蜂王浆中链霉素、双氢链霉素残留量测定液相色谱法

蜂王浆中链霉素、双氢链霉素残留量测定液相色谱法

国家标准 GB/21164一2007 蜂王浆中链霉素、双氢链霉素残留量测定 液相色谱法 Determinationofstreptomyein,dihydrostreptomyeinresiduesinroyaljelly一 Liquidchromatographymethod 2007-10-31发布 2008-04-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T21164一2007 前 言 本标准的附录A为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口 本标准起草单位;江苏出人境检验检疫局、兽医药品监察所 本标准主要起草人:陈惠兰、吴斌、赵增运、沈崇钰、丁涛、黄娟、朱成晶、徐锦忠、蒋原、陶宏锦 朱馨乐
GB/T21164一2007 蜂王浆中链霉素、双氢链霉素残留量测定 液相色谱法 范围 本标准规定了蜂王浆中链霉素和双氢链霉素残留的液相色谱-柱后衍生化荧光测定方法 本标准适用于蜂王浆中链霉素和双氢链霉素残留量的测定 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一1992， ,neqIsO3696:1987 方法提要 蜂王浆样品中链霉素和双氢链霉素用庚烧磺酸钠-磷酸钠混合提取液提取,提取液用C固相萃取 柱净化,甲醇洗脱,旋转燕发至干,用0.01nmol/L庚熔磺酸钠溶液溶解定容,样品溶液经高效液相色谱 柱后衍生,荧光检测器检测,外标法定量 试剂和材料 4.1甲醇;色谱纯 4.2水;应符合GB/T668规定的 -级水 4.3乙睛;色谱纯 4.4氢氧化钠;分析纯 4.5三氯甲婉:分析纯 4.61,2-紫醋-4-碱酸钠;色谱纯 叔丁基甲基酥.色谱纯 正己棕;分析纯 庚熔磺酸钠;色谱纯 4.10确酸销;分析纯 4. 11磷酸;分析纯 4.12 链霉素和双氢链霉素标准物质;纯度>99% 4.13 Ca固相苹取柱.s00mg.3ml 使用前用5ml甲醇10ml水预洗并保持柱体湿润 4.14庚婉碱酸钠-磷酸钠混合提取液;称取10.10g庚炕碱酸钠、4.10g磷酸钠,溶于1000ml水中 用磷酸(4.1l)调溶液pH3.3 4.15叔丁基甲基酥-正己婉溶液;取10ml.正己婉、40ml叔丁基甲基腿,混匀 庚烧碱酸钠溶液.0.0nmol/L 称取2.02其庚婉碱酸钠,溶于1000mL水中,用磷酸(4.11)调 3 pH3. 3 4.17氢氧化钠溶液:0.2mol/L 称取8g氢氧化钠(4.4),溶于1000ml水中,过0.45m的滤膜 抽滤脱气
GB/T21164一2007 4.181,2-禁醒-4磺酸钠溶液:0.6mmol/L 称取0.078g1,2-綦醒-4-磺酸钠(4.6),用500mL水溶 解,过0.45m的滤膜,抽滤脱气 4.19链霉素和双氢链霉素标准储备溶液0.10mg/ml 准确称取适量的链霉素和双氢链霉素标准 品,用水溶解定容,配制成0.10mg/ml.的标准储备液 储备液贮存在4C冰箱中,保存期一年 4.20链霉素和双氢链霉素标准工作溶液;根据试验需要,用庚炕磺酸钠溶液(4.16)稀释标准储备液 4.19),配成适当浓度的标准工作溶液,现用现配 仪器 51高效液相色谱仪配柱后衍生装置和荧光检测器,Pekering双通道柱后衍生装置或相当者 5.2旋涡混匀器 5.3固相萃取装置 5.4旋转蒸发器 5.5离心机. 56 真空泵;真空度应达到80kPae 5.了 pH计;测量精度士0.02 5.8具塞离心管,50ml 移液管;20.0mL、,10.0mL、1.0mL 5 9g 55. .10滤膜过滤器:0.454m,水相 试样的制备与保存 试样的制备 6. 将样品解冻搅拌均匀,分出0.5kg作为试样 制备好的试样置于样品瓶中,密封,并标明标记 6.2试样保存 将试样于-18C以下保存 测定步骤 7.1提取 称取5g试样,精确到0.01g,置于50mL离心管中 准确加人20.0mL提取液(4.14),10ml三 氯甲婉(4.5),在混匀器上混合2min,混匀后于2000r/min下离心5min,上清液待净化 7.2净化 将储液器装在预洗好的C固相萃取柱(4.13)上 准确移取10.0mL上清液(7.1)于储液器中,使 溶液以1.5mL/min的流速通过C固相萃取柱 用10mL.水淋洗C固相萃取柱,在真空系70kPa的 负压下,负压抽干5min,再用4mlL叔丁基甲隧-正己熔混合溶液(4.15)淋洗固相萃取柱,负压抽干 5 nmin,弃去全部淋洗液 用10mL甲醉以1.5mL/ /nmin的流速洗脱链霉素和双氢链霉素于50mL离 心管中,用旋转燕发器于45C水浴上将其减压蒸发至干 准确加人1.0ml.庚婉磺酸钠溶液(4.l6)溶 心 解残渣,溶液过0.45Am的滤膜,供液相色谱测定 测定 液相色谱条件 silC5 色谱柱:Kromas n,250mmX4.6mm(内径),或相当者; a Am b 流动相:0.01mol/L.庚烧磺酸纳(4.16)十乙晴(77十23); 流速:1.0mL c /min; d 柱温;45C; 进样量:100L; e
GB/T21164一2007 f 荧光检测器:激发波长263nm,发射波长447nm. 7.3.2柱后衍生化条件 a)柱后衍生剂1:0.6mmol/L1,2-綦酣-4-碱酸钠(4.18),流速0.3ml/min; 柱后衍生剂2.0.2molL氢氧化钠(4.17),流速0.3ml/min: D e)衍生温度:50C 7.3.3 色谱测定 根据样品溶液中链霉素和双氢链霉素的残留量,选择峰面积相近的标准工作溶液 标准工作溶液 和样品溶液中链霉素和双氢链霉素的响应值均应在仪器测定的线性范围内 对标准工作溶液和样品溶 液等体积参插进样进行测定,在上述色谐条件下,链霉素的保留时间约为34.2min,双氢链霉素的保留 时间约为35.6min. 链霉素和双氢链霉素标准物质的色谱图见图A.1 空白试验 除不加人试样外,均按上述步骤进行 结果计算 结果用色谱数据处理机或按式(1)计算,计算结果需扣除空白值 Ae V X= 式中: -试样中链霉素双氢链霉素)的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); -样液中链霉素(双氢链霉素)的峰面积 -标准工作溶液中链霉素(双氢链霉素)浓度,单位为微克每毫升(g/ml); -样液定容体积,单位为毫升(mL); -标准溶液中链霉素(双氢链霉素)的峰面积; -最终样液代表的试样质量,单位为克(g) n 检测低限、回收率 检测低限 蜂王浆中链霉素的检测低限为0.020mg/kg,双氢链霉素的检测低限为0.080mg/kg 9.2 回收率 蜂王浆中娃霉素在举加水平0.00mw/Ax一0.im/ke其回收率范围为7.4%一3.0%,双复 链霉素在添加水平0.080mg/kg一0.400mg/kg,其回收率范围为80.4%~90.9%
GB/T21164一2007 附录 A 资料性附录 标准物质色谱图 LU1 181 16 12 店 15 2o 10 25 30 35 mim 链霉素和双氢链霉素标准物质液相色谱图