高通量基因测序技术规程

高通量基因测序技术规程

国家标准 GB/T30989一2014 高通量基因测序技术规程 Iechmiealregulationofhigh-throughputgenesequeneing 2014-07-24发布 2015-03-01实施 国家质量监督检监检疫总局 发布 国家标准花管理委员会国家标准
GB/T30989一2014 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准由深圳华因康基因科技有限公司提出 本标准由全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC387)归口 本标准起草单位:深圳华因康基因科技有限公司、深圳华因康高通量生物技术研究院、天津康听瑞 基因科技有限公司,国家人类基因组南方研究中心、科学院北京生物物理研究所,深圳市标准技术 研究院、上海交通大学医学院附属瑙金医院 本标淮主要起草人;盛司潼,谭辉彪,金虹,赵国屏、王升跃,陈润生周文、张俊
GB/T30989一2014 高通量基因测序技术规程 范围 本标准规定了高通量基因测序技术的术语与定义,测序的原理、技术指标、相关主要仪器、测序试剂 及配制和测序方法的要求 本标准适用于对动物组织,血液、粪便、口腔黏膜、毛发、植物组织、土壤,微生物等生物样品进行高 通量基因测序 本标准适用于单向测序,双向测序,混合样品测序三种类型的测序,也适用于表达谐测序,ChIP测 序,癌症研究和分型,miRNA测序、微生物元基因组、病菌种类的检测,免疫学和免疫疾病工作,甲基化 测序、序列多态性检测、临床基因诊断、个性化测序和基因组测序 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T27025-2008检测和校准实验室能力的通用要求 JB/T6777紫外可见分光光度计 YY/T0087电泳装置 YY0569 I级生物安全柜 YY/T0657医用离心机 YY91037电热恒温水浴锅 AsTME1342-1997用冷冻、冷冻干燥和低温养护法保存细菌,真菌,原生生物,病毒,遗传要素 以及动物和植物组织的标准实施规程(StandardPraetieelorPreevationbyFreing，" Freeze-Drying， andLowTemperatureMaintenanceofBacteria，Fungi，Protista，Viruses，GeneticElements，andAn- imalandPlantTissues 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 基因gene 位于染色体上编码一个特定功能产物(如蛋白质或RNA分子)的一段核苷酸序列,是遗传信息的 基本单位 3.2 基因组genoe -种生物体具有的所有遗传信息的总和 3.3 核苷酸nucleotide 构成核酸的基本单位,由三部分组成:五碳糖、磷酸和环状的含氮碱基
GB/T30989一2014 3.4 ucleotide 寡核苷酸oligme -类短链核苷酸的总称,常用作探针确定DNA或RNA的序列 3.5 文库Itreury 通过生物来源的、人工合成的或克隆技术等所得到的一个重建分子群,如基因组文库、互补DNA 文库、噬菌体展示肽文库等 3.6 标签文库taglihrary 将DNA样品随机打断后,在其两端连接带特定序列的接头,在接头之间的序列称为标签,所有不 同的标签的集合即为标签文库 3.7 基因文库genelihrary 整套由基因组DNA片段插人克隆载体获得的分子克隆的总和 3.8 eDNA文库eDNAIibrary 将处于特定发育阶段真核生物体的特定器官或组织中提取的总RNA,经过反转录等一系列的生化 反应合成双链cDNA群体后,再插人到适当的载体上,经转化寄主菌株构成的特定eDNA克隆群体 3.9 DNA聚合酶NApolymerase 以一条DNA链作为模板合成一条新的DNA链时所需要的酶 3.10 DNA连接酶NAligase 在DNA复制、修复和重组过程中,由发挥作用的催化磷酸二酯键合成的酶 3.11 引物primer 在DNA复制过程中,结合于模板链上并作为复制延伸的起始位点和/或终止位点的,具有一定长 度和顺序的寡核苷酸链 3.12 探针proe 能识别特定碱基序列的、经过人工标记的一小段单链核酸分子,即一段与被测定的核苷酸序列(靶 序列)互补的带标记的单链核苷酸 3.13 荧光探针loreeemtprohe 能识别特定碱基序列的,经过人工标记的一小段单链核酸分子,与待测靶序列互补结合后能发出所 标记荧光信号的单链核苷酸 3.14 ;PCR 聚合酶链式反应polymerasechainreaction; 模板DNA先经高温变性为单链,在DNA聚合酶和适宜的温度下,两条引物分别与模板DNNA两 条链上的一段互补序列发生退火,接着在DNA聚合酶的催化下以四种dNTP为底物,使退火引物得以 延伸,如此反复变性,退火和DNA合成这一循环,使位于两段已知序列之间的DNA片段呈几何倍数 扩增
GB/T30989一2014 3.15 基因扩增geneamplifieatonm 某个或某些基因的拷贝数选择性增加的现象 3.16 碱基base 一类含氮原子的有机杂环化合物,是组成票岭和唁髋的主要成分,是拼出遗传密码的“字母” 注:DNA中的碱基主要有腺喋岭(Adenine,A)、鸟噪呤(Guanine.G)胞嗜(Cytosine,C)和胸腺(Thymine T);RNA中的碱基主要有腺咪岭(A),鸟嗦岭(G),胞喘碗(c)和尿喘碗(Urnaeil,U). 3.17 碱基对basepair 形成“DNA梯子的横档”的一对碱基 注:在碱基对中,腺噪岭总是与胸腺密配对,鸟噪岭总与胞嗜哧配对 3.18 基因测序 geneseguencing 对核酸分子的核苷酸排列顺序的测定,即测定组成核酸分子的腺喋岭(A),鸟喋岭(G),胞喀碗(C) 和胸腺喀(T)或者是尿唁(U)的排列顺序 3.19 高通量基因测序high-throughputgenesequeneing 区别于传统Sanger(双脱氧法)测序,能够一次并行对大量核酸分子进行平行序列测定的技术,通 -次测序反应能产出不低于100Mb的测序数据 常 3.20 单次测序singlerunse gueneting 测序仪运行一个测序流程,如一次单向测序或一次双向测序的行为 3.21 测序通量throughputofe enesequencing 单次测序可获得序列信息的基因片段数量或可测定的脱氧核糖核酸和核糖核酸(以碱基表示) 数量 3.22 物理通量rawthroughput 测序时获得的初始木经任何处理的序列信息基因片段数量或脱氧核糖核酸和核糖核股(以狱基表 示)数量,与有效通量(3.23)相对应 3.23 有效通量vtdthrushput 单次测序质量合格的基因片段数或碱基数 3.24 测序读长readlengthofgenesequencing 测序能测得的最长基因片段的长度,通常以碱基数表示 3.25 测序准确率accuraeyofgenesequencing 对已知序列的基因进行测序,获得的正确碱基数占可识别的碱基数比例 3.26 碱基识别basecallins 测序过程中从炎光信号或其他由于测序反应而产生的信号转换成序列信息的过程
GB/T30989一2014 3.27 ofbaseeallins 碱基识别正确率 accuracy 单次测序正确碱基数占碱基总数的比例 3.28 碱基识别错误率inaccuraeyofbasecalling 单次测序错误碱基数占碱基总数的比例,与碱基识别正确率(3.27)相对 3.29 碱基识别质量qualityofbasecalling 衡量碱基正确识别的概率 通常以数字值直接表示 碱基识别质量与碱基识别错误率之间的关系可用式(1)表示: ？ Q=一1olg1 式中: -碱基识别质量; 碱基识别错误率 3.30 测序覆盖率 overagerateosequencing 待测样本的核苷酸序列检测结果覆盖于参考序列上的比例测序覆盖率=覆盖区域长度一参考 序列总长度). 3.31 测序深度depthofsequeneing" 待测样本中某个指定的核苷酸被检测的次数 3.32 平均覆盖深度averagedepthofcoverage 测序深度的平均值 3.33 y lleting device 信号收集仪器singa 用于收集待测样本中被测核苷酸上标记物发出的信号,并对该信号进行识别或者转换的装置 缩略语 下列缩略语适用于本文件 电荷耦合元件(Charge-coupledDevice) CCD DNA -脱氧核糖核酸(DeoxyribonucleicAcid) EPCR 乳液聚合酶链式反应(EmulsionPolymeraseChainReaction),也即油包水PCR PCR 聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction PNK 多聚核苷酸激酶(PolynueleotideKinase) RNA 核糖核酸(RibonucleicAeid SNP -单核苷酸多态性(SingleNueleotidePolymorphisms) 原理 5.1碱基互补配对原理 在DNA分子结构中,碱基之间的氢键具有固定的数目，且DNA两条链之间的距离保持不变 碱
GB/T30989一2014 基配对必须遵循一定的规律,即A一定与T配对,G一定与C配对,反之亦然 腺喋岭与胸腺密之间 有两个氢键,鸟瞟岭与胞喀之间有三个氢键,即A=T,G=C 根据碱基互补配对的原则，一条链上 的A的数量一定等于互补链上的T的数量;一条链上的G的数量一定等于互补链上的C的数量,反之 亦然 5.2EPCR反应原理 将用于PCR反应的水相体系与油相体系混合,形成大量油包水的微乳液独立PCR反应空间;如果 PCR反应体系中加人的核酸模板数量合适,每个独立反应空间中将只有一个模板分子;然后,在形成的 独立反应空间中进行相同模板的大量平行扩增,即可得到大量相同的扩增结果,实现基因扩增 5.3连接测序原理 将动物组织、血液,粪便、口腔黏膜、毛发、植物组织,土壤、微生物等生物样品制备成待测样品,将待 测样品连接到固相载体上,通过PCR扩增技术将待测样品放大收集成库,然后进行平行循环测序 利 用碱基互补原理,通过退火将寡核苷酸结合于待测样品一端,随后在连接酶的作用下,使与待测位点碱 基互补的底物荧光探针互补结合于待测样品,并同时大量收集与待测样品结合的荧光探针在特定激发 光下发出的荧光信号,由荧光信号的种类确定样品上所测位点的碱基;当上轮测序完成后,利用可逆技 术,继续进行下一轮反应,重复测序过程,从而实现高通量基因测序 5.4合成测序原理 将动物组织,血液,粪便、口腔黏膜,毛发、植物组织、土壤、微生物等生物样品制备成待测样品,将待 测样品连接到固相载体上,通过各种不同的PCR扩增技术将待测样品放大收集成库,然后进行平行循 环测序 利用边合成边测序的策略,加人一种或多种带标记或不带标记的底物核苷酸,以及可逆的终止 子,在聚合酶的作用下,按照碱基互补配对原理,进行DNA链的延伸,延伸一轮测取一轮底物与模板结 合后发出的信号,收集该信号并确定所测位点的喊基;当上轮测序完成后,利用可逆技术,继续进行下一 轮反应,重复测序过程,即可实现高通量基因测序 高通量基因测序的指标要求及条件 6.1测序技术要求指标 6.1.1测序通量 >100Mb 6.1.2碱基识别正确率 99% 6.1.3碱基识别质量 >20 测序设备推荐使用条件 6.2 附录A给出了高通量基因测序设备的使用条件 6.3 实验室工作条件 附录B给出了高通量基因测序设备的实验室工作条件
GB/T30989一2014 主要仪器和设备 7.1 建库用仪器设备 7.1.1离心机 实验室通用离心机,应符合YY/T0657的要求 7.1.2低温离心机 应符合Y/T057的要求 7.1.3PCR仪 温度设置范围:099C;最大循环数;99;升降温速度:3C/s 7.1.4紫外分光光度计 应符合JB/T6777的要求 7.1.5水浴锅或金属浴 应符合YY91037的要求 7.1.6垂直电泳槽及电泳仪 应符合YY/T0087的要求 7.1.7一80C冰箱 温度调节范围为一90C-10C 7.1.8通风橱 应符合YY0569的要求 7.2大规模扩增仪器设备 行业内不同的测序方法采用不同的大规模扩增方法,较为常见的有EPCR扩增、桥式PCR扩增,可 根据具体的扩增方法选择符合国家或行业内现行有效标准的大规模扩增仪器和设备 7.3测序仪器设备 7.3.1基因测序仪 高通量基因测序技术中,基因测序仪应至少达到表1的要求: 表1高通量基因测序仪基本参数要求 基本参数 序号 说明 测序通量 >100Mlp 碱基识别质量 20
GB/T30989一2014 表1(续 基本参数 序号 说明 测序准确率 Q值过滤之后的准确率>99.9% 室温25条件下,fluidcel温度从25升到65的时间<50s lcel升降温速度 fluid 室温25"条件下,luidcell温度从65C降到25C的时间250s 注;Q值过滤,即去除低质量的测序结果,保留较为可信的测序结果 7.3.2信号收集仪器 信号收集仪器根据标记信号的不同选用相应不同的收集器,比如图像信号收集器中的高精度 cCD,电信号收集器中的半导体传感器,光谱信号收集器中的光谱成像仪 试剂及溶液配制 8.1 总则 除另有规定外,试剂为生化试剂 实验用水应符合GB/T6682中一级水的要求 8.2建库试剂盒 用于核酸样品的基因文库构建,试剂盒内至少应包含;连接头,T4DNA连接酶、DNA聚合酶、 T4PNK、缓冲液 8.3大规模平行扩增试剂盒 用于对构建好的基因文库进行大规模平行扩增,得到用于高通量基因测序的测序文库,试剂盒内至 少应包含扩增引物、高效扩增酶缓冲液 8.4高通量基因测序试剂盒 用于对测序文库进行高通量基因测序,试剂盒内至少应包含测序引物、高效测序反应酶、缓冲液 高通量基因测序过程 9.1 通则 本标准的高通量基因测序方法涉及如下步骤 对待测样品进行处理,形成测序文库;将待测序的核酸(DNA,cDNA或RNA)片段两端连上 接头,通过大规模平行扩增,形成待测序核酸样品的测序文库; 测序反应,同步收集测序信号;加人底物核苷酸,在测序酶的作用下使底物核苷酸与测序文库 中的待测样品进行结合,同时收集该过程中产生的信号,包括但不限于荧光信号,电信号或离 子信号; 测序信号的分析;对得到的测序信号进行处理分析,将信号图转变为核苷酸碱基序列信息 分 别以连接测序法、合成测序法实现高通量基因测序技术为例,其中连接测序法过程按附录c 中图C.1所述方法进行
GB/T30989一2014 9.2连接测序法测序 9.2.1测序文库的制备 将待测序的核酸(DNA.,cDNA或RNA)片段制备成两端连有接头含有与扩增及测序引物互补的 序列、中间有短序列标签结构的标签文库,集合成为基因文库;然后对基因文库进行大规模平行扩增， 得到含有待测核酸样品的测序文库 9.2.2待测核酸样品的表面固定 将测序文库中的待测核酸样品固定于测序介质中 9.2.3碱基循环测序 9.2.3.1测序锚引物与待测标签序列的结合 通过待测核酸样品上携带的接头,将测序所用的测序锚引物与待测核酸序列进行结合 9.2.3.2信号标记物的结合 通过与测序锚引物的作用,将含有标记信号的寡核肯酸结合到待测标签序列上 9.2.3.3标记信号的采集 通过光源激发信号标记物使其发出信号,并利用信号收集仪器进行信号采集 9.2.3.4标记物信号的消除 信号采集结束之后,将此轮的标记信号消除湮灭,进行下一轮的测序操作(“下一轮”不清楚,导致 9.2.3.5中的循环重复步骤也不清楚. 9.2.3.5循环测序 重复9.2.3.3和9.2.3.4中的步骤,直至将所有信号采集完成 9.2.4分析采集的信号,输出碱基序列 通过信号分析软件,对采集得到的信号进行分析.得到物理通量、有效通量、测序读长、测序深度和 平均覆盖深度等高通量基因测序仪运行参数,并最终得出待测标签序列的碱基序列信息 若所测待测 核酸样品的核苷酸序列已有参考序列(即重测序),还能获得测序覆盖率,并通过与参考序列的比对,得 到待测核酸样品的核苷酸序列的sNP信息 9.3合成测序法测序 测序文库的制备 9.3.1 将待测序的核酸(DNA.,cDNA或RNA)片段制备成两端连有接头(含有与扩增及测序引物互补的 序列)中间有短序列标签结构的标签文库,集合成为基因文库;然后对基因文库进行大规模平行扩增 得到含有待测核酸样品的测序文库 9.3.2待测核酸样品的表面固定 将测序文库中的待测核酸样品固定于测序介质中
GB/T30989一2014 9.3.3碱基循环测序 9.3.3.1测序锚引物与待测标签序列的结合 通过待测核酸样品上携带的接头,将测序所用的测序锚引物与待测核酸序列进行结合 9.3.3.2标记信号的采集 加人底物核苷酸,通过DNA聚合酶的作用,使得结合在待测核酸序列上的测序锚引物进行单喊基 延伸,并利用信号收集仪器采集延伸过程中的信号或延伸后结合在测序错引物上的底物核苷酸上的标 记物被激发出的信号 9.3.3.3循环测序 信号采集结束之后,重复9.3.3.2的步骤,直至将所有信号采集完成 9.3.4分析采集的信号,输出碱基序列 通过信号分析软件,对采集得到的信号进行分析,得到物理通量,有效通量、测序读长,测序深度和 平均覆盖深度等高通量基因测序仪运行参数,并最终得出待测标签序列的碱基序列信息 若所测待测 核酸样品的核苷酸序列已有参考序列(即重测序),还能获得测序覆盖率,并通过与参考序列的比对,得 到待测核酸样品的核苷酸序列的sNP信息
GB/T30989一2014 附 录A 规范性附录 测序设备推荐使用条件 基因测序仪进行高通量基因测序的正常工作条件如下: a)运行环境温度:(18士5)C,建议恒温18C; 运行环境湿度;80%; b 工作电压:220V,具有士10%的相对误差,50Hz; dD 电路电流;<2.5A: 电源保护;带有不间断1500w电源UPS 支撑平台;气压式缓冲系统的防震平台;防震效果宜达到1Hz级别 洁净要求;放置在10万级超净间 10
GB/T30989一2014 附 录B 规范性附录 实验室工作条件 一般要求 B.1 B.1.1设施和环境要求 用于高通量基因测序的实验室,有条件的宜在所分隔的各工作区域设置缓冲间 缓冲间的压力为 负压(或上设抽风装置),与其相连的工作间为正压,工作间与缓冲间之间宜安装磁性连锁装置 受实验 场所限制而无条件设置缓冲间的实验室,在对检测区域进行功能划分后,应根据本部分B.2中的规定设 置实验室的压力 非实验人员不应进人各实验工作区 各 不同功能的高通量基因检测工作区应是分隔独立的工作室,并有明显的标志,各区间不能直通 区之间如果是紧密相连,需安装物品传递舱 每个工作区域的顶部应安装紫外灯,紫外灯的波长为254nm,每20m安装一支40w的紫外灯 灯与地面的距离为2.0m士0.1m B.1.2工作顺序 所有实验操作应在规定的区域进行,待检样品的流动应遵照高通量基因测序工作流程的顺序,严格 按单一方向进行 B.2实验室工作区域的设置及要求 B.2.1核酸检验区 B.2.1.1 试剂贮存区 B.2.1.1.1主要功能 原装试剂和配制试剂的贮存,所有试剂的分装与贮存 B.2.1.1.2工作区域的压力要求 未设缓冲间的试剂贮存区,工作区域为正压 B.2.1.1.3注意事项 当试剂经质检合格后,应将其分装贮存备用,贮存试剂的分装体积根据通常在实验室内一次测定所 需的扩增反应数决定 用于扩增的试剂应冰冻贮存,避免反复冻融使用冻融后置于4c保存,且4 存放时间不应超过一周 B.2.1.2试剂配制区 B.2.1.2.1主要功能 用于所有试剂的配制与准备 11
GB/T30989一2014 B.2.1.2.2工作区域压力要求 未设缓冲间的试剂配制准备区域,工作区域可为正压或负压,可安装排风系统,视具体配制的试剂 而定 B.2.1.2.3注意事项 此区域是用于试剂配制的区域,应视所配制的试剂决定工作区域的分配,配制试剂所用的器具应在 使用前进行清洗,必要时加以消毒;不同试剂的配制防止受到交叉污染 B.2.1.3样品制备区 B.2.1.3.1主要功能 实验室样品的处理以及符合测序要求的待测样品的制备 B.2.1.3.2工作区域的压力要求 未设缓冲间的样品制备区,工作区域为负压或减压,可安装排风系统 B.2.1.3.3注意事项 此区应远离其他实验操作区;粉碎样品时的器皿应单独使用,所用的器具在使用前应经过彻底清洗 并高压消毒,防止交叉污染,称取的测试样品应加盖后再移至样品核酸制备区 B.2.1.4扩增区 B.2.1.4.1主要功能 PCR扩增反应体系的配制和模板的加人,核酸扩增 B.2.1.4.2工作区域的压力要求 未设缓冲间的扩增区,工作区域为负压或减压,可安装排风系统 B.2.1.4.3注意事项 严格限制无关人员出人并减少在本区内走动;加样应在超净工作台(生物安全柜)内进行,超净工作 台的气流方向宜选择垂流式 B.2.1.5质检区 B.2.1.5.1主要功能 试剂配制结果以及扩增产物的定性与定量测定 B.2.1.5.2工作区域的压力要求 未设缓冲间的扩增产物区，工作区域为负压或减压,应安装排风系统 B.2.1.5.3注意事项 此区是最主要的扩增产物污染来源,应远离其他实验操作区;推荐使用荧光显微镜对试剂配制结果 进行定性检测,推荐使用实时荧光定量PCR方法对扩增产物进行定量检测 12
GB/T30989一2014 注:若实验仅采用全自动扩增检测仪如实时荧光定量PCR仪),可将扩增区与扩增产物质检区合并为一个区 B.2.2其他区域 可设置洗涤消毒室(洗涤、消毒、,制备纯水和/或双蒸水、制冰等,高速/超高速离心机室,低温/超低 温冰箱室等 B.3实验室质量控制和质量保证 B.3.1人员 高通量基因测序实验室的人员应按照GB/T27025一2008中5.2的要求 实验操作人员应具备良 好的分子生物学专业技术操作规范 B.3.2仪器设备 各实验区域应有专用的仪器设备,同一区域内的仪器设备、物品和工作服应有明显标记,避免与其 他区域的物品混用 仪器设备的校准应符合GB/T270252008中5.5的规定 B.3.3试剂 B.3.3.1试剂要求 除另有规定外,所有实验使用的试剂等级应为不含DNA和DNase的分析纯或生化试剂 试剂的 选购、验收、贮存应符合GB/T27025一2008规定 实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格 去离子水的电阻应达到18.2nQ. 商品试剂盒应注明到货日期,对所收到的试剂盒应按规定的贮存条件存放 对菌种,质粒,动植物细胞组织的贮存与保管应符合AsTME1342一1997的规定 B.3.3.2试剂配制 实验室配制的试剂应在容器上标明试剂名称,浓度、配制时间、保存条件、失效日期及配制者姓名 所用试剂溶液宜大体积配制、小体积分装后保存,不宜高压灭菌的试剂应过滤(0.22m)除菌;PCR 主混液、引物、探针应避免反复冻融;若冻融后未用完的试剂应于4C保存,且保存时间不应超过一周 B.3.3.3试剂质量控制 实验室应确定关键试剂,并在使用前进行质量检测 关键试剂包括核酸提取试剂,RNase,蛋白酶 K.阴性对照标准物质,阳性对照标准物质、Taq酶、各种限制性内切酶、引物、探针,菌种、阳性质粒 洼试剂质检包括D有无污染,是否存在假阳性?使用弱阳性对照标准物质检测试剂的扩增效果 B.3.4防止污染 B.3.4.1 严格实验室分区 按B.2中的规定,对实验室进行功能分区,各区的工作服,实验用具和实验记录本应区分标记,不能 混用 13
GB/T30989一2014 c 附 录 规范性附录 高通量基因测序过程 待测核 酸片段 将1的矩阵点样于2 将点样后的装入反应小室，并设置到 基因测序权的样品台中，开始进行测序 DNA 收集5 DNA 信号分析 number name tag 20121008-G1 aaaaagatac 20121008-G2 aaagatac 20121008-G3aaaaagatag 2O121O8-G4 aaaaagatat 说明 微珠; 错定引物; 荧光信号; 基因序列信息 玻片; -荧光探针; 采集到的荧光图 图C.1高通量基因测序过程示意图 14
GB/30989g一2014 参 考 文 献 [1] GB/T2985一2008生物显微镜 [2 GB/T6379.1一2004测量方法与结果的准确度(正确度与精密度第1部分:总则与定义 [a GB/T19495.1一2004转基因产品检测通用要求和定义 O GB/T19495.2一2004转基因产品检测实验室技术要求 GB/T19626一2005DNA防伪技术产品通用技术要求 GB/T20929一2007嗜酸氧化亚铁硫杆菌及其活性的基因芯片检测方法 GB/T25168一2010畜禽cDNA文库构建与保存技术规程 [8 畜禽基因组BAC文库构建与保存技术规程 GB/T251702010 D 畜禽cDNA文库构建与保存技术规程 GB/T251682010 毛细管电泳仪 uo JJG964一2001 [11 转基因植物及其产品检测通用要求 NY/T6722003 [12 进出口危险化学品安全试验方法第21部分;琼脂糖凝胶电泳 SN/T2497.212010 试验 [13 电泳装置 YY/T0087一2004 [14]全国科学技术名词审定委员会.科学技术名词释义 [15]Is05725-1-1994Accuracytruenessandpreeisionofmeasurementnmethodsandl resultsPartl:Generalprinciplesanddefinitions

高通量基因测序技术规程GB/T30989-2014

高通量基因测序（High-throughput sequencing）技术是指一种大规模、高效率的基因测序技术，它能够以前所未有的速度和精度对基因组进行测序。相比传统测序技术，高通量基因测序技术更为快捷、准确、可重复性更好，其应用领域也更加广泛。

GB/T30989-2014是中国国家标准化组织于2014年发布的高通量基因测序技术规范。该规范包含了高通量基因测序技术所需的各项规程和标准，旨在提高中国在该领域内的技术水平和竞争力，并保证研究结果的可靠性和准确性。

根据GB/T30989-2014的规定，高通量基因测序技术应该遵循以下几个规程：

• 样本的准备和处理，包括DNA/RNA的提取、纯化和质量控制；
• 文库构建，包括文库的设计、建立和纯化；
• 测序平台的选择和操作，包括Illumina、Ion Torrent等；
• 数据分析和解读，包括序列比对、SNP calling、CNV检测、变异注释等。

在以上规程中，各项细节的把握都是非常关键的。例如，在样本的准备和处理方面，应该选择尽可能少的方法和步骤，并保证每一步骤的可重复性和标准化；在文库的构建方面，应该选择适合自己研究目的的文库类型，并根据其特点进行优化和改良；在测序平台的选择方面，则需要考虑到样本数量、质量和研究预算等多方面因素。

总的来说，GB/T30989-2014为高通量基因测序技术的研究者和从业者提供了一套行之有效的技术规范，引导其进行科学严谨的基因测序研究。

高通量基因测序技术规程的相关资料

和高通量基因测序技术规程类似的标准

GB/T30989-2014

高通量基因测序技术规程

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