食品中蔗糖的测定方法酶-比色法

食品中蔗糖的测定方法酶-比色法

国家标准 GB/T16286一1996 食品中蔗糖的测定方法 酶-比色法 Methodfordeterminationofsucroseinfood一 Enzyme-colorimmetricmethod 1996-04-10发布 1996-12-01实施 发布 国家技术监督国家标准

目 次 前言 范围 原理 试剂 仪器和设备 试样的制备 试液的制备 分析步骤 分析结果的表述 允许差 附录A(标准的附录B果糖苷酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶的技术要求、试验方法及 判定规则 -.

GB/T16286-1996 前 言 食品中蔗糖的测定方法,一般采用盐酸水解法 由于盐酸水解蔗糖过程中,还有其他糖类被水解为 还原糖,导致测定结果偏高 本标准采用的酶-比色法是在检索了近20年148篇国外文献的基础上,经 过反复实验、验证而制定的 由于酶法具有高度的专一性(B果糖背酶只能催化蔗糖转化为葡萄糖和果 糖),灵敏度高,操作简便,因此测定结果准确 蔗糖解后的产物- 葡萄糖的测定方法,与GB/T162851996保持一致 本标准的附录A是标准的附录 本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出并归口 本标准起草单位:农垦北方食品监测中心 本标准经全国食品工业标准化技术委员会秘书处审核 本标准主要起草人张宗城、刘宁,郝娅

国家标准 食品中蔗糖的测定方法 GB/T16286一1996 酶-比色法 ofsucroseinfood- Method fordetermination Enzyme-colorimetrcmethod 范围 本标准规定了用酶-比色法测定食品中蔗糖的方法 本标准适用于各类食品中蔗糖的测定 本标准最低检出限量为0.044g(蔗糖)/mL(试液》. 原理 在果糖苷酶(-FS)催化下,蔗糖被酶解为葡萄糖和果糖，葡萄糖氧化酶(GOD)在有氧条件下,催 化-D葡萄糖(葡萄糖水溶液状态)氧化,生成D葡萄糖酸-谷-内酯和过氧化氢 受过氧化物酶(POD)催 化,过氧化氢与4-氨基安替比林和苯盼生成红色服亚胺 在波长505nm处测定服亚胺的吸光度,计算 食品中蔗糖的含量 一S CH.O;+H,0 -.C,H.O,(G)+C,H.O,(F C,HO,(G)+0,CIH,O,+H,O. H,o,+CHOH+CH.,N,0c,H,NO+H,o 试剂 组合试剂盒 3.1 号瓶;内含队果糖苷酶(fruecosidae)400U(活力单位)柠檬酸、柠檬酸三钠， 2号瓶;内含0.2mo/儿磷酸盐缓冲液(pH=7.6)200mL,其中含4-氨基安替比林o.00154mol/L 号瓶;内含0.022mol/几苯盼溶液200mL， 3 4号瓶;内含葡萄糖氧化酶(glucoseoxidae)800U活力单位)、过氧化物酶(辣根,peroxidase) 2000U(活力单位). 1,2,3、4号瓶须在4C左右保存 3.2酶试剂溶液 3.2.1将1号瓶中的物质用重燕壤水溶解,使其体积为66mL,轻轻摇动(勿剧烈播动),使酶完全溶 解 此溶液即为果糖苷酶试剂,其中柠檬酸(缓冲溶液)浓度为0.1mol/L,pH=4.6.在4c左右保存， 有效期一个月 3.2.2将2号瓶与3号瓶中的溶液充分混合 32.3将4号瓶中的酶溶解在3.2.2混合液中,轻轻播动<勿剧烈摇动),使酶完全溶解,即为葡萄糖氧 化酶-过氧化物酶试剂溶液 在4c左右保存,有效期一个月 国家技术监督局1996-04-10批准 1996-12-01实施
GB/T16286-1996 3.30.085mol/儿亚铁肃化钾溶液 称取3.7g亚铁紊化钾[K.Fe(CN),3Ho,GB1273,分析纯],溶于100mL重蒸馆水中,摇匀 340.25mal/L硫酸锌溶液 称取7.7g硫酸锌(ZnsO7H,O,GB666,分析纯),溶于100mL重燕僧水中,摇匀 3.50.1mal/儿氢氧化钠溶液 称取0.4g氢氧化钠(GB629,分析纯)溶于100mL重蒸傻水中,摇匀 3.6蔗糖标准溶液 称取经100士2C烘烤2h的蔗糖(HG3--1001,分析纯)0.4000段,溶于重燕水中,定容至 00mL,摇匀 将此溶液用重燕傻水稀释va 一-Vo0,即为4004g/mL蔗糖标准溶液 仪器和设备 实验室常规仪器及下列各项 41研钵或粉碎机 42分析怖 43组织捣碎机 4.4恒温水裕锅 45可见光分光光度计 4.6教放移液管,.00L.精度0.0mL 试样的制备 5.1固体样品 粉末状样品;取有代表性的样品至少200g,充分混匀,置于密闭的玻璃容器内 颗粒状样品:取有代表性的样品至少200g,用粉碎机粉碎,或用研钵研细,通过100目分析筛,置于 密闭的玻璃容器内 新鲜水果,蔬菜等固体样品;取有代表性的可食部分至少200g,用组织捣碎机捣碎,置于密闭的玻 璃容器内 5.2糊状样品 取有代表性的样品至少200g,充分混匀,置于密闭的玻璃容器内 53固液体样品 取有代表性的样品至少200g,用组织捣碎机捣碎,置于密闭的玻璃容器内 5.4液体样品 取有代表性的样品至少200g,充分混匀,置于密闭的玻璃容器内 试液的制备 61不含蛋白质的试样 用100mL烧杯称取试样(6.1一5.4)0.5一10g(精确至Q.0001g),加少量重燕憎水,转移到 250mL容量瓶中,用重蒸痛水定容至刻度,摇匀后用快速递纸过速.弃去最初的滤液30mL,即为试液 试液中蔗糖含量大于20004g/mL时,应适当增加定容体积 6.2含蛋白质的试样 用100mL烧杯称取试样(5.15.4)0.5 10&(精确至0.0001g),加少量重燕僧水,转移到 250mL容量瓶中,加人Q.085nmol/儿亚铁氟化娜溶液(3.3)5mL0.25mol几硫酸锌溶液(3.4)5mL和 o.1nmol/儿氢氧化纳溶液(a.5)10mL,使蛋白质沉淀 用重燕溜水定容至刻度,摇匀后用快速谜纸过逮 弃去最初滤液30mL,即为试液
GB/16286一1996 试液中蔗糖含量大于20004g/mL时,应适当增加定容体积. 分析步骤 7.1标准曲线的绘制 用微量移液管取0.00,0.20,0.40,0.80,0.80,.00L蔗糖标准溶液(3.,分别置于10L比色 管中,各加入1.0mLp果糖苷酶试剂溶液(3.2.1),播匀,在36士1c水浴锅中恒温20min.取出后加入 3mL葡萄糖氧化酶-过氧化物酶试剂溶液(3.2.3),在36士1C水浴锅中恒温40min 冷却至室温,用重 蒸僧水定容至10mL 用1cm比色皿,以蔗糖标准溶液含量为a.00的试剂溶液调整分光光度计的零 点,在波长s05nm处渊定各比色管内溶彼的吸光度 以蔗糖含量为纵坐标,吸光度为横坐标,绘制标准曲线 7.2试液吸光度的测定 用傲量移液瞥取0.20一5.00mL(依试液中蔗糖的含量而定)试液(G.1一6.2),置于10mL比色管 中 以下按7.1步骤操作;但须用等量试液(G.1一6.2)调整分光光度计零点 测出试液吸光度后,在标准曲线上查出对应的蔗糖含量 分析结果的表述 8 食品中蔗糖的含量以质量百分率表示,按式(1)计算; X= X X100= T0001000 " m× m×一×10000 式中;X-样品中蔗糖的含量,质量百分率,%; C -标准曲线上查出的试液中蔗糖含量，4g" -试样的质量,g; m V -试液的定容体积,mL -测定时吸取试液的体积,mL 计算结果精确至小数点后第二位 允许差 同一样品的两次测定值之差,不得超过两次测定平均值的5.0%
GB/T16286一1996 附 录 标准的附录 B果糖苷辞、葡萄糖躯化砖、过额化物酶的技术要求、试验方法及判定规则 A1技术指标 A1.1酶活力 B果糖苷陕酶活力(U/mg):>100; 葡梵糖氧化酶酶活力(U/mg):>20; 过洱化物酶酶活力(U/mg):>50 A1.2千扰 B果糖苷酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶都不得含有纤维素酶、淀粉葡萄糖苷酶、半乳糖苷酶和过氧 化氢酶 A2试验方法 用微量移液管吸取Q.50mL蔗糖标准溶液(3.6),置于10mL比色管中,加入100烟乳糖(HG3- 1000,分析纯)100可溶性淀粉(HGB3095,分析纯>和100纤维二糖(生化纯),再加入1.0mLp 果着苷槲试剂擦液a2).以下按下1步深操作 测定吸光度后,在标帷曲线7.)上查出对应的旅指 含景,按式(A1)计算蔗糖的回收率; R= ×100 (A1 0.5406 式中，R蔗糖的回收率,% 蔗糖的实测值,4g A3判定规则 测得蔗精的回收率,如在95%~105%范围内,则判定卜果糖甘酶、葡萄精氧化酶和过氧化物酶符 合技术要求
-1996《食品中蔗糖的测定方法 GB/T16286一 酶-比色法》第1号修改单 本修改单业经国家技术监督局于1997年9月11日以技监国标函[1997]第200号文批准，自 1998年1月1日起实施 、3.1条第3行中的“pH-7.6)”更改为“pH-7.0)” 二、7.2条改用新条文: 试液吸光度的测定 “7.2 用微量移液管取(0.20~5.00)mL依试液中蔗糖的含量而定)试液(6.1~6.2),置于10ml比色 管中 以下按7.1步骤操作;但须用等量试液(6.1~6.2)调整分光光虔计零点,操作步骤如下 取等量试液(6.16.2)加人3tmL，葡萄糖氧化酶过氧化物酶试剂溶液(3.2.3),摇匀,在(36士1)C 水浴锅中恒温40min 冷却至室温,用重燕僧水定容至10mL 用此溶液调整分光光度计零点 测出试液吸光度后,在标准曲线上查出对应的蔗糖含量 ”
家标准 国 食品中蔗糖的测定方法 磷-比色法 GB/T16286一1996 标准出版社出版发行 北京西城区复兴门外三里河北街I6号 邮政编码 100M5 http://www.bzcbs.com 电话 63787337、63787447 1996年10月第一版2005年1月电子版制作 书号:1550661-12953 版权专有侵权必究 GB/T16286-1996 举报电话:010)68533533