GB/T40643-2021
山楂叶提取物中金丝桃苷的检测高效液相色谱法
Determinationofhyperosideinextractofcrataeguspinnatifidaleaf—HPLC
- 中国标准分类号（CCS）B04
- 国际标准分类号（ICS）65.020.01
- 实施日期2022-05-01
- 文件格式PDF
- 文本页数6页
- 文件大小523.71KB
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山楂叶提取物中金丝桃苷的检测高效液相色谱法
国家标准 GB/T40643一2021 山楂叶提取物中金丝桃苷的检测 高效液相色谱法 Determinationofhyperosideinextracloferataeguspmnatiidaleaf HPLC 2021-10-11发布 2022-05-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标涯花管理委员会国家标准
GB/40643一2021 前 言 本文件按照GB/T1.1一2020<标准化工作导则第1部分;标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草
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本文件主要起草人;雷建都,席兴军,刘静、王璐莹、王晓晓、杨志花龚启宙、张敬轩、刘铁兵,辛秀兰、 赵新颖、邸多隆、裴栋、李文君、兰韬、陈亮、刘凤松、孙红梅
GB/T40643一2021 山楂叶提取物中金丝桃苷的检测 高效液相色谱法 范围 本文件描述了利用高效液相色谱法测定山楂叶提取物中金丝桃苷的原理、仪器与设备、试剂与材 料、检测方法、结果计算与表示,重复性、精密度和加标回收率
本文件适用于山楂叶提取物中金丝桃昔含量的测定
规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义
原理 在同一个分析周期内,按一定时间程序调节流动相配比使山楂叶提取物的关键组分按各自适宜的 容量因子达到良好的分离目的
采用金丝桃苷对应的标准物质外标法直接定量,采用的色谱柱为反相C18柱
金丝桃苷的紫外光 谱测定表明其最大吸收波长为360nm,因此选定360nm作为金丝桃苷的高效液相色谱检测波长
5 试剂与材料 除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682一级的水
5.1试剂 5.1.1甲醉(CH.,OH),色谱纯 5.1.2冰乙酸(CH.c0oH). 5.2标准品 金丝桃苷标准品;纯度>98%
5.3金丝桃苷标准储备溶液 称取200mg(精确至0.001g)金丝桃苷标准品于100ml棕色容量瓶中,甲醇使其溶解并定容至
GB/T40643一2021 刻度线,混匀
5.4金丝桃苷标准工作溶液 将金丝桃苷标准储备溶液用甲醇稀释制备一系列标准溶液,标准液浓度分别为0.02mg/mL 0.04mg/mL,0.10mg/mlL,0.20mg/ml,0.40mg/mL,0.60mg/mLl.0mg/mL,临用时配制
5.5材料 滤膜,孔径0.454m有机相滤膜
仪器与设备 6.1分析天平;灵敏度为万分之一克
6.2超声波清洗器;超声频率40kHz,功率300w
6.3高效液相色谐仪;包含梯度洗脱、紫外检测器及色谱工作站
检测方法 7.1样品处理 称取干燥的山楂叶提取物样品0.100g精确至0.001g),加甲醇适量,超声辅助溶解10nmin30nmin 转移至50mL容量瓶中,待恢复至室温后定容至刻度,摇匀,用0.,45m有机相滤膜微滤,然后进行HPLc 分析
7.2测定条件 按照制造商操作手册运行高效液相色谱仪
以下分析条件可供参考,采用其他条件应验证其适 用性
色谐条件如下 色谱柱;RPC18[250mm×4.6mm(内径),54m] 流速:l.0ml/min; 柱温:30C; 进样量:l0l; 检测波长;360nm; -流动相A.0.5%冰乙酸水溶液,B
甲醇; 梯度洗脱条件见表！
金丝桃苷的梯度洗脱条件 时间/min 0.5%冰乙酸水溶液(A/% 甲醇(B)/% 8o 20 15 43 57 25 45 55 35 25 75 45 100 55 100
GB/T40643一2021 7.3标准曲线制作 按7.2色谱条件检测,分别吸取10L标准工作溶液注人高效液相色谱仪,以色谱峰的峰面积为纵 坐标,对应的溶液浓度为横坐标,进行线性回归分析,得到标准曲线方程
金丝桃苷标准品的HPLC色谱图参见附录A
7.4试样测定 按7.2的色谱条件,取7.1步骤中的样品进样,得到试样溶液的峰面积,根据保留时间和金丝桃苷标 准品色谱图定性
从标准曲线上查得试样溶液中金丝桃苷的含量
试样溶液中金丝桃苷的响应值应在标准曲线的线性范围内,超过线性范围则应将提取液稀释后测 定或增加提取物的质量重新检测
结果计算与表示 8.1结果计算 山楂叶提取物中金丝桃苷含量按式(1)进行计算 X 式中: 样品中金丝桃肯的含量,单位为毫克每克(mg/g) X 样品中金丝桃苷的浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL> -最终定容后样品的体积.单位为毫升(mL) 试样的质量,单位为克(g)
m 8.2结果表示 计算结果以重复条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,保留至小数点后两位有效 数字
重复性 9 在重复条件下获得的5次独立测定结果的相对标准偏差小于5%
10 精密度 取同一试样,连续进样5次,按7.2的色谱条件检测其HPLC图谱;比较金丝桃苷对应色谱峰的峰 面积.5次进样的峰面积的相对标准偏差(RSD)不超过5%
加标回收率 标准品添加量在待测样品浓度0.51.5倍浓度范围内,加标回收率应在90%110%之间,相对标 准偏差应小于10%
GB/T40643一2021 附 录 A 资料性 色谱图示例 金丝桃昔标准样品及提取液色谱图示例见图A.1和图A.2
其中,峰1为金丝桃背
1800- 1600 400 200 00 80o 600 400 200 10 40 50 20 30 1/min 图A.1金丝桃苷标准品的色谱图 20” 15- 10 30 40 50 /min 山楂叶提取物样品的色谱图 图A.2
高效液相色谱法检测山楂叶提取物中金丝桃苷（GB/T40643-2021）
山楂叶提取物中金丝桃苷是一种黄酮类化合物，具有多种药理学活性。因此，快速、准确地检测山楂叶提取物中金丝桃苷含量对于保证其质量并开发新型山楂叶药物具有重要意义。
GB/T40643-2021标准规定了高效液相色谱法检测山楂叶提取物中金丝桃苷的方法。该方法主要包括以下步骤：
1. 样品的制备：将山楂叶提取物粉末称取一定量，用甲醇超声提取，离心并过滤，最后调整pH值。
2. 色谱条件设置：采用高效液相色谱仪进行检测，使用C18反相色谱柱，以甲醇和水为流动相，梯度洗脱。检测波长为360nm。
3. 标准曲线绘制：根据标准品金丝桃苷的不同浓度进行测试，得到峰面积与质量浓度的相关性，从而建立标准曲线。
4. 样品检测：将样品注入色谱仪中进行检测，根据标准曲线计算出其金丝桃苷的含量。
通过该方法检测，可以快速、准确地确定山楂叶提取物中金丝桃苷的含量，保证了其质量和有效成分的含量。同时，这种方法还可以应用于其他天然药材中黄酮类化合物的检测，具有广泛的应用前景。
