GB/T40744-2021
马铃薯茎叶及其加工制品中茄尼醇的含量测定高效液相色谱-质谱法
Determinationofsolanesolinpotatostems，leavesandtheirprocessedproducts—Highperformanceliquidchromatography-massspectrometry
- 中国标准分类号（CCS）B20
- 国际标准分类号（ICS）65.020.99
- 实施日期2022-05-01
- 文件格式PDF
- 文本页数9页
- 文件大小666.53KB
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马铃薯茎叶及其加工制品中茄尼醇的含量测定高效液相色谱-质谱法
国家标准 GB/T40744一2021 马铃薯茎叶及其加工制品中茄尼醇的 含量测定高效液相色谱-质谱法 Determinationofsolanesolinpotatostems,leavesandtheirprocessedproducts Highperformaneeliquidchromatography-massspectrometry 2021-10-11发布 2022-05-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标涯花管理委员会国家标准
GB/40744一2021 前 言 本文件按照GB/T1.1一2020<标准化工作导则第1部分;标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草
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本文件由标准化研究院提出并归口 本文件起草单位;计量大学、深圳市标准技术研究院、重庆两江创享医药检验认证科技有限公 司北京电子科技职业学院、食药环检验研究院(山东)集团有限公司、标准化研究院、华测检测认证 集团股份有限公司、中山内得农业科技有限公司、云南农业大学、浙江大学、热带农业科学院分析测 试中心、中关村国际医药检验认证科技有限公司、江苏黄淮农业科技有限公司
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GB/40744一2021 马铃薯茎叶及其加工制品中茄尼醇的 含量测定高效液相色谱-质谱法 范围 本文件规定了用高效液相色谱-质谱测定马铃薯茎叶及其加工制品中总茄尼醉含量的测定原理,试 剂和材料、仪器和设备、检测步骤、分析结果的表述、精密度等
本文件适用于马铃薯茎叶及其加工制品中总茄尼醉含量的测定
规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T8855新鲜水果和蔬菜取样方法 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义
原理 用正己婉提取马铃薯叶中的游离茄尼醉(包含醋态),总茄尼醇用氢氧化钠皂化以释放出结合态的 茄尼醇,然后用水去除杂质,离心分离,取上层溶液用流动相稀释定容,经滤膜过滤后用高效液相色谱 质谱仪测定,外标法定量计算
试剂和材料 S 除另外有规定外,所用试剂均为分析纯,水应符合GB/T6682中一级水的要求
5.1正己烧(C,H);分析纯
5.2甲醇(CH,O);色谱纯
5.3异丙醉醇(CH,O);色谱纯
5.4氧氧化钠(NaOH);分析纯
5.5无水乙醇(CH,O)分析纯
5.6茄尼醉标准品(CH(O,CAs号;13190-97-1);纯度>98%
5.7NaOH乙醇溶液(0.02mol/L);称取0.4g氢氧化钠5.4),溶于无水乙醇(5.5),用无水乙醇稀释至 500mL,储存于聚乙烯瓶中,旋紧瓶盖
5.8流动相甲醉(5.2);异丙醉(5.3)=50:50(体积比),使用前经有机相滤膜(5.11)过滤,超声脱气
5.9茄尼醇标准储备液(5004g/mL);称取50mg茄尼醇标准品(5.6),精确至0.0001g,置于100ml.
GB/T40744一202 棕色容量瓶(5.13)中,用正己烧(5.1)溶解并定容至刻度线,混匀
标准储备液避光保存于4C冰箱备 用,有效期3个月
5.10茄尼醇系列标准工作溶液:分别准确移取适量茄尼醇标准储备液(5.9)于50mL棕色容量瓶 (5.13)中,用流动相(5.8)稀释并定容至刻度线,摇匀,得到茄尼醇系列标准工作溶液(质量浓度分别为 g/mL54E/mL.,104g/mL254g/ml.50闪g/mL). 0.1 /mL、 'g 5.11有机相滤膜;孔径0.22Am
5.12离心管:50ml(螺旋盖),10ml(具塞. 5.13棕色容量瓶:100mL,50mL,25mL 5.14三角瓶50ml(具塞、棕色. 6 仪器和设备 6.1涡旋振荡器 超声波清洗器,功率不低于250w,或相当的设备 6.2 6.3离心机(转速不低于4000r/min)
6.4恒温振荡器,可水浴加热(oC100)
高效液相色谐-质谱仪,配有电喷雾离子源(Es) 6.5 6.6分析天平,感量0.0001 g
测定步骤 注意;本章所述操作应避免阳光直射或在强光下操作
7.1样品前处理 7.1.1马铃薯叶 7.1.1.1试样制备 按照GB/T8855中取样过程
7.1.1.2提取 称取约1g试样(见7.1.1.1)于50mL离心管(5.12)中,精确至0.01g,加人30ml正已炕(5.1),用 涡旋振荡器(6.1)涡旋振荡2nmin,旋紧盖子,静置30min后,用超声波清洗器(6.2)于45C超声萃取试 样30nmin,3500r/nmin离心5min,移取上清液人50mL棕色容量瓶(5.13)中
再分2次各用5mL正 己炕(5.1)重复以上振荡、萃取和离心步骤,合并上层正已烧层于50mL棕色容量瓶(5.13)中,用正已 5.1)定容至刻度线摇匀
7.1.1.3茄尼醇测定试样处理 准确移取4ml提取液(见7.1.1.2)于50mL三角瓶(5.14)中,精确至0.1mL,加人4mlNaOH乙 醇溶液(5.7),充分混匀,轻塞塞子,在恒温振荡器(6.4)中60C65C水浴振荡、皂化2h;皂化后溶液 在83C一87C水浴蒸发至近干;准确移取2mL正己烧于上述三角瓶中,超声2min溶解残渣,转移至 另一洁净10mL离心管(5.12)中 重复以上自“准确移取2ml正己烧中”,溶解三角瓶中残留物转移至离心管(5.12)中,再用约 6mL水,分3次每次2ml洗涤三角瓶,合并溶液于离心管(5.12)中;涡旋振荡器离心管2min以去除
GB/40744一2021 水溶性杂质,离心10min分层;准确移取1mL净化后上层正己炕提取液,用流动相(5.8)稀释并定容至 25ml棕色容量瓶(5.13)中(如茄尼醉浓度超出标准曲线线性范围,则适当调整移取体积和定容体积) 经有机相滤膜(5.1ll)过滤,滤液待上机测定
7.1.1.4马铃薯叶提取物 分别称取约0.1g(精确到0.0001g)马铃薯叶提取物1(70%马铃薯叶提取液)、马铃薯叶提取物" 15%马铃薯叶提取液)置于10mL烧杯中,用正己烧溶解,并转移至50mL的棕色容量瓶(5.13)中,用 正己烧定容,摇匀
再根据7.1.1.3的实验步骤提取马铃薯叶提取物中的茄尼醇
7.2样品测定 7.2.1高效液相色谱-质谱参考条件 液相色谱条件如下 色谱柱:Cs,150mm×2.1mm(内径),粒径3.5m,或性能相当者; a b 流动相甲醉十异丙醉(50%十50%); 进样体积:10AL; c d)柱温:35C; 流速:0,4ml/min; e 洗脱时间:8min; 等度洗脱 g 质谱条件如下 a 定性;正离子全扫描模式,提取离子m/为653.6; b 定量:选择离子扫描模式,m/为653.6; 毛细管温度;350C; C 雾化温度;300C; d 鞘气压力;35Arb e 喷雾电压:3500V; 套管透镜电压;91V g 7.2.2液相色谱-质谱测定 分别取适量的茄尼醇系列标准工作溶液(5.10)及待上机试样溶液,按照7.2.1列出的条件进行液相 色谱-质谱分析测定 由保留时间和m/对茄尼醇进行定性,根据茄尼醇标准工作溶液响应信号和茄 尼醇系列标准工作溶液(5.10)浓度,建立标准工作曲线,标准工作曲线线性相关系数R'>0.997
使用 外标法对试样的茄尼醇含量进行定量计算 待测样液中茄尼醇的响应值应在标准曲线线性范围内,超过线性范围则应以流动相(5.8)稀释样品 响应值至标准曲线响应值上限内后再进行分析
分析过程中,每20次样品测定后应加人一个与样品峰 面积相近的标准工作溶液如果测得的值与原值相对平均偏差超过5.0%,则应重新进行标准曲线的制 作
茄尼醇标准溶液质谱图、茄尼醇标准溶液以及典型样品(马铃叶和2种马铃叶提取物)特征离 子质量色谱图分别见附录A
结果计算与表示 8.1结果计算 马铃薯叶干基样品中茄尼醇的含量按公式(1)计算
GB/T40744一2021 p×V× x10" X=- m×1一w 式中 x -试样中茄尼醇的含量(以质量分数计),单位为毫克每克(mg/g); -由标准工作曲线得出的茄尼醇质量浓度,单位为微克每毫升(4g/mL); -试样最终定容体积,单位为毫升(ml); 试样稀释倍数; 试样质量,单位为克(g); m -马铃薯叶中水分的质量分数
Ze 8.2结果表示 测定结果以平均测定的算术平均值表示,计算结果保留两位有效数字
两次平行测定结果的相对 平均偏差不应超过10%
精密度和回收率 本方法的精密度和回收率实验结果参见表1和表2
表1本方法的精密度实验研究结果n=6 样品名称 马铃薯叶提取物1 马铃薯叶提取液2 马铃薯叶 日内相对标准偏差/% 5.l 1.5 0.9 日间相对标准偏差/% 4.8 2.6 4.7 表2本方法的回收率实验研究结果 茄尼醇含量/样品中茄尼醇含量/添加水平/平均回收率， RsD/% 检测参数 样品名称 取样量/g mg/g mg mg/g 马铃薯叶 1.0000 1.53 1.53 1.0 99.0 6.6 30 总茄尼醇马铃薯叶提取物1 0.1015 5.86×10: 59.5 81.7 1.4 马铃薯叶提取物20.1006 10 1.1 1,86×10 18.7 98.0 10 检出限 该方法对茄尼醇检出限为0.1mg/kg,定量限为0,.3mg/kg
GB/40744一2021 附 录 A 资料性 茄尼醇典型样品色谱图及质谱图 茄尼醇正离子模式质谱图见图A.1
茄尼醇标准溶液及典型样品的色谱图示例见图A.2图A.5
20000000 653.6 6000000 12000000 8000000 4000000 631.5 620 630 640 650 660 m/E 茄尼醇正离子模式质谱图 图A.1 4000000 3500000 3000000 茄尼解2.754 2500000 2000000 1500000 1000000. 500000 /min 图A.2标准溶液总离子流出图
GB/T40744一2021 600000. 500000 茄尼醉-2.754 400000 款 300000 200000 100000 /min 图A.3马铃薯叶样品总离子流出图 600000 500000 茄尼脖-2.754 400000- 激 300000 2000001 100000 /min 图A.4马铃薯叶提取物1样品总离子流出图 240000. 200000 160000 茄尼醉-2.754 120000 80000” 40000 /minm 图A.5马铃薯叶提取液2样品总离子流出图
GB/40744一2021 参考文献 [1]GB/T31758烟叶和烟叶提取物中茄尼醉的测定高效液相色谱法
马铃薯茎叶及其加工制品中茄尼醇的含量测定高效液相色谱-质谱法GB/T40744-2021
茄尼醇是一种天然存在于植物细胞膜中的次生代谢产物，具有多种生理活性。马铃薯是一种重要的食用作物，在世界范围内广泛种植和消费。茎叶及其加工制品是马铃薯的副产品，也被广泛利用。因此，研究马铃薯茎叶及其加工制品中茄尼醇的含量，对于深入了解马铃薯的生物学特性和开发潜力具有重要意义。
GB/T40744-2021标准规定了一种用于测定马铃薯茎叶及其加工制品中茄尼醇含量的高效液相色谱-质谱法。该方法使用离子交换柱进行样品的预处理，采用C18反相色谱柱进行分离，以正离子模式下的多反应监测（MRM）方式进行检测和定量。
该方法具有快速、准确、灵敏度高等优点，能够同时测定样品中茄尼醇的各种同分异构体，对于茄尼醇的测定具有很好的选择性和灵敏度。同时，该方法还具有简单、操作便捷、适用范围广等优点，可用于马铃薯茎叶及其加工制品中茄尼醇含量的测定。
总之，本文介绍了一种基于GB/T40744-2021标准的高效液相色谱-质谱法，可用于快速、准确地测定马铃薯茎叶及其加工制品中茄尼醇的含量。这一方法为深入研究马铃薯的生物学特性和开发潜力提供了有力支持。
