饲料中泰乐菌素的测定高效液相色谱法

饲料中泰乐菌素的测定高效液相色谱法

国家标准 GB/T30945一2014 饲料中泰乐菌素的测定 高效液相色谱法 Determinationoftylosininfeeds Highperformaneeliquidchromatography 2014-07-08发布 2015-01-08实施 国家质量监督检监检疫总局 发布 国家标准花管理委员会国家标准
GB/T30945一2014 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)归口 本标雅起草单位;农业部饲料质量监督检验测试中心(西安》. 本标准主要起草人:张眉、贾青、李会玲、冯西辉、王均良、郭洁、李胜
GB/T30945一2014 饲料中泰乐菌素的测定 高效液相色谱法 范围 本标准规定了以高效液相色谱(HPLC)仪测定饲料中泰乐菌素的方法 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中泰乐菌素的测定,本方法定量限 为1mg/kg 本标准不适用于添加尿素的饲料 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备 原理 试样中的泰乐菌素经二氧甲烧提取后,过滤,滤液经HLB小柱净化、浓缩注人高效液相色谱仪进 行分离,用紫外检测器检测,外标法定量 试剂和材料 除特殊说明外,所用试剂均为分析纯试剂.用水符合GB/T6682中一级用水的规定 4.1甲醇 4.2乙睛;色谱纯 4.3甲醇;色谱纯 4.4二氧甲婉 4.5正己烧 .6 氨水 7 乙睛溶液(50%)取乙睛(4.2)100ml与100ml水混合 4.8盐酸溶液(1mol/L);取9mL盐酸于100mL容量瓶中,用水稀释并定容 4.9泰乐菌素标准品;纯度>98% 4.100.005mol/儿磷酸二氢铵缓冲液;准确称取0.5751g磷酸二氢铵于1000mL容量瓶中,加水溶 解并定容,过0.454m滤膜 4.11淋洗液;含2%氨水5%甲醉的水溶液,吸取2ml氨水(4.65ml 甲醇(4.1),用水稀释至 100mL 4.12乙酸钠缓冲液(pH=5.5,0.15mol/1L):称取12.30g无水乙酸钠于1000mL量瓶中,加900mL
GB/T30945一2014 水,使溶解,用1mol/L的盐酸溶液(4.8)调节pH至5.5,用水定容 4.13HLB固相萃取小柱(200mg,3mL) 4.14泰乐菌素标准储备液:精密称定泰乐菌素标准品100mg(精确到0.01mg),于100mL容量瓶中 加人50%乙睛(4.7)溶液使溶解,并定容,该溶液浓度为lmg/ml置4C冰箱中保存,该溶液有效期为 个月 4.15泰乐菌素标准系列:分别吸取一定量的标准储备液(4.14),置于10ml容量瓶中,用乙睛(4.2)稀 释、定容,配制成浓度为0.5、l.0,2.0,5.010.0,25.04g/mL的标准工作液 仪器设备 5.1高效液相色谱仪(配紫外检测器) 5.2振荡器 5.3天平精度为0.0l【和0.00001g 5.4固相萃取装置 5.5超纯水处理器 5.6氮吹仪. 5.7 真空系 5.8高速离心机 5.9旋转蒸发仪 5.10真空抽滤装置 5.110,45Am微孔滤膜 试样的制备 按GB/T14699.1采集有代表性的样品,按GB/T20195进行样品制备 粉碎过0.45mm孔筛,混 合均勺,装人密闭容器,低温保存备用 分析步骤 7.1样品处理 7.1.1提取 准确称取2g一3g饲料样品(精确至0.01g).置于100mL具塞三角瓶中.加人25mL二氯甲娆 (4.4)于振荡器上振荡提取20min,用快速滤纸过滤,收集全部滤液于梨形瓶中,在45C下于旋转蒸发 仪上蒸干溶剂,加0.5mL甲醇(4.1)溶解残渣,再加人pH=5.5的乙酸钠缓冲溶液(4.12)4.5mL,轻轻 摇匀,将此溶液转人20mL离心管中,用少量乙酸钠缓冲溶液(4.12)冲洗梨形瓶.洗液合并人离心管 中 在离心管中加人5mL正己婉(4.5),轻轻摇动离心管,防止乳化.于4000r/min离心5min,使分 层,弃去正已炕层,下层水相层备用 7.1.2净化 HLB小柱固定在固相萃取装置上,依次用5ml.甲醉(4.3)和5mL超纯水活化柱子,将全部水相 1OasisHLB固相萃取小柱是由WatersCorperation(34MaplestreetMilfordMA.USA)提供的产品的商品名 称,给出这一信息是为了给本标准使用者提供方便,而不是标准主管部门对这一产品的认可
GB/T30945一2014 层加人小柱,让溶液自然流下,分别用5mL水和5mL淋洗液(4.11)淋洗,待淋洗液全部流出,抽干 HLB小柱中的液体,用5ml 甲醉(4.3)洗脱,收集洗脱液于试管中,在氮气流下吹干,用1mL乙脖 (4.2)溶解残渣,过0.45m滤膜,上机测定 7.2测定 7.2.1色谱条件 色谱条件如下: 流动相:乙睛:甲醇:0.005mol/几磷酸二氢铵(4.10)=50:35:15 a b 流速:0.6mL/min 柱温:25O c 检测器;紫外检测器 D 检测波长;290nm 色谱柱:symmetryshieldRP18,柱长250 ,内径3.9 ,或性能类似的色谱柱 mm mm 进样体积;20aL g 7.2.2定量测定 分别取样品试液(7.1.2)和相应浓度的泰乐菌素标准工作液(4.15)按7.2.1的条件进行分析,以外标 法做单点或多点校正,以保留时间定性,峰面积定量,泰乐菌素标准溶液的色谱图参见附录A 结果计算及表示 8.1结果计算 试样中泰乐菌素的含量(X)以质量分数(mg/kg)表示,按式(1)计算 P×cs×V×1000 X Ps×n1×l000 式中: 试样溶液中泰乐菌素的峰面积 标准溶液浓度,单位为微克每毫升(4g/mL.); Cs v 试样定容体积,单位为毫升(mL) P 标准溶液中泰乐菌素的峰面积 试样质量,单位为克(g) 1 8.2结果表示 测定结果用平行测定的算术平均值表示,计算结果保留3位有效数字 重复性 同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于10% 2)symmetryshiedRP18色谱柱是由WatersCorperation(34MaplestreetMilfordMA.USA)提供的产品的商品名 称,给出这一信息是为了给本标准使用者提供方便,而不是标准主管部门对这一产品的认可
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饲料中泰乐菌素的测定高效液相色谱法GB/T30945-2014

泰乐菌素是一种广泛应用于家禽、家畜等动物饲料中的抗生素，其在防治动物疾病方面起到了重要作用。但是，过量使用泰乐菌素会对人类健康造成潜在危害，因此需要对饲料中泰乐菌素进行监管和检测。

GB/T30945-2014标准规定了一种高效液相色谱法测定饲料中泰乐菌素的方法，其原理是利用色谱柱上固定的C18反相填料对样品中的泰乐菌素进行分离和定量。

具体操作步骤如下：

1. 样品制备：将饲料样品粉碎并筛选，取1g样品加入50ml离子交换水中，超声波处理30分钟，离心后取上清液备用。

2. 样品前处理：将上清液过滤并注入固相萃取柱中，在100%甲醇洗脱后，用氮气吹干萃取物并溶于0.1%乙酸乙腈水溶液中。

3. 色谱分析：将样品注入高效液相色谱仪中进行分析，采用C18反相色谱柱，流动相为0.1%乙酸乙腈水溶液/乙腈，梯度洗脱。检测波长为280nm。

通过对不同浓度的标准品进行测试，可以建立泰乐菌素的标准曲线，并根据实际样品的峰面积计算出其含量。

该方法具有灵敏度高、准确度好、回收率高等优点，在饲料中泰乐菌素的监督和检测方面具有重要意义。

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