转基因产品检测抽样和制样方法

转基因产品检测抽样和制样方法

国家标准 GB/T19495.7一2004 转基因产品检测抽样和制样方法 Detecetionofgeneticallymodifiedorganismmsandderivedproducts Methodsforsamplingandsamplepreparationm 2004-04-13发布 2004-04-13实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 中 国国家标准化管委员会国家标准
GB/T19495.7一2004 前 言 GB/T19495(《转基因产品检测》为系列标准: GB/T19495.1一2004转基因产品检测通用要求和定义 2 GB/T19495. 2004转基因产品检测实验室技术要求; GB/T19495.3一2004转基因产品检测核酸提取纯化方法; GB/T19495.4一2004转基因产品检测核酸定性PCR检测方法; GB/T19495.5一2004转基因产品检测核酸定量PCR检测方法; GB/T19495.6一2004转基因产品检测基因芯片检测方法; GB/T19495.7一2004 转基因产品检测抽样和制样方法; GB/T19495.82004 蛋白质检测方法 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本部分由质量监督检验检疫总局批准发布 本部分主要起草单位;辽宁出人境检验检疫局 本部分参与起草单位质量监督检验检疫总局动植物检疫实验所、黑龙江出人境检 验检疫局、广东出人境检验检疫局、深圳出人境检验检疫局、中华人民 共和国上海出人境检验检疫局,华南农业大学,山东农科院植保所 本部分主要起草人;曹际娟、郑江、于凤风琴、彭金火、陈红运、朱水芳、奕凤侠、翠文、杨伟东、潘良文、 穆虹、陆兴波 本部分系首次发布的国家标准
GB/T19495.7一2004 转基因产品检测抽样和制样方法 范围 GB/T19495的本部分规定了植物及其产品中转基因产品检测的抽样和制样方法 本部分适用于为检测转基因产品而进行的植物及其产品的抽样和制样 规范性引用文件 下列文件中的条款通过GB/T19495的本部分的引用而成为本部分的条款 凡是注日期的引用文 件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分,然而,鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本 部分 GB/T19495.12004转基因产品检测通用要求和定义 GB/T19495. 2 -2004转基因产品检测实验室技术要求 GB/T19495.3一2004转基因产品检测核酸提取纯化方法 术语和定义 下列术语和定义适用于GB/T19495的本部分 3.1 交付批 consignmment -次提交发运或接收的植物或植物产品,它可又由一批或多批组成 3.2 检验批、批lot 成分和产地等均相同的一系列单位产品,构成交付批的一部分 在本部分中,指转基因产品检测的 取样单位 3.3 单位产品item;unit 为实施取样而对产品划分的基本单位 它是实际存在的植物或植物产品个体,如一株植物、一粒种 子等 均匀批homogenouslot 待检测的转基因成分遵循一定的概率规律在该批植物或植物产品中呈均匀分布的批 3.5 不均匀批heterogeouslot 相对于均匀批而给出的术语,不均匀指待检测的转基因成分在该批植物或植物产品中分布不均匀 3.6 散装货物blkmaterials 在本部分中,指不具有明确实际分装的散料,例如一船无包装的粮食、一车无包装的植物油脂等 3 批量lotsize -批植物或植物产品的量,它等于交付批的质量除以交付批含有的批数
GB/T19495.7一2004 3.8 份样inerement 从单个取样点一次抽取的少量植物或植物产品 对同批植物或植物产品而言,从不同点抽取的份 样 -般应具有接近的量 3.9 原始样品bulksample 取自同一批的份样,经过混合而得到的一定数量样品 实验室样品、平均样品laboratorysample 由原始样品经过混合,缩分得到的一定数量样品 用于制备试样和存查样品 3.11 试样,分析样品testsample,analytiealsample 由全部或部分实验室样品经进一步均匀化得到的用于分析或测试的样品 3.12 存查样品 restoresample 从实验室样品中分取的用于备查的一定数量样品 3. 13 转基因限量水平aceeptableGoqualitylevel 抽样验收时,规定的交付批中含有转基因产品的可接受量，一般使用质量百分含量表示 总则 -般规定 4.1 .1.1抽取及制备的样品应具有代表性 44 4.1.2应确保抽样器具清洁、干燥、无异味,抽样、制样器具及样品容器所用材质不应对待抽取样品造 成污染 4.1.3为避免交叉污染,尽可能使用不同的抽样和制样器具或设备抽取和制备不同交付批的样品,盛 装样品的容器或包装应尽可能一次性使用 如果不能做到(例如使用机械取样设备时),则应在抽取和 制备一个交付批的样品后使用适当方法清洁所有器具和设备 在所有抽样过程中应避免样品散落,防止有活性的生物污染生态环境 应在物理隔离的区域制备样品,防止对其他区域或实验室的污染,并应及时清洁制样区域 必要时使用DNA销毁剂处理抽样和制样器具和设备、样品容器及制样区域 适用时,应参照GB/T19495.1一2004中的规定防止污染 4.1.4抽样时应注意保护样品,抽样器具和样品容器应存放于清洁的环境中,避免雨水和灰尘等外来 物引起的污染 4.1.5所有抽样操作应在尽可能短的时间内完成,避免样品的组成发生变化 如果某一抽样步骤需要 很长时间,则样品应存放于密闭容器中 4.2分批 首先应按照交付批中同一合同,同一生产批号,同一品种,等级分批 交付批量小于10000t时,最 大批量为500t 交付批量大于10000t时,以10000t划分20批为基数,每超过1000t,增加1批,不 足1000t,按1批计 用交付批量除以批数为批量 例如,600t的交付批分成2批,批量为300t;13200t的交付批分成 24批,批量为550t
GB/T19495.7一2004 抽样、制样工具和设备 根据待抽取样品的特性,采用符合4.1要求的抽样、制样器具和设备 抽取固体样品时,抽样器具 或设备的进料口尺寸应大于待抽取样品95%通过粒度的3倍 抽样数量 本部分所规定的抽样数量仅限于转基因产品检测,得到的样品一般不用于其他测试项目 当应分 用样品时,应视情况增加抽样数量 6.1给出了通常情况下的原始样品最小数量,加工产品的原始样品最小数量按照6.2的规定换算 当不存在转基因限量水平时，一般按转基因限量水平为1%确定原始样品的最小数量 单位产品较大 时,例如马铃薯、南瓜、椰子、甜菜等,或颗粒数不能达到6.1给出的最小数量时,应按6.3的规定确定原 始样品的最小数量 应根据转基因限量水平确定每批中应抽取的原始样品最小数量 通常情况下,每批份样数对均匀批不得低于50个,对不均匀批不得低于100个,按原始样品最小数 量和份样数确定份样量,但份样量不得低于6,4中给出的最小份样量;对于加工产品,每批最小份样数 不得低于10个,最小份样量可按原始样品最小质量和份样数确定 原始样品最小数量 通常情况下,原始样品至少应含有表1所给定的单位产品数 表1组成原始样品的最少颗粒数 应抽取的最少颗粒数 转基因限量水平%) 不均匀批 均匀批 0.1 1600000 560000 800000 0.2 280000 0.5 320000 112000 60000 56000 107000 38000 l.5 80000 28000 32000 12000 10 16000 6000 相应地,可根据不同品种植物或植物产品的籽粒平均质量计算原始样品的最小质量 表2给出了 转基因限量水平为1%时几种谷物和油料种子的原始样品最小质量的参考值 表2几种谷物和油料种子的原始样品最小质量 原始样品最小质量/g 植物 粒重/mg 60000粒(不均匀批) 56000粒(均匀批 大麦 37 5920 2072 285 45600 1596o 玉米 32 5 120 1 792 燕麦 油菜 640 224 水稻 21 4320 1512
GB/T19495.7一2004 表2(续 原始样品最小质量/E 植物 粒重/mg 160000粒(不均匀批) 56000粒(均匀批 大豆 200 32000 11200 小麦 37 5920 2072 6.2加工产品 应满足以下换算原则将加工产品换算成其原料时,其最少颗粒数或最小质量应满足表1或表2的 规定 由于加工过程通常具有均匀化的作用,所以一般选择均匀批所对应的最小数量 例如,当转基因 限量水平为1%时,由玉米和大豆加工得到的部分产品的原始样品最小质量可参照表3计算 表3加工产品的原始样品最小质量 产品 油 蛋白质 多糖(淀粉 卵磷脂 玉米 3.8% 606g 8.5% 1357g 61% 9736g 大豆 18% 2016g 34% 3808g 1.8% 202g 注;“%”指加工产品在原料中的质量百分比,如玉米种子中玉米油含量为3.8% 用1%转基因限量水平下均匀 批玉米的原始样品最小质量15960只乘以3.8%得到玉米油原始样品的最小质量606g 6.3单位产品较大的货物及小批量货物 单位产品较大的货物和小批量货物一般无法达到6.1中所规定的最小单位产品数,可按表4规定 的原始样品最小数量抽样 表4单位产品较大的货物及小批量货物的原始样品最小数量 批中包含的单位产品数 原始样品中包含的最小单位产品数 250以下 10" 251400 20 401650 25 6511000 32 1001~1500 40 15012500 25014000 56 4001一6500 8o 650110000 125 10001~15000 150 1500125000 180 25000以上 220 注;“n”表示当批中包含的单位产品数小于10时,应从全部单位产品中抽取样品 该表是以转基因限量水平为 0.5%时使用方风险不超过20%为依据选取的,当这一风险不被接受或转基因限量水平低于0.5时,适当抛 高原始样品中包含的最小单位产品数 最小份样量 表5给出了按货物类别划分的最小份样量
GB/T19495.7一2004 表5最小份样量 最小份样量 货物类别 中粒和大粒固体 0.5kg 小粒固体 0.2kg 植株 单株样品 单位产品较大 1个单位产品 抽样方法 散装货物抽样 7.1.1货物流动过程中抽样 只要可能,应在货物流动过程中抽样,例如在货物装卸过程中抽样 应按批量和货物的流动速度确定抽样间隔,从第1个间隔内随机选取一点抽取第1个份样,并从这 -点开始按照固定的抽样间隔抽取份样 抽取固体样品时,采用的机械取样设备应能在较宽的范围内调整份样量和抽样频率,并利于检查和 清洗 应使所有货物都有相同的机会进人机械取样器的取样装置 手工抽样时,应按照预先确定的抽 样间隔,从装卸货物时露出的新断面或停止的传送带上抽取份样 当从停止的传送带上抽样时,应抽取 全带宽样品 当抽取货物新断面上的样品时,应交替抽取其上部,中部和下部的货物 当从液体输送管道中抽样时,应按照预先确定的抽样间隔抽取份样,抽样前应先使用待抽样货物清 洗样品容器 7.1.2从货车,船舱,筒仓和货柜等载货容器中抽样 应对每个载货容器抽取样品 按照载货容器中所载货物量及批量计算每个载货容器中应抽取的份 样数 抽取固体样品时,应在载货容器内均匀布点抽样 如果可能,在每个抽样点抽取整个深度的样品 当无法抽取整个深度的样品时,应采用分层抽样法或在装卸过程中采用7.1.1中的方法抽样 当采用 分层抽样法抽样时,将载货容器至少分成3层,当载货容器中所载货物量大于3倍批量时,应按批量分 层 先在货物的初始表面均匀布点抽取份样,待货物装卸到中层和下层时,再分别在露出的表面均匀布 点抽取份样 抽取液体样品时,按表6所示的比例在载货容器的上中下三层抽取样品 表6不同形状液舱的取样部位和比例 上层 中层 下层 容器形状 液层下面20cm处) (液层中部) 距舱底或油水界面20cm处 直立式舱池 倒梯形舱池 圆底舱池 卧式油槽车 7.1.3从货堆中抽样 按照货堆的货物量、批量确定份样数,按7.1.2要求采用斜线法或正弦曲线法在货堆上布点或分层 布点抽取份样 包装货物抽样 应从包装的不同部位如顶部,中部和下部抽取样品,按表7确定抽样件数
GB/T19495.7一2004 表7包装货物抽样件数的确定 -批货物的总包装件数/袋 应抽取包装件数 0以下 逐袋抽样 10~100 随机抽取10袋 100以上 按总袋数的平方根抽取(取整数,小数部分向上修约) 货物经常具有外包装,并在其中装有一定数量的小包装 这时,表7中的包装指外包装,应交替地 从每个选取的外包装的不同位置(例如顶部、中部和下部或左、中、右)抽取数量一致的小包装样品 当所抽取的外包装或小包装中装有超过表5所列最小份样量的货物时,从这些包装中抽取不少于 最小份样量的整数个包装货物作为份样;否则,应从相邻位置抽取多个包装中的货物作为份样 抽取包装液体货物的样品时,可按上述方法选取抽样件数 如果可能,抽样前应将液体货物摇匀. 再将所需量的倾人样品容器作为份样 否则,应根据包装的形状参照表6中的抽样部位和比例抽取份 样或抽取全深度样品 制样方法 8.1一般规定 除非另有约定,本部分涉及的制样过程一般包括混合足够量的份样组成原始样品,缩分原始样品得 到实验室样品,使用适当方法制备存查样品及对实验室样品进行适当的均匀化和降低其粒度来获得 试样 应按批分别制备实验室样品,试样及存查样品 制样中防止污染的措施按照GB/T19495.2一2004中的规定执行 8.2构成原始样品 可将抽取的份样混合在一起构成原始样品 如果一次构成的原始样品量较大,可将份样分成质量一致的几组;对份样进行分组时,尽可能避兔 将连续抽取的份样分在一组中 分别采用8.4中的方法先缩分同样次数后,将得到的缩分样品混合成 原始样品 缩分的次数应使得到的原始样品不低于实验室样品量的4倍 8.3样品的初步处理 制备样品前,如需要对抽取的样品进行必要的初步处理,例如去皮(壳,除水,除油等,应记录初步 处理前后样品质量的变化 可参照GB/T19495.32004中的规定执行 8.4破碎、研磨和缩分 破碎和研磨 破碎和研磨时,应采用对样品不产生污染的设备 将样品导人破碎或研磨设备前,应预先使用少量样品清洗设备 破碎和研磨过程中应调整设备的 操作参数,避免过热并防止样品粘连 8.4.2缩分 可采用分样器缩分法、四分法和点取法等方法缩分样品 当按6.1和.2的要求抽取样品或对按 6.3要求抽取的样品进行缩分时,应保证得到的缩分样品的质量不低于表8中列明的相对于样品95% 通过粒度的最低缩分样品留量 当95%通过粒度大于22.4mm时,需将全部样品破碚至22.4mm以 下方可进一步缩分;当转基因限量水平低于1%时,宜适当增加缩分样品的最低留量
GB/T19495.7一2004 表8不同粒度下的缩分样品最低留量 缩分样品最低留量/kg 95%通过粒度/mm 15 20一22.4 10 10一20 51o 1 5 2 5 0.5 12 0.2 0,51 0.1 <0,5 0.05 8. 5 实验室样品的制备 通过必要的混合和缩分,将原始样品制备成实验室样品 当按照6.1和6.2的要求抽取样品时,实 验室样晶的最小数为表1.表2或表3中原始样晶最小数量的十六分之-;当按6.3的要求抽取样品 时,将原始样品作为实验室样品 制备液体实验室样品时将抽取的份样混合构成原始样品,充分搅拌 或摇匀后分装于适当规格的样品容器中得到实验室样品 8.6存查样品的制备 除非另有约定,由实验室样品经一次缩分得到存查样品,该次缩分得到的另一半样品用于试样的 制备 8.7 试样的制备 将实验室样品经必要的,研磨后缩分成试样 试样的最低留量为50g 样品的盛装、标识和运送 样品的盛装 应采用容量、规格适宜的容器或包装袋盛装抽取的样品并密封,根据样品特性在适当条件下保存 应防止任何外来杂质污染样品,并防止日晒,雨淋 9.2样品的标识 9.2.1抽取的样品应及时加贴唯一的标签,标签内容应包括样品编号货物名称、,品种或批号,抽样时 间、抽样人及其他任何必要的信息 9.2.2与样品直接接触的标签必须防潮(尤其对于含水量较高或需冷藏或冷冻保存的样品),书写的内 容应是不可擦除的,以免有关信息丢失 9.3运送 实验室样品应在尽可能短的时间内传递和运送,运送的环境条件应根据样品性质确定 对有特殊 要求的样品如需冷藏的样品),必须控制相应的环境条件以避免样品发生物理和化学变化 对于无特 殊要求的样品,也应在避光、干燥条件下保存和运送 10 抽样报告 抽样报告应真实地反映现场抽样工作过程和货物状况,抽样报告中至少应包括以下内容: 货物名称; 货物包装形式和包装状况,标记情况 交付批数量或质量; 分批方法及批量 -抽样方法,包括抽样件数或个数、份样量等
GB/T19495.7一2004 样品编号 抽样时间 抽样现场的环境状态及现场检验情况 抽样人的标识 任何发现的异常情况 必要时,抽样报告中还应附以实物、样本、照片或有关方面的书面认证材料 11存查样品 11.1存查样品的保存条件 存查样品的保存条件应依据样品特性确定,为避免样品发生理化变化以及交叉污染，一般将存查样 品密封保存于4C或一20c 11.2存查样品的保存期限 存查样品的保存期限按照GB/T19495.1一2004中的规定执行 11.3存查样品的处理 存查样品应经适当处理后才能丢弃 对于检测为阳性的植物种子和苗木必须使其灭活后销毁,以 免泄露而污染生态环境 12 健康和安全 在不清洁的环境中抽样时,应注意使用适当的保护措施 由于谷粒内含的气体及真菌代谢,筒仓中的空气有可能使人室息或中毒 在货柜、简仓,船舱等所 装载的谷物上行走是危险的 在货物流动过程中抽样,特别是从停止的传送带上手工抽样时具有明显的危险性 应制定并实施 相应的管理制度并采取必要的防护措施