河豚鱼和鳗鱼中阿莫西林、氨苄西林、哌拉西林、青霉素G、青霉素V、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林、双氯西林残留量的测定液相色谱-串联质谱法

河豚鱼和鳗鱼中阿莫西林、氨苄西林、哌拉西林、青霉素G、青霉素V、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林、双氯西林残留量的测定液相色谱-串联质谱法

国家标准 GB/T22952一2008 河豚鱼和鳗鱼中阿莫西林、氨茉西林 皈拉西林、青霉素G、青霉素V苯陛西林 氯陛西林、,夫西林、双氯西林残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determinationofamosieilin，ampieilinpiperacilin，pemieiinG penieinV，oxaeilhn，closaeilhm，naftein.dieloxaeiinresitduesin fuguandeel一LC-MS-MSmethod 2008-12-31发布 2009-05-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T22952一2008 前 言 本标准的附录A、附录B为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口 本标准起草单位;秦皇岛出人境检验检疫局 本标准主要起草人:李学民、母健、刘晓茂、曹彦忠、刘亚新、庞国芳
GB/T22952一2008 河豚鱼和鳗鱼中阿莫西林、氨节西林、 皈拉西林、,青霉素G,青霉素V苯陛西林、 氯陛西林、綦夫西林、双氯西林残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了河豚鱼和鳗鱼中阿莫西林、氨节西林、哌拉西林、青霉素G,青霉索V,苯幽西林、氯幽 西林,葬夫西林,双氯西林九种青霉素类药物残留量的液相色谱-串联质谱测定方法 本标准适用于河豚鱼和鳗鱼中阿莫西林、氨节西林、噪拉西林、青霉素G青霉素v、苯哗西林、氯哗 西林、綦夫西林、双氯西林九种青霉素类药物残留量的测定 本标准方法的检出限:恭夫西林、青霉素G、哌拉西林、青霉素V,苯哗西林为1.04g/kg;阿莫西 林、氨节西林、氧陛西林、双氧西林为2.04g/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度正确度与精密度第1部分:总则与定义 GB/T6379.l一2004，IsO5725-1:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度正确度与精密度第2部分;确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法(GB/T6379.2一2004,Iso5725-2:1994,IDT GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008,IS03696:1987,MOD 原理 试样中青霉素类药物残留用乙睛提取,旋转蒸发除去乙睛,用水定容,液相色谱-串联质谱仪测定， 外标法定量 试剂和材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯 水:GB/T6682,一级水 4.2甲醇:色谱纯 43乙睛;色谱纯 4.4正已炕 4.5乙晴饱和的正己烧:取100ml正己婉(4.4)和50ml乙睛(4.3)于250ml分液漏斗中,振摇 1min，静置分层后,弃掉乙睛 4.6氨水 乙睛提取液:将100mL乙睛与0.6mL氨水(4.6),充分混合 4.8标准物质:阿莫西林(CAs:26787-78-0)、氨节西林(CAs:69-53-4)、哌拉西林(CAs:59703-84-3)
GB/T22952一2008 青霉素G(CAs:69-57-8)、青霉素VCAs:132-98-9),苯陛西林(CAs:7240-38-2、氯陛西林(CAs:642 78-4),莽夫西林(CAS;7177-50-6),双氯西林(CAs;13412-64-1),纯度>99% 4.91.0mg/mL九种青霉素类药物标准储备溶液;准确称取适量的每种标准物质(4.8),分别用水配 制成浓度为1.0mg/ml的标准储备溶液 储备液贮存在一18C冰柜中 4.10九种青霉素类药物标准工作溶液;根据需要吸取适量的每种青霉素类药物标准储备溶液(4.9). 用水稀释成适当浓度的混合标准工作溶液 4.11滤膜:0.2Am. 仪器 5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪;配有电喷雾离子源 5.2分析天平;感量0.1nmg,0.01g 5.了微量让射器;5l.o,L 5.4 刻度样品管:5mL,精度为0.1ml 5 .5 均质器 5.6高速冷冻离心机:带有50ml具塞离心管,转速达到10000r/min以上 试样制备与保存 6.1试样的制备 从全部样品中取出有代表性样品约1kg,充分搅碎,混匀,均分成两份,分别装人洁净容器内 密 封后作为试样.标明标记 在抽样和制样的操作过程中,应防止样品受到污染或发生残留物含量的 变化 试样的保存 将试样于一18C保存 测定步骤 7.1试样溶液的制备 称取5g试样(精确到0.01g)置于50mL离心管中,加人20mL乙晴提取液(4.7),使用均质器 5.5)均质1min,提取液使用高速冷冻离心机(5.6)在10C,10000r/min离心10nmin,把上层提取液 移至另一离心管中 用15mL乙睛提取液重复提取一次,合并两次的提取液,并加人10ml乙晴饱和 的正已炕(4.5),振荡1nmin,弃掉正已熔 把提取液移至100mL 鸡心瓶中,在40C旋转燕发除去乙 晴 加人2ml.水溶解残渣,混匀,样液过0.2m滤膜(4.ll),供液相色谱-串联质谱仪测定 7.2空白样品添加标准混合工作溶液的制备 分别准确移取适量九种青霉素类药物标准混合工作溶液(4.10),添加到5.0只样品中,按照7.1步 骤操作,配制恭夫西林,青霉素G,眼拉西林,青霉素V、苯陛西林浓度为1.04g/kg、2.0pE/kg、 4.04g/kg、10E/kg;阿莫西林、氨节西林、氯幽西林、双氯西林浓度为2.04g/kg、4.0E/ke 8.04g/kg、204g/kg四个样品添加标准混合工作溶液,供液相色谱-串联质谱仪测定 7.3测定条件 7.3.1液相色谱参考条件 色谱柱;zORBAXsBC.3.5am.150mm×2.1mm(内径或相当者; a b 流动相组成,流速及梯度程序见表1; c 柱温:30C; d 进样量:20L
GB/T22952一2008 表1流动相梯度程序及流速 时间/min 流速/(AlL/min 水含0.1%乙酸)/% 乙睛/% 0.00 200 95.0 5.0 95.o 200 5.0 3.00 3,01 200 50,0 50.0 13.00 200 50.0 50.0 13.01 200 25,0 75.0 18.00 200 25.0 75.0 18.01 200 95.0 5.0 25.00 200 95.0 5.0 7.3. 质谱参考条件 a)离子源:电喷雾离子源; b) 扫描方式:正离子扫描; 检测方式:多反应监测; 电喷雾电压;5500 心 雾化气压力;0.055MPa; 气帘气压力:0.079MPa; 辅助气流速;6L/min; g 离子源温度;400C h 定性离子对、定量离子对和去簇电压(DP),碰撞气能量(CE)见表2 九种青霉素类药物的定性离子对,定量离子对,去簇电压、碰撞气能量 表2 定量离子对 定性离子对 化合物中文名称 化合物英文名称 碰撞气能量/V 去簇电压/八V m/:) m/) 366/114 30 221 阿莫西林 amoxieillin 366/208 366/208 350/192 23 氨节西林 20 ampieillin 350/160 20 350/16o 518/160 27 35 518/143 喉拉西林 piperacillin s 25 518/143 335/16o 20 青霉素G penieillinG 335/160 23 335/176 351/16o 青霉素V penieillin 351/160 40 351/192 402/16o 20 oxacilinm 23 苯陛西林 402/160 402/243 436/160 cloxacillin 436/160 20 氯陛西林 2 436/277 415/199 23 nafeillin 415/199 2:3 莽夫西林 52 415/171 470/160 20 20 dicloxaeilin 470/160 双氯西林 2 470/311
GB/T22952一2008 7.4液相色谱-串联质谱测定 7 4.1定性测定 选择每种待测物质的1个母离子.2个以上子离子,在相同试验条件下,样品中待测物质的保留时 间,与基质标准溶液中对应物质的保留时间偏差在士2.5%之内;样品谱图中各定性离子相对丰度与浓 度接近的基质标准溶液的谱图中离子相对丰度相比,偏差不超过表3规定的范围,则可判定为样品中存 在对应的待测物 表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 以%表示 相对离子丰度K K>50 20GB/T22952一2008 表4九种青霉素类药物添加浓度范围及重复性和再现性方程单位为微克每千克 化合物名称 添加浓度范围 重复性限r 再现性限R 葬夫西林 gR=0.971 -0.6843 121以" 1.010 lgr=0.8315lgm一1.0541 1.010 青霉素G -0.8373gm一1.0657 R=0.9763lg"-0.6907 lgr= lg1 g管0.8382g历-.080 1.010 gR=0,9738lgm一0,6887 眼拉西林 苯哗西林 1.0~10 lgr=0.8202lgm-1.0640 lgR=0.9772lgm-0.691 青霉素V 1.0~10 lgr=0.8481lgm一1.0388 lgR=0.9697lgm-0,669 阿莫西林 2.020 lgr=0.8303lgm-l.0072 lgR=0.9778lgm-0.6846 氨节西林 2.0~20 lgr=0.8305lg朋-1.0055 gR=0.9322lgm-0.657 氯唾西林 2.0~20 lgr=0.8194lgm-1.001？ gR=0.9743gm-0.680o 2.020 1.0151 双氧氯西林 lgr=0.8384lgm一 gR=0.9731lgm-0,6789 注:m为两次测定结果的算术平均值 如果两次测定值的差值超过重复性限r,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定 再现性 在再现性试验条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R,试样中九种青霉素 类药物添加浓度范围及再现性方程见表4
GB/T22952一2008 附 录A 资料性附录 标准物质的多反应监测(MRM)色谱图 九种青霉素类药物标准物质的多反应监测(MRM)色谱图见图A.1 2.0o 阿莫西林 1/min 2.00 氨西林 1/min 9.37 嘱拉西林 min 9,8O 青衔素G lmin 10.12 青霉素Vy l/minm 10.42 苯哗西林 lmin 10.81 氧陛西林 t/min 10.99 綦夫西林 1/min 11.52 双西林 1/min 图A.1九种青霉素类药物标准物质的多反应监测MR)色谱图
GB/T22952一2008 附 录 B 资料性附录 回 收 率 九种青霉素类药物添加浓度及其平均回收率的试验数据见表B.1 表B.1九种青霉素类药物添加浓度及其平均回收率的试验数据 化合物名称 加浓度/4g/kg 平均回收率/% 1.0 89.2 2.0 89.6 茶夫西林 90.8 4.0 94.8 10.0 9.2 1.0 2.0 97.0 青霉素G 4.0 89.7 10.0 o6." 元 .0 2.0 91.5 噪拉西林 4.0 94.0 10.0 89.9 92.3 1.0 2 91.8 苯幽西林 4.0 2. a.0 3 W I.0 2.0 102.6 青霉素V 86.9 4.0 10,0 2 82.3 2.0 4.0 84.1 阿莫西林 8.0 88.7 20.0 85.3 2.0 86. 8. 4.0 氨乍西林 8.0 83.3 20.0 87.2" 2.0 87.1 4.0 89.6 氯陛西林 8.0 95.6 20.o 95.7 86.2 2.0 4.0 92.3 双氧西林 8.0 90.1 20.0 91.2