蜂蜜中蔗糖转化酶的测定分光光度法

蜂蜜中蔗糖转化酶的测定分光光度法

国家标准 GB/T40152一2021 蜂蜜中蔗糖转化酶的测定 分光光度法 Determinationofsaccharaseactivitinhoney" Spectrophotometricmethod 2021-05-21发布 2021-12-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标涯花管理委员会国家标准
GB/40152一2021 前 言 本文件按照GB/T1.1一2020<标准化工作导则第1部分;标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 本文件的发布机构不承担识别专利的责任 本文件由中华全国供销合作总社提出 本文件由全国蜂产品标准化工作组(sAC/SwG2)归口 本文件起草单位:江苏中谱检测有限公司 本文件主要起草人:徐锦忠,羊细群、鲁惠玲、王英俊、陈梅、王燕、王敏、姚超
GB/40152一2021 蜂蜜中蔗糖转化酶的测定 分光光度法 范围 本文件规定了蜂蜜中蔗糖转化酶的分光光度测定方法 本文件适用于蜂蜜中蔗糖转化酶的测定 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义 方法原理 蜂蜜中所含有的蔗糖转化酶能将底物对硝基苯-a-D毗喃葡萄糖苷定量转化为对硝基苯酚,通过测 定特定波长下吸光度值确定对硝基苯酚含量来测定蜂蜜中蔗糖转化酶 将蜂蜜溶液加人到底物溶液 中,混合均匀,在40条件下反应20nmin后,添加终止溶液终止反应,于400nm波长下,测定吸光度 吸光度值与蔗糖转化酶值成正比 同时做空白对照 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的三级水 5.1磷酸二氢钾KH,PO. 5.2二水合磷酸氢二钠NaHPO2H,O) 5.3对硝基苯-a-D毗喃葡萄糖背(CAsNo;3767-28-0) 5.4三羚甲基氨基甲熔Tris 5.50.1mol/L的磷酸盐缓冲液pH为6.0) 称取11l.66g磷酸二氢钾和2.56g二水合磷酸氢二钠NaHPO2H.O),加水溶解,稀释至1L 5.60.02nmol/L 底物溶液(pH为6.0). 称取6.025见对确基装aD毗喃葡萄糖苷,加人睛酸盐缓冲液(G.5)约900mL溶解,必要时加热至 60C助溶,并冷却至室温,稀释至1L,4C避光保存,有效期7d 5.73mol/L终止溶液
GB/T40152一202 称取363.4g三胫甲基氨基甲婉,加人900ml水溶解后,用3mol/儿Hcl调节pH至9.5,用水稀 释至1L o 仪器和设备 6.1紫外可见分光光度计 6.2分析天平;感量0.1mg,0.01g 6.3涡旋混匀器 6.4pH计;精度士0.02 6.5恒温水浴锅;温度控制精度士0.1C 6.6容量瓶;25nmL(A级 6.7移液管1ml、5ml 6.8定时器:精确度5s 6.9试管:10mL 试样的制备与保存 样品为均匀无杂质的液体或结晶蜂蜜 对于有结晶的蜂蜜,于40C以下融化,混合均匀后待测 测定步骤 8 样品的制备;称取4g(精确至0.01g)蜂蜜于25mL容量瓶中,加人15mL磷酸盐缓冲液(5.5),充 8.1 分摇匀溶解,用磷酸盐缓冲液(5.5)定容至刻度,涡旋混合均匀,冷藏保存备用,有效期为1d 8.2用移液管分别移取5ml底物溶液(5.6)于两支试管中,将两支试管同时置于40C水浴锅中预热 5min后，一支试管准确加人0.5mL样品溶液(8.1),另一支空白对照试管不加样品溶液,计时,迅速涡 旋10s后将两支试管再置于40C水浴锅中,20min后从水浴锅中取出试管,分别准确加人0.5nm的 终止溶液(5.7),迅速涡旋混匀.冷却至室温 在空白对照试管中准确加人0.5mL样品溶液(8.1),再次 混合均匀 于波长400nm处分别测样品溶液以及空白对照溶液的吸光度 9 结果计算 试样中的蔗糖转化酶值按式(1)进行计算 X=(A，一A)×198.68 式中: -样品的蔗糖转化酶值,单位为标准单位每千克(U/kg); -样品溶液在波长400nm下的吸光度 A， 空白对照溶液在波长400nm下的吸光度 Ao 结果保留至小数点后一位 10精密度 蔗糖转化酶值>10U/kg时,在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术
GB/40152一2021 平均值的15% 蔗糖转化酶值<10U/lkg时,在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术 平均值的25%

蜂蜜中蔗糖转化酶的测定分光光度法GB/T40152-2021详解

1. 标准概述

GB/T40152-2021是中国国家标准化管理委员会颁布的有关蜂蜜中蔗糖转化酶测定分光光度法的标准，适用于蜂蜜中蔗糖转化酶含量的测定。

2. 测定方法原理

该标准的测定方法主要基于蔗糖转化酶催化下蔗糖水解产生的葡萄糖和果糖的特性。在一定条件下，加入苯酚和氯化锌等试剂后，葡萄糖和果糖与苯酚和氯化锌相互作用生成一种紫色络合物，其吸光度与葡萄糖和果糖的含量成正比关系。通过分光光度计对样品中的吸光度进行测定，即可计算出蜂蜜中蔗糖转化酶的含量。

3. 测定方法步骤

标准中规定了测定方法的具体步骤：

1. 取样：从全混合蜂蜜中取适量样品。
2. 制备样液：将样品加入稀盐酸中水解，加入试剂后调整至一定体积。
3. 测定吸光度：使用分光光度计将样品的吸光度进行测定。
4. 计算含量：根据标准曲线，计算出蜂蜜中蔗糖转化酶的含量。

4. 结论

GB/T40152-2021标准是我国在蜂蜜中蔗糖转化酶测定领域的一项重要成果，对于保障蜂蜜产品的质量和安全具有重要意义。在实施标准时，需要根据具体情况进行合理的样品取样、制备样液以及测定吸光度等工作，以达到最佳的测定效果。

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