(brombu terol),苯氧丙酚胺(isoxsuprine),马布特罗(G mabuterol),马责特罗(mapenterol)、澳代克仑特罗(b )rom- dhlorbuterol)残留量的液相色谱-串联质谱的测定方法 本标准适用于猪肝和猪肉中沙丁胺醇、特布他林、塞曼特罗,塞布特罗,莱克多巴胺,克仑特罗,漠布 特罗,苯氧丙酚胺、马布特罗、马责特罗、澳代克仑特罗残留量的检验 本方法中沙丁胺醉、特布他林、塞曼特罗、塞布特罗,莱克多巴胺,克仑特罗、澳布特罗,苯氧丙酚胺、 马布特罗,马责特罗、嗅代克仑特罗的检出限均为0.5g/" INg" 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是香可使用这些文件的最新版本 几是不让日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008,ISo3696;1987,MOD) 原理 试样中的残留物经酶解,用高氯酸调节pH值,沉淀蛋白后离心，上清液用异丙醉乙酸乙酣提取 再用阳离子交换柱净化,液相色谱-串联质谱法测定,内标法定量 试剂和材料 除另有规定外,所有试剂均为分析纯试验用水应符合GB/T6682一级水的标准 甲醇:液相色谱纯 4.2乙酸钠(CHcooNa.3H.o). 4.30.2nmol/几乙酸钠缓冲液，称取13.6g乙酸钠,溶解于500ml水中,用适量乙酸调节pH至5.2 4.4高氯酸:70%一72% 4.50.1mol儿高氯酸;移取8.7mL高氯酸,用水稀释至10o0ml 4.6氢氧化钠 4.7l0mol/L氢氧化钠溶液;称取40只氢氧化钠,用适量水溶解冷却后,用水稀释至100mL 4.8饱和氯化钠溶液 4.9异丙醉乙酸乙酯;(G十4,体积比. 4.10甲酸水溶液2% 4.11氨水甲醇溶液;5% 4.120.1%甲酸水溶液-甲醇溶液:(95十5,体积比). 4.13卜葡萄糖醛武酶/芳基硫酸酯酶(gGlueuronidaese/arylsullatase)10000unts/mg OasisMCx阳离子交换柱:60mg/3mL,使用前依次用3mlL甲醇和3mL水活化 14 4. 注OasisMCcx阳离子交换柱是由waters公司提供的产品的商品名 给出这一信息是为了方便本标准的使用者 并不表示对该产品的认可 如果其他产品能有相同的效果,则可使用这些等效的产品
GB/T22286一2008 4.15沙丁胺醇(CAS;18559-94-9)、特布他林半硫酸盐(CAS:23031-32-5),塞曼特罗(CAS:54239-37-1、 塞布特罗(CAS:54239-37-1),莱克多巴胺盐酸盐(CAS,90274-24-1l,克仑特罗盐酸盐(CAs:37148-27-9)澳 布特罗(CAS;41937-02-4),苯氧丙酚胺盐酸盐(CA:579-56-6)、马布特罗(CAS.54240-36-7)、马贡特罗 CAs.95656-68-1)溴代克仑特罗(CAs:37153-52-9)标准品:纯度大于98% 4.16标准储备溶液;准确称取适量的沙丁胺醉、特布他林、塞曼特罗,塞布特罗,莱克多巴胺、克仑特 罗、溴布特罗,苯氧丙酚胺、马布特罗、马责特罗、溴代克仑特罗标准品,用甲醇分别配制成1004g/mL 的标准贮备液,保存于一18C冰箱内,可使用1年 混合标准储备溶液(l4g/ /mL):分别准确吸取1.00mL沙丁胺醇、特布他林、塞曼特罗、塞布特 罗,莱克多巴胺、克仑特罗、嗅布特罗、苯氧丙酚胺、马布特罗、马责特罗、嗅代克仑特罗至100ml容量 瓶中,用甲醇稀释至刻度，一18避光保存 4.18同位素内标物;克仑特罗-D9,沙丁胺醉-D3,纯度大于98% 4.19同位素内标储备溶液;准确称取适量的克仑特罗-D9、沙丁胺醉-D3,用甲醉配制成100"g/ml的 标准贮备液保存于一18C冰箱内,可使用1年 4.20同位素内标工作溶液(10ng/mL)将上述同位素内标储备溶液用甲醉进行适当稀释 仪器和设备 5.1高效液相色谱-串联质谱联用仪.配有电喷雾离子源(EsD. 5.2均质器 3 5 旋涡混合器 5.4 离心机:5000r/min和15000r/min 55 .5 氮吹仪 5.6水平振荡器 5.7真空过装置 5.8pH计 55 超声波发生器 样品制备 6.1提取 称取2g(精确到0.01g)经捣碎的样品于50mL离心管中,加人8mL乙酸钠缓冲液,充分混匀,再 加50l葡萄糖醛武酶/芳基硫酸酯酶,混匀后,37C水浴水解12h 添加100l10ng/mL的内标工作液于待测样品中 加盖置于水平振荡器振荡15tmin,离心10nmin G00y/mn),取4ml上清液加人0.lmol/儿高飘酸溶液5ml.混合均匀,用高飘酸调节pH值到士0.3. 5000r/min离心10nmin后,将全部上清液(约10mL)转移到50mL离心管中,用10nmol/L的氢氧化钠溶液 调节pH值到11 加人10ml饱和氧化钠溶液和10ml异丙醇-乙酸乙酯(6十4)混合溶液,充分提取,在 5000r/nmin下离心10nmin 转移全部有机相,在40C水浴下用氮气将其吹干 加人5mL乙酸钠缓冲液,超声混匀,使残渣充 分溶解后备用 2 6. 净化 将阳离子交换小柱连接到真空过柱装置 将上述残渣溶液上柱,依次用2mL.水、,2mL.2%甲酸水 溶液和2ml.甲醉洗涤柱子并彻底抽干,最后用2ml的5%氨水甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分 流 速控制在0.5ml/min 洗脱液在40C水浴下氮气吹干 准确加人200L.0.1%甲酸/水-甲醇溶液(95十5),超声混匀 将溶液转移到1.5ml离心管中, 15000r/min离心10min.
GB/T22286一2008 上清液供液相色谱串联质谱测定 液相串联质谱测定 液相色谱-串联质谱条件 a 色谱柱;WatersATLANTICSC;柱,150mm×2.lmm(内径),粒度5m; 流动相:A.0.1%甲酸水,B:0.1%甲酸/乙睛，梯度淋洗见表1; b 表1梯度淋洗表 A/% B/% 时间/" nmin 96 96 20 8C 21 77 23 22 95 25 95 96 25.5 流速;0.2mL/min;: d) 柱温;30C; 进样量:20L; e f 离子源;电喷雾(ESI),正离子模式; 扫描方式:多反应监测(MRM); g h)脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适的高纯气体;使用前应调节各气体流量以 使质谱灵敏度达到检测要求; i 毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量等电压值应优化至最优灵敏度; 监测离子;监测离子见表2 表2被测物的母离子和离子参数表 母离子 定量子离子 子离子 定量子离子 母离子 子离子 被测物 被测物 m/z m/z m/z m/z m/z m/z 沙丁胺醇 240 148,222 148 特布他林 226 52、125 152 塞曼特罗 202 160、l43 160 塞布特罗 234 160、l43 60 莱克多巴胺 302 164、284 164 克仑特罗 277 203、259 203 澳代克仑特罗 323 249、l68 367 293 249 漠布特罗 293、349 150,284 237 苯氧丙酚版 302 150 马布特罗 311 237,293 325 237、217 237 286 204 204 马贡特罗 克仑特罗-D9 沙丁胺醇-D3 243 151 151 注:;方法中所列色谱柱仅供参考,给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不表示对该产品的认可 如果其他 产品能有相同的效果,则可使用这些等效的产品 液相色谱-串联质谱测定 按照6.1液相色谱-串联质谱条件测定样品和混合标准工作溶液,以色谱峰面积按内标法定量 在 上述色谱条件下沙丁胺醇、特布他林,塞曼特罗,塞布特罗,莱克多巴胺、克仑特罗,澳代克仑特罗,澳布 特罗,苯氧丙酚胺、马布特罗、马责特罗和同位素内标沙丁胺醇-D3,克仑特罗-D9的参考保留时间分别
GB/T22286一2008 min、6.24 为6.16 min、7.01min、l1.07min、14.65min、15.66min,16.52min、17.47min、18.72min、 18.77n 、23.11 min,6.10min和15.60min,标准溶液的液相色谱串联质谱图参见附录A中图A.1， rmin、 7.3液相色谱-串联质谱确证 按照7.1液相色谱-串联质谱条件测定样品和标准工作溶液,如果检出的质量色谱峰保留时间与标 准样品一致,并且在扣除背景后的样品谱图中,各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的 标准溶液谱图相比,误差不超过表3规定的范围,则可判定样品中存在对应的被测物 表3定性确证时相对离子丰度的最大允许误差 50% l0%20% 10% 相对离子丰度 >20%一50% 士20% 士25% 士30% 士50% 允许的相对误差 空白试验 除不加试样外,均按上述测定步骤进行 8 计算 8.1按式(1)计算样品中沙丁胺醉、特布他林、塞曼特罗,塞布特罗,莱克多巴胺、克仑特罗、澳布特罗 苯氧丙酚胺、马布特罗、马责特罗或澳代克仑特罗残留量 计算结果需扣除空白值 沙丁胺醇-D3作为沙丁胺醉、特布他林和莱克多巴胺的内标物质,克仑特罗-D9作为其余月-受体激 动剂的内标物质 scGXAXAx 大 = X c,×A×A×m 式中: -样品中被测物残留量-单位为微克每千克(4 1g/kg); 沙丁旅酿.特布他林、塞曼特罗,塞有特罗,莱克多巴腋、克仑特罗.澳布特罗,装氧丙厢版-马 、马斑特罗或澳代克仑特罗标准工作溶液的浓度-单位为微克每升(g/L) 布特罗、 -标准工作溶液中内标物的浓度,单位为散克每升(48/L) -样液中内标物的浓度.单位为微克每升(4E/L) ,莱克多巴胶,克仑特罗,嗅布特罗、苯氧丙盼胺、马 A 沙丁胺醇、特布他林、塞曼特罗、塞布特罗 布特罗、马责特罗或澳代克仑特罗标准工作溶液的峰面积 样液中沙丁胺醇、特布他林、塞曼特罗,塞布特罗、莱克多巴胺、克仑特罗澳布特罗,苯氧丙 酚胺、马布特罗、马责特罗或澳代克仑特罗的峰面积; 标准工作溶液中内标物的峰面积; A 样液中内标物的峰面积; 样品定容体积,单位为毫升(mL); 样品称样量,单位为克(g). m7 8.2计算结果小于本标准检出限0.54g/kg时,视为未检出 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的30%
GB/T22286一2008 附 录A 资料性附录 11种卜受体激动剂标准物质的多反应监测(MMRNM)色谱图 2MRMsca" 6.10 [.S]Salbutamol-D3 2.00 .00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 0.00 努R " 6.16 1" Salbutamol 8.00 2.00 4.00 6.00 B.00 10.0012.00 14.00 16.0018.00 20.00 "Ma酷 100] Terbutaline % 10.00 16.0018.00 0.00 .00 4.00 6.00 8.00 12.00 14.00 您.只群 7.01 100 Cimateol ，16 % & 4.0o 26.00 2.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.0018.00 20.0022.0024.00 3:MRMor .07 GChag Cimbutcrol 800 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 20.00 22.00 26.06 16.0018.0o M品瓷e 14.65 O Ractopamine 800 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 "a.治光猫 15.60 1" I.S]Clenbuterol.-D9 me 8.0" 2.00 4.00 6.00 8.00 10.0012.00 14.00 16.0018.00 20.00 22.0024.0026.00 l5.66 4:MRMof8ChannesES 277 越 Im Clenuteol 8.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00 16.,00 1652 5.AMRMof8Cha" 100 Bromchlorbuterol 2.00 .00 6.00 8.00 10.00 12.00 4.00 16.0018.00 20.00 0.00 2.,024.002%. SMRMo8Chas 17.47 100 Brombutero 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.0018.00 20.00 22.0024.0o D.00 iRMo78Chamm 18.72 lsoxsuprince 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 20.00 26.00 22.002499 0.00 8.% IMuRcH 100 T Mabuteol 2.00 4.00 6.00 8.00 10.0012.00 14.00 16.0018.00 20.00 .00 2K 备 100 23.30 Mapenterol 23.02 23.40 mTnme 2.00 4.00 6.00 8.00 10.0012.00 14.00 16.0018.00 20.00 22.0024.0026.00 0.00 图A.1沙丁胺醇、特布他林、塞曼特罗、塞布特罗、莱克多巴胺、克仑特罗、澳布特罗苯氧丙酚胺 马布特罗,马责特罗和澳代克仑特罗标准物质的多反应监测(NMIRM)色谱图