蜂蜜中19种喹诺酮类药物残留量的测定方法液相色谱-质谱/质谱法

蜂蜜中19种喹诺酮类药物残留量的测定方法液相色谱-质谱/质谱法

国家标准 GB/T23412一2009 蜂蜜中19种憧诺酮类药物残留量的 测定方法液相色谱-质谱/质谱法 Determinationofresiduesof19quinolonesinhoney LC-MS/MSmethod 2009-03-28发布 2009-07-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T23412一2009 前 言 本标准的附录A,附录B附录C和附录D为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口 本标准起草单位;江苏出人境检验检疫局 本标准主要起草人:沈崇钮、陈惠兰、丁涛、张晓燕、刘艳、张婧、黄娟、蒋原、陶宏锦、沈东旭
GB/T23412一2009 蜂蜜中19种呸诺酮类药物残留量的 测定方法液相色谱-质谱/质谱法 范围 本标准规定了蜂蜜中恩诺沙星简称ENR,下同,环丙沙星简称CIP,下同,诺氟沙星简称 NOR,下同),氧氟沙星(简称OFL,下同),双氟沙星简称DIF,下同,嗯呤酸(简称OXO,下同、氟甲 唾(简称FIU,下同),沙拉沙星简称SAR,下同,司帕沙星简称SPA,下同),丹氟沙星简称DAN, 下同),氟罗沙星(简称FLE,下同),马波沙星(简称MAR,下同),伊诺沙星简称ENO,下同,奥比沙 星(简称ORB,下同),毗哌酸(简称PIP,下同),培氟沙星简称PEF,下同,洛美沙星简称LOM,下 同),西诺沙星(简称CIN,下同)和綦畦酸简称NAL,下同19种诺酮残留量的液相色谱-质谱/质谱 的测定方法 上述19种呤诺酮类药物中英文名称、结构式、CAs号和相对分子质量参见附录A 本标准适用于蜂蜜中呸诺酮类残留量的测定 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008,IsO3696;1987,MOD) 方法提要 试样加人内标后,氢氧化钠溶液溶解蜂蜜样品,离子化的唾诺酮类残留物经过阴离子交换固相萃取 柱富集净化用液相色谱-质谱/质谱法测定,梯度洗脱,内标法定量 试剂和材料 除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水 4.1甲醇;HPLC级 4.2氢氧化纳 4.3甲酸(85% 4.4阴离子交换柱(PAx).60mg,3mL,或相当者 4.5同位素内标;NOoR-D;纯度>98% 4.6ENR,CIP,NOR,OFL、,DIF HC、sAR Hcl、SPA,DAN,OXO、FLU、FLE、MAR、ENo.ORB PIP、PEF、IOM、CIN和NAL标准品:纯度99% 呤诺酮类标准储备溶液;1mg/mL 准确称取适量的唯诺朋类标准品(L.6),用甲醉(4.l)配成 1.Omg/mL的标准储备液 储备液贮存在4C冰箱中,可保存6个月 爪代诺叙沙星(NoR-D)内标储备溶液.l00p&/ml 称取适量的NoR-D内标物(4.5),用甲醉 4.1)配成100"g/mL储备液,储备液贮存在4C冰箱中 尔代诺氟沙星(NoR-D.)内标工作溶液;lg/ml 取适量内标储备液(48)用甲醇(4.1)稀释成 /ml工作溶液,内标工作溶液在4C保存 4g 4.10瞪诺酮类标准工作浴液;用甲醉-水(2十8,体积比)分别配成浓度范围为1ng/ml 60 ng/mL标
GB/T23412一2009 准工作溶液,其中内标溶液浓度为50ng/mL,现配 4.11氢氧化钠溶液(0.1mol/L);取4g氢氧化钠,溶解于1L水中 4.12甲酸-甲醇溶液(5十95,体积比);取5ml甲酸(4.3),溶解于95ml甲醉(4.l)中 甲醇-水(2十8,体积比);量取20ml甲醇(4.1)于80ml水中,混合均匀 仪器和设备 5.1液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾离子源 5.2分析天平:感量0.01g和0.1mg各一台 5.3旋转蒸发仪 5.4固相翠取装置 5.5涡旋混匀器 5. 真空系真空度不低于即kh 5.7滤膜;有机系,0.45n m 5.8离心管;50mL,具塞 试样的制备与保存 6. 试样的制备 将实验室样品搅拌均匀,分出0.5k区作为试样 制备好的试样置于样品袋中,密封并做上标记 在制样的操作过程中,应防止样品污染或发生残留含量变化 试样的保存 将试样于冷藏状态下保存(4C). 测定步骤 7.1提取 准确称取5g(精确到0.01g)试样,置于50ml具塞离心管中,准确加人1ug/mL内标溶液(4.9) 50AL,加人5mL氢氧化钠溶液(4.11),于涡旋混匀器上快速混合至蜂蜜完全溶解 依次用3ml甲醇 和3m水活化固相萃取小柱(4.4),将样品溶液转移到小柱上,依次用水、甲醇淋洗,弃去上述滤液 用甲酸-甲醇溶液(4.12)3ml洗脱 40C水浴旋转蒸发至干,用甲醇-水(4.13)定容1.0mlL,过 0.45Am的滤膜到进样瓶中,供液相色谱-质谱仪测定 7.2测定 .2.1参考液相色谱条件 7 色谱柱:C,3Am,150mm×2.0mm(内径)或相当者 a 流动相;甲醇十0.1%甲酸水溶液; b) 流速;0.20mL/min; 梯度洗脱程序;参见附录B; d 柱温:室温; e f 进样量;25L 7.2. 串联质谱条件 2 参见附录C 液相色谱-质谱/质谱测定 7.3.1定性测定 进行样品测定时,如果检出的质量色谱峰保留时间与标准样品一致,并且在扣除背景后的样品谱图 中,各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比,最大允许相对偏差不超
GB/T23412一2009 过表1中规定的范围,则可判断样品中存在对应的被测物 表1定性确证时相对离子丰度的最大允许相对偏差 相对离子丰度 >50% >20%一50% >10%一20% 10% 士20% 士30% 士50% 允许的相对偏差 士25% 7.3.2定量测定 标准工作溶液(4.10)在液相色谱-串联质谐设定条件下分别进样,以标准与内标物峰面积比值为纵 坐标,工作溶液浓度(ng/mL)为横坐标,绘制标准工作曲线(Ing/ml一60ng/mL),用标准工作曲线对 样品进行定量,样品溶液响应值均在仪器测定的线性范围内 在上述色谱条件下,其相应的标准物质和 内标离子流色谱图参见附录D. 空白试验 除不加人试样外,按上述(7.1一7.3)步骤进行 结果计算 结果按式(1)计算: A、×mn ×n 式中 -样品中呸诺酮的浓度,单位为微克每千克(4g/kg); -样品中呸诺酮的峰面积与相应内标峰面积比值 -畦诺酮的质量,单位为纳克(ng); A -标准品中诺酮的峰面积与相应内标峰面积比值; 样品质量,单位为克(g) n 检测低限、回收率范围和精密度 本标准中19种唾诺酮类检测低限均为1.0g/kg 蜂蜜中唾诺酮添加浓度及回收率范围(内标校正)的试验数据(n=10).: 添加水平为1.O4g/kg,19种畦诺啊回收率范围为71%l18%; 漆加水平为2.0以/ke,19种噎诸畔回收率范围为1%~17% 添加水平为5.04g/kg,19种畦诺酮回收率范围为70%一117% 在1.0pe/ke.2.0p/k以和反.0pe/k姐漆加水平上,相对标准偏差(RsD)为4.2%一1I0.9%
GB/T23412一2009 附 录A 资料性附录 隆诺酮类药物及其代谢物中英文名称化学结构式,CAs号和相对分子质量 表A.1哇诺酮类药物及其代谢物中英文名称、化学结构式、CAS号和相对分子质量 中文名称/ 相对分子 序号 化学结构式 CAs号 质量 英文名称/简称 恩诺沙星 oH 359 Enrofloxacin 93106-60-6 ENR H.C 环丙沙星 OH 85721-33-1 Ciprofloxacin 331 CIPy 诺氟沙星 OH Norfloxacin 319 70458-96-7 NOR CH CHH 氧氟沙星 Ofloxaein 361 82419-36-1 OFL H 氟甲吮 OH Flumequine 261 42835-25-6 FLU CH 嗯咋酸 oH 261 14698-29-4 O)xolinicacid (OXO
GB/T23412?2009 A.1) ? CAs ??? ?/ OH ?? DiloxaeinHCl 436 98106-17-3 DIF H.C HCI oH ?? SarafloxacinHC 422 98105-99-8 sAR) CH ?? Sparfloxaein 392 110871-86-8 H,C SPA) OH NH OH ?? 357 112398-08-0 10 Danofloxacin DAN OH ? l Fleroxcain 369 79660-72-3 FLE H.C oH ? 12 Marbofloxacin 362 115550-35-1 MAR CH
GB/T23412?2009 A.1) ? CAs ??? ?/ ?? 320 74011-58-8 13 Enoxacin HO ENO ±? OHH Orbifloxacin H,C 395 113617-63-3 14 I (ORB) CH Et 15 303 Pipemidicaeid 51940-44-4 PIP) HO. ? 16 Pefloxacein 333 70458-92-3 PEF Me CO,H ? Me 17 l.omefloxacinm 351 98079-51-7 IOM CO,H ?? 262 28657-80-9 18 Cinoxacin (CIN HO.C Et ? Me 19 NNalidixicaeid 232 389-08-2 NAL Co,H
GB/T23412一2009 B 附 录 资料性附录 流动相梯度洗脱程序 表B.1流动相梯度洗脱程序 时间/minm 甲醇/% 0.1%甲酸水溶液/% 0.00 10 90 2.00 10 90 90 4.00 10 8.00 90 10 9.00 10 90 12.00 10 90
GB/T23412一2009 附 录 c 资料性附录 质谱/质谱条件及选择离子参数设定表 离子源;电喷雾离子化电离源(ESI).正离子监测 扫描方式;选择离子检测SRM): 雾化气、鞘气为高纯氮气,碰撞气为高纯氯气; 喷雾电压:4100V; 加热毛细管温度;350C 表c. 选择离子参数设定表 母离子 定性离子 定量离子 碰撞电压/ 测定物质 m/n m/z m/a2 316 ENR 360 316 45 医 2 6 CIP 332 231 314 288 7 NOR 320 276 B08 5 261 OFI 362 261 280 18 2 丽 299 DF 400 26 382 品T 299 SAR 386 299 3 368 393 SPA 292 3五5 I0 DAN 358 340 五 288 B FLU 262 202 E8 4 26 10 FLE 370 326 3322 正 元 公 1 MAR 363 72 3s5 丽 321 232 l ENo 3 13 ORB 396 352 29s 丽7 30 PIP 304 14 217 9 23 15 PEF 334 233 290 0 308 0 16 LOM 352 308 2 3 7 8 17 NAL 233 187 24 T7 2 18 CIN 263 217 45 23 6 216 19 OXO 262 28 244 20 NOR-D 18 325 281 281
GB/T23412一2009 D 附 录 资料性附录 隆诺酮类药物及其内标离子流色谱图 5.83 5.63 5.70 100 00 l ENR360>316 SAR386>299 03 PEF334>233 0 9 Ii2 1007 7.42 CIP332>231 SsPA393>292 505 " NAL233>187 0 1003 .46 DAN358>340 na NOR320>276 505 PIP304>189 0 " .54 6 C OEL362>261 .7 50 50 FLE370>326 7.06 1005 D LM0352>308 " MAR363>72 OXO262>216 s0 00 a C 7.51 CIN263>217 50 FLU262>202 5 ENO321>232 I8 5.68 5.76 5.73 1007 m DIF400>299 NOR-D，325>281 50 ORB396>352 50 05 "D 10 /minm /min I/min 图D.1隆诺酮类药物及其内标离子流色谱图