动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法

动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法

国家标准 GB/T21312一2007 动物源性食品中14种隆诺酮药物残留 检测方法液相色谱-质谱/质谱法 Analysisoffourteenquinolonesinfoodofanimaloriginby highperformaneeliquidchromatographytandemmmass spectrometry 2007-10-29发布 2008-04-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T21312一2007 前 言 本标准的附录A,附录B附录C,附录D,附录E均为资料性附录 本标准由国家标准化管理委员会提出并归口 本标准起草单位:检验检疫科学研究院、北京市疾病预防控制中心、疾病预防控制中心营 养与食品安全所 本标准主要起草人:杨奕、国伟、吴永宁、彭涛、邵兵、李晓娟、代汉慧 本标准首次发布
GB/T21312一2007 动物源性食品中14种诺酮药物残留 检测方法液相色谱-质谱/质谱法 范围 本标准规定了动物源性食品中14种唾诺酮药物残留量检测的制样方法和高效液相色谱-质谱/质 谱检测方法 本标准适用于猪肉、猪肝、猪肾、牛奶、鸡蛋等动物源性食品中恩诺沙星、诺氟沙星,培氟沙星、环丙 沙星、氧氟沙星、沙拉沙星、依诺沙星、洛美沙星、毗噪酸、莽唁酸、奥索利酸、氟甲唾、西诺沙星、单诺沙星 14种唾诺酮类兽药残留量的液相色谱-质谱/质谱法测定和确证 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一1992,neqISG3696:1987) 方法提要 用0.lmol!/1EDTA-Melvaine缓冲液(pH4.0)提取样品中的咋诺酮类抗生素,经过滤和离心后、 上清液经HLB固相萃取柱净化 高效液相色谱-质谱/质谱测定,用阴性样品基质加标外标法定量 制样方法 制样操作过程中应防止样品受到污染或残留物含量发生变化 动物肌肉和动物内脏 将现场采集的样品放人小型冷冻箱中运输到实验室,在一10C以下保存，一周内进行处理 取适量 新鲜或冷冻解冻的动物组织样品去筋,捣碎均匀 牛奶 将现场采集的样品放人小型冷冻箱中运输到实验室,在一10C以下保存一周内进行处理 取适量 新鲜或冷冻解冻的样品混合均匀 鸡蛋 将现场采集的样品放人小型冷冻箱中运输到实验室,在一10C以下保存，一周内进行处理 取适量 新鲜的样品去壳后混合均匀 试剂和材料 除特殊注明外,本法所用试剂均为色谱纯,水为GB/T6682规定的一级水 5.1柠檬酸;分析纯 5.2磷酸氢二钠:分析纯 5.3 甲醇 乙睛 5.5甲醇-乙晴溶液:40十60(体积比).
GB/T21312一2007 甲酸(99%). 5. 6 5.7氢氧化钠;分析纯 5.8 乙 二胺四乙酸二钠:分析纯 5.9磷酸氢二钠溶液;0.2mol/儿L 称取71.63g磷酸氢二钠,用水溶解,定容至1000ml . 10柠檬酸溶液0.1mol/I 称取21.01g柠檬酸,用水溶解,定容至1000ml 5.11 Mcllvaine 缓冲溶液:将1000mL0.1mol/几柠檬酸溶液(5.10)与625mL0.2mol/L磷酸氢二 钠溶液(5.9)混合,必要时用盐酸或氢氧化钠调节pH至4.0士0.05 5 12 EDTA-Mellvaine缓冲溶液:0.1mol/L 称取60.5g乙二胺四乙酸二钠(5.8)放人1625mL Mclvaine缓冲溶液(5.ll)中,振摇使其溶解 5.13 甲醇水溶液:5%体积分数). 5.14 甲酸水溶液;0.2%体积分数). 5.15咋诺酮类药物标准物质:恩诺沙星enrofloxacin,CAS;93106-60-6)诺氟沙星norfloxaein CAS:70458-96-7)、培氟沙星pefloxacin,CAs:6159-55-3)、环丙沙星(ciprofloxacin,CAs85721-33-1 氧氟沙星(oflaxaein,CAS,82419-36-1,沙拉沙星(sarafloxaein,CAs;98105-99-8),依诺沙星(enoxacin CAs:7401l-58-8)、洛美沙星(lomefoxacin,CAS:98079-51-7)、毗哌酸(pipenmdilicacid,CAS:51940-44-4) 綦喧酸(nalidixicacid,CAs.389-08-2),奥索利酸(oxoinicacid,CAs;1l4698-29-4)、氟甲呤(flumequine CAs;42835-25-6)、西诺沙尾cinoxacin,CAs;28657-80-9)、单诺沙星(danofloxacin,CAs:74011-58-8 纯度>99% 5 16标准溶液 6.1标准储备液;分别称取0.0100段标准品(5.15)置于10.0mL棕色容量瓶中,用甲醉溶解并定 5 容至刻度,标准储备液浓度为1nmg/ml,-20 C冰箱中保存,有效期3个月 16.2标准工作液;将以上各标准储备液(5.16.1)稀释,配成混合标准溶液 各组分浓度为104g/mL 5 此标准工作液于4C保存,可保存3个月 5. HLB固相萃取柱(200mg,6mL)或其他等效柱 17 仪器 6.1高效液相色谱-串联质谱仪 6 ..2 电子天平;感量0.0001g 6.3电子天平:感量0.01g 6.4组织匀浆机 旋涡混合器 6 .5 6 6 冷冻离心机(最高转速大于1000r/min). 6.7聚丙烯离心管(50ml . 酸度计(0.01). 8 氮吹仪 6 g 6 10固相萃取仪 提取及净化 7 提取 动物肌肉组织肝脏、肾脏 称取均质试样5.0g(精确到0.lg),置于50ml聚丙烯离心管中,加人20ml.0.1mol/LEDTA Melvaine缓冲溶液(S.12),1000r/mmin旋涡混合1min,超声提取10 min,l0000r/min离心5min(温 度低于5C),提取三次,合并上清液
GB/T21312一2007 7.1.2牛奶和鸡蛋 称取均质试样5.0g(精确到0.01g),置于50mL 聚丙烯离心管中,用40ml.0.lmol/LE:DTA Mellvaine缓冲溶液(5.12)溶解,1000r/nmin旋涡混合1min,超声提取10min,10000r/min离心 10min(温度低于5),取上清液 7.2净化 HLB固相萃取柱(200mg,6mL.),使用时用6ml 甲醇洗涤、6ml.水活化 将7.1提取的溶液以 2mL/min一3nL/min的速度过柱,弃去滤液,用2nml5%甲醇水溶液(5.13)淋洗,弃去淋洗液,将小柱 抽干,再用6ml甲醇洗脱并收集洗脱液 洗脱液用氮气吹干,用1ml.0.2%甲酸水溶液(5.14)溶解 1000r/min旋涡混合1min,用于上机测定 7.3基质加标标准工作曲线的制备 将说合标准工作液(G.16.2)用初始流动相逐级稀释成2.》4g/L一1n. g/L.的标准系列溶被 称取与试样基质相应的阴性样品5.0g,加人标准系列溶液1.0ml,按照7.1、7.2与试样同时进行提取 和净化 高效液相色谱-质谱/质谱测定 8.1高效液相色谱条件 8. 1.1色谱柱;watersAcQUITYUPLcrMBEHC柱(100mm×2.1nmm,1.7xm)或其他等效柱 流动相.A[40十60甲醇乙脖溶液(6.5];B0.2%甲酸水溶液(6.14]梯度淋洗参考梯度条件 见表B.1 8. 1. 流速;0.2mL/min 3 柱温:40 B.1.5进样体积;.20l 8.2质谱条件 电离模式;电喷雾电离正离子模式(EsI十);质谱扫描方式;多反应监测(MRM);分辨率;单位分辨 率;其他参考质谱条件见附录A 空白试验 除不加标准外,均按上述步骤进行测定 10 结果计算与表述 10.1定性标准 保留时间 10.1.1 试样中目标化合物色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较,变化范围应在士2.5% 之内,参考保留时间见表B.2. 10.1.2信噪比 待测化合物的定性离子的重构离子色谱峰的信噪比应大于等于3(s/N>3),定量离子的重构离子 色谱峰的信噪比应大于等于10(S/N>10) 10.1.3定量离子、定性离子及子离子丰度比 每种化合物的质谱定性离子必须出现,至少应包括一个母离子和两个子离子,而且同一检测批次 对同一化合物,样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比,其允许偏差 不超过表1规定的范围 各化合物的参考质谱图和标准溶液色谱图见附录C,附录D.
GB/T21312一2007 表1定性时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 >50% >20%一50% >10%一20% 10% 士20% 士25% 士50% 允许相对偏差 士30% 10.2结果计算与表述 按式(1)计算唾诺酮类药物残留量 cV×1000 X一 m×100o 式中: -样品中待测组分的含量,单位为微克每千克(4g/kg); -测定液中待测组分的浓度,单位为纳克每毫升(ng/ml); 定容体积,单位为毫升(mL); 样品称样量,单位为克(g). 11 检出限、定量限与回收率 11.1检出限 动物组织中检出限(s/N=3)氟甲瞠,綦瞠酸、奥索利酸、西诺沙星、恩诺沙星、单诺沙星,洛美沙 星、氧氟沙星均为1.0p/kg,环丙沙星为2.5g/ke,沙拉沙星.诺氟沙星、培氟沙星,毗喉酸为2.0e/kg 依诺沙星为3.O4g/ke 鸡蛋和牛奶中检出限;氟甲睡,慕陡酸、奥索利酸、西诺沙星、,恩诺沙星、单诺沙星,洛美沙星、氧氟沙 星均为0.5g/kg,环丙沙星为1.24g/ke,沙拉沙星,诺氟沙星,培氟沙星.毗嘴酸为1.04g/ke,依诺沙 星为1.5pg/kg 11.2定量限 动物组织中定量限(s/N=1o);氟甲唯、綦酸、奥索利酸、西诺沙星、恩诺沙星、单诺沙星、洛美沙 星、氧氟沙星均为3.OE/kg,环丙沙星为84g/kg沙拉沙星,诺氟沙星、培氟沙星、毗噪酸为日4/Ag 依诺沙星为10成/AkE 鸡蛋和牛奶中定量限;氟甲唾、禁酸、奥索利酸、西诺沙星、恩诺沙星、单诺沙星、洛美沙星、氧氟沙 星均为2ug/kg,环丙沙星为4ug/kg沙拉沙星、诺氟沙星、培氟沙星、毗哌酸为3ug/kg.依诺沙星 为54g/kg 11.3回收率 回收率试验采用三个加标浓度,分别为检出限浓度的1、2,5倍 猪肉中14种唾诺酮的加标回收率 在86.8%~116.9%之间,相对标准偏差(RSD)在1.9%~15.1%之间;猪肝中14种唾诺酮的加标回收 率在90.2%118.5%之间,RSD在1.8%14.1%之间;猪肾中14种瞠诺酮的加标回收率在 86.8%113.1%之间,RSD在2.3%17.0%之间;牛奶中14种唾诺酮的加标回收率在79.0% 119.9%之间,RSD在2.2%一19.4%之间;鸡蛋中14种唾诺酮的加标回收率在80.5%一112.1%之 间,RSD在2.9%~20.1%之间 具体见附录E
GB/T21312一2007 附录A 资料性附录 参考质谱条件！ 参考质谱条件 电离源;电喷雾正离子模式 a) 毛细管电压:2.0kV b) e)射频透镜电压;:0V; d 源温度:110; 脱溶剂气温度;350C; e 脱溶剂气流量;500L/h; f 电子倍增电压;650V, g h)喷撞室压力:0.28Pa iD 其他质谱参数见表A.1 表A.114种唾诺酮的主要参考质谱参数 母离子 子离子 碰撞能量" eV 锥孔电压/八 化合物 271.1 21 38 毗噪酸 304.3 189.0 32 38 17 38 290.3" 培氟沙星 334.3 233.2 25 38 318.3" 18 38 362,2 氧叙沙星 261.2 27 38 3 303. 19 50 依诺沙星 321.4 233.9 50 22 302.3 19 50 诺氟沙星 320.8 276.3 17 50 314.3" 19 36 环丙沙星 332.2 288.3 17 36 316.4 19 38 恩诺沙星 360.3 38 342.3 23 25 340.3 38 单诺沙星 358.3 12 82.0 38 265.2 23 36 洛美沙星 352.3 17 36 308.3 342.3" 18 40 沙拉沙星 386.3 299.3 28 40 1 所列质谱参考条件是在Mieromas"-QuatroPretnmierxE质谱仪上完成的,此处所列试验用仪器型号仅供参 考,不涉及商业目的,鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器
GB/T21312一2007 表A.1续) 化合物 母离子 子离子 碰撞能量/eV 锥孔电压/V 16 35 244.1" 西诺沙星 263.1 188.8 28 35 244.1 16 50 奥索利酸 262.1 155.9 28 50 215.1" 15 26 泰碗酸 233.1 187.0 28 26 244.1" 17 50 甲咋 262.2" 202.1 28 50 注;对不同质谱仪器,仪器参数可能存在差异,测定前应将质谱参数优化到最佳 定量离子
GB/T21312?2007 B ? ?? ο? B.114????ο? ?/minm -?/% 0.2%?/% 10 90 30 70 50 50 l00 9,5 0.5 100 11 10 90 15 10 90 B. 2 14 ????ο?(Rr) RT/min RT/min ?? 5.84 ? 5,66 ?? 5.08 3.93 5,l4 10,32 ? ? ? 5.32 8.67 ? 5.04 ? 10.67 ?? 6.74 ?? 7.76 ?? 4.79 ?? 5.64
GB/T21312?2007 g ? ?? 14???? 341.8 100r 342.1 'wr" 341." 1342.2 341.6 36. 367.5 368.3 68,4 367.3 342.6 38.9 298.7 98.6299.0 368.5 85 386.1 299.3 B385. 386.3 298.3 B385. 322.2 322.1 342.9 l301.7340.6 Tww?s3tmo m/z ?c.1???? 317.9 100 18.1 TB3 361.4 344.1 344." ,21 260.6 316." ww0w3020000R m/z ?c.2???
GB/T21312一2007 24s 100r 342.3 315. 那6." a15. 341.6 42.5 245.3 316.6 315.5 244." 230.5 203.0 360." 314 A 2309 23L Oh 202. 256.7 apa.3 30R 163.0 18d? P 134.51 W 以上O上 "ot城B高55动i m/z 图C3恩诺沙星二级质谱图 340.0 100r 339.7 40.5 339. 35.3 357？ 339.3 358.5 357.4 314.0 314.3 313.814.5 282.7 282.8 245.1 282.5 B品A" 3358.8 27. 219. 儿道 助筋ai2D然2s勃奶370 m/2 图C.4单诺沙星二级质谱图
GB/T21312一2007 264？ 100 264.9 264.6 65.o 264.司265.3 308.2 307.5308.3 351.7 352.2 352.3 333.9 287.0 251.1 8a可1. Tp8.2 Bo8. 7 20.?p513 287." 352.7 334.6 333.4 250.3 B88.5 266.o 391.6 B52.9 严 222.4、 06." 0Oo O30 230240250260270280290300310 m/z 图c.5洛美沙星二级质谱图 315.8 10o -316.2 315.6 315.3 290.0 232.? 289.6、 232.5 290.4 289.2 2232.2 233.5 1317.1 333.9 218." 204.5 239.6 270.0288.0 333.6 215.2 246.了 134.6 267.8273. 302.2 a "0箱0"O0'20"2202o'20'20"D0s'30 m/z 图C.6培氟沙星二级质谱图 10
GB/T21312?2007 314.2 100r 313.8 288.3 244.5 313.3 W244.7 287.8 245.1 287.4 245.2 244.4 88.5 315.4 267.6 268.3 230.9 204.1 331.5 388.8" 245.8 20.5 268.4 204.3" 203.7 331.8 2.R F 188.4 o 230.1 2 174.2 76.6y98. 333." 123.5 % 1701801902002I0220230240250260270280290300310320330340 m/a ?C.7??? 302.7 10o 303.1l 32.3 21.8 I03.7 246.8 247.8 204.7 167.8 88B,8104.5 80.8 A 0 60 80 100 120 140 160 180 200 220240 260 280 300 320340 m/z ?c.8???? 11
GB/T21312一2007 302.8 100 -303.2 303.3 302.5 234.0 233.5、 7256.9 R 233.3 320.9 277.3 256.2" 321.1 276.5 2052 283.2 i21.真 254." 204.5、 262.0 " 2物" "21O220230" "20270202030o31032o034o m/a 图c.9诺氟沙星二级质谱图 24.1 10o 244.7 244.5 217.2 216.3 ,邪? 188. 188.2 262.4 203.0 助动箱加'斯0 607o8o m/z 图c.10西诺沙星二级质谱图 12
GB/T21312一2007 243.B 100 244.1 215.8 215.3 159.4 158.o 172 147.7 I 2p 72T w前w丈ww如去古30 m/h 图c.11奥索利酸二级质谱图 244.0 100 244.1 202.0 261.6 7000们00T070"21020"202'"27o m/2 图C.12氟甲隆二级质谱图 13
GB/T21312?2007 215.0 100r 214.6 186.7 233.0 o`O0007002120202i0 60 80 90 50 70 m/5 ?c.13?? 100 304.1 303." 285.7 286.0 286.5 05.6 217.3 216.5" ww3d 60708090" m/2 ?c.14? 14
GB/T21312?2007 ?D ?? 14?????? 11.54 5.00 7.00 8.00 9.00 I0.00 T.00 4.00 6.00 10,89 10.o0 .00" 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 8.56 7.oo 8.00 m.0 o w.00 .w ? 00o ? 7.63 Nh4 10.0o m.00o 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 ?? w .O .0o 5.0o 6.00 7.0o 8.oo ? 7.o 8.oo 9.oo 1o.oo .0o 5.00 6.00 4.00 ? 5.54 100 & .o .0o 8.00 .00 4.00 5.00 6.00 ? 5.72 Xw 7.w X00 6.00 9.0o d.0o i.00 4.68 ? 100 6.0o 7.o 8.UO 9.00 o.00 T0o 4.00 5.00 4.68 ? 100 5.22 7.o 9.oo 0.00" T.00 5.00 6.00 8.00 5.22 ? T .00 5.00 6.00 7.0o 8.00 9.00 0.00 4.73 ?? 4.91 6.00 7.o 8.o0 9.o0" no.00 .00 4.00 5.00 4.91 19 4.21 ?? 4.03 7.w 9.o0 io0.00 t.00 4.00 5.00 3,72 " min Lw X.0w?w7w 8.00 9.00 r0.00 T.00 ?D.114?????? 15
GB/T21312一2007 附 录 E 资料性附录 五种基质中14种隆诺酮的回收率和相对标准偏差 表E.1猪肉、猪肝、猪肾中唾诺酮的回收率及相对标准偏差(n=6 肉 猪 肾 猪 肝 猪 加标水平/ 化合物 4e/ke RSD/% RSD/% 回收率/% 回收率/% 回收率/% RSD/% l10.8 10.7 5.2 112.5 14.1 86.8 氟甲唯 105,4 1.9 108.7 10.1 102.2 4. 01.5 102.4 2.4 4，4 94.2 3.6 113.7 7.2 116.5 88.o 12.6 4.0 2.8 4.8 禁酸 108,1 5.8 105.8 102.8 09.3 7.3 02.1 1.8 103.4 4.0 13.7 9.4 110.5 6.1 108.5 7.8 奥索利酸 114.2 6.5 115.3 5,8 101.2 6.3 4. 104.7 5.6 112.5 104.5 ,5 93.2 7.5 13.0 7.4 1.2 08.3 西诺沙星 2 06.0 3.7 114.5 5.2 112.6 10.6 104.9 3.4 113.0 5.3 107.8 6.7" 116.0 3.4 112.5 5.7 93.8 6.3 沙拉沙星 104.2 2.7 109.1 7.6 94.6 5.3 10 1l1.5 6.0 109.1 10,1 90.1 10,4 9,5 10.3 114.3 6.0 118.5 108.0 107.3 113.1 7？ 107.？ 7.3 恩诺沙星 3.6 2 5 6 100.8 3.7 111.4 90.7 8.6 97.8 7.7 104.7 8,9 87.5 13,2 单诺沙星 96.8 4.3 109.3 5.8 106.5 6.5 90,2 3.5 102.3 4,0 87.0 5.5 08.8 10,8 115.8 8.8 89.3 l4.0 洛美沙星 108.2 10.9 110.7 8,4 109.4 7.1 08.5 100.2 100." 2.3 4，4 87.8 90.8 17.0 15.1 114.8 7.5 氧氟沙星 94.6 6.7 112.8 5,8 111." 9.5 93.9 4.6 96.0 4.6 93.2 7.8 2.5 104.7 5.3 106.9 5.9 104.7 8.9 环丙沙星 97.9 4.6 106.2 4.8 106.3 3.3 12.5 86.8 102.o 3.6 96.2 4.6 6，4 6
GB/T21312一2007 表E.1续) 肉 猪 肾 猪 肝 猪 加标水平 化合物 G4g/kg 回收率/9% RsD/% 回收率/% RsD/% 回收率/% RsD/% 106.8 4.2 112.3 1l1.3 10.1 6.3 诺叙沙星 93.6 6.6 99,6 5.5 105,8 6.6 10 111.5 10.2 90.2 5,9 89.1 12,9 1l6.9 10,3 107.8 3.7 96.3 11.5 培氟沙星 102.4 3.8 99.4 4.2 109.2 4.4 10 6.3 104.9 ll.6 106.3 87.7 10,6 107.4 04.5 02.2 4. 5.8 102.6 2.2 111.1 88.2 9.8 毗噪酸 10 92.3 14.7 104.4 5.1 88.9 10.5 10.1 92.2 5.7 102.3 11.2 100.5 依诺沙星 02." 3.2 105.8 3.1 113.1 6. 15 93.8 5.o 92.2 12.1 95.4 9.4 表E.2牛奶和鸡蛋中唾诺酮的回收率及相对标准偏差(n=6 牛 奶 鸡 加标水平/ 化合物 4g/kg RsD/% RSD/% 回收率/% 回收率/% 0,5 98.7 13.2 101.8 5.8 l08.3 氟甲唾 97.0 16.l 96.8 100.3 3.8 5.9 105.7 10.7 107.7 0.5 禁哧酸 95.3 10.5 105.8 98.7 8.6 96.6 0.5 103.7 16.0 90.0 9.6 奥索利酸 97.8 1l.7 1l0.7 8.4 97.1 5.1 00,3 0.5 108.0 87.7 ll1.l 88.3 10.0 105.7 西诺沙星 98.2 95.0 5.0 7.5 95.3 7.2 80.5 13.0 沙拉沙星 98.3 3.7 l10.8 6.3 100.8 2.2 109.8 2.9 0.5 105.0 l1.7 98.3 18.4 恩诺沙星 9.7 9.1 104.0 97.3 1o1.7 7 6.6 98.4 5." 17
GB/T21312?2007 E.2() ? ???/ g/kg /% /% RSD/% RSD/% 98. 3 10.9 03.3 16,0 0.5 ?? 98.7 11.8 106,5 13.1 96.6 4.4 97.6 7.5 0,5 80.7 9.2 102.7 12.9 ? 87.3 10.6 05.3 11.0 90.3 3.2 963 5 l09.7 1o1.7 15.4 0 9.9 79.0 4.5 96.3 13.9 ? 87.6 9.1 97.1 1.25 83.3 19.4 90.3 20. ? 2.5 80.5 10.1 884 18.9 5,0 101.7 9.1 93.7 18.9 97.2 15.8 87.0 10.0 83.6 96.5 11. ?? 102.7 4.6 112.1 17." 94.8 12.1 90.5 20.o ? 90.3 10.1 90.8 10.8 104.4 7.8 91.6 19.4 l16.0 86 94.3 19.9 l10.8 4.5 86.1 10.3 119.9 7.6 94.2 12.6 87.2 13.3 95. 2 l4.8 ?? 79.7 9.8 90.0 17.6 84.3 5.3 91.1 8.3 18