海洋鱼低聚肽粉

海洋鱼低聚肽粉

国家标准 GB/T22729一2008 海洋鱼低聚肽粉 Oligopeptidespowderofmarineish 2008-12-31发布 2009-08-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T22729一2008 前 言 本标准的附录A为规范性附录 本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出 本标准由全国特殊膳食标准化技术委员会归口 本标准起草单位:食品发酵工业研究院、浙江海氏生物科技有限公司、北京中食海氏生物技术 有限公司、北京同仁堂健康药业股份有限公司、江南大学分析测试中心 本标准主要起草人;蔡木易、易维学,陈岩、戴军,张宏,徐亚光、谷瑞增、张如民
GB/T22729一2008 海洋鱼低聚肽粉 范围 本标准规定了海洋鱼低聚肽粉的产品分类、技术要求、试验方法、检验规则以及标签、包装、运输和 贮存 本标准适用于海洋鱼低聚肽粉产品的生产,检验和销售 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB2733鲜、冻动物性水产品卫生标准 GB/4789.2食品卫生微生物学检验菌落总数测定 GB/T4789.3 食品卫生微生物学检验大肠菌群测定 GB/T4789 食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验 GB/T4789.5食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验 (B/T4789.10食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验 GB/T4789.15食品卫生微生物学检验霉菌和酵母计数 GB/T5009.3" 食品中水分的测定 食品中灰分的测定 GB/T5009. 食品中蛋白质的测定 GB/T5009.5 GB/T5009.11食品中总呻及无机呻的测定 GB/T5009. 食品中铅的测定 12 GB/T5009.15食品中的测定 食品中总汞及有机汞的测定 GB/T5009.17 GB/T5009.92食品中钙的测定 GB/T5009.124食品中氨基酸的测定 GB/T9695,23肉与肉制品羚脯氨酸含量测定 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准 3.1 海洋鱼低聚肚粉 oligpeptidespowderofmarinefish 以海洋鱼皮、鱼骨或鱼肉为原料,用酶解法生产的、相对分子质量低于1000u的低聚肽(短肽)为 主要成分的粉末状产品 3.2 胶原collagen 鱼、牛、猪等动物的皮、骨等组织中一类含特有的胫脯氨酸的无支链纤维蛋白质
GB/T22729一2008 产品分类 4.1分类原则 产品按原料分为三类 4.2类别 4.2.1海洋鱼皮胶原低聚肽粉 以海祥鱼皮为原料生产的低聚肽粉产品 4.2.2海洋鱼骨胶原低聚肽粉 以海洋鱼骨为原料生产的低聚肽粉产品 4.2.3海洋鱼肉低聚肽粉 以海洋鱼肉为原料生产的低聚肽粉产品 技术要求 5.1原辅材料 海洋鱼皮、海洋鱼骨、海洋鱼肉:应符合GB2733规定的要求 其他原辅材料应符合相应的国家标 准或行业标准 感官特性 . 2 产品的感官特性应符合表1的规定 项 目 特 性 形 态 粉末状,无结块 色 泽 白色或淡黄色 无正常视力可见的外来杂质 3 5. 理化指标 产品的理化指标应符合表2的规定 表2 指 标 项 海洋鱼皮胶原低聚肽粉 海洋鱼骨胶原低聚肽粉海洋鱼肉低聚肽粉 总氮(以干基计/% 14.5 13.5 13.5 低聚肽(以干基计/% 85.0 75.0 80.0 3.0 2.0 羚脯氨酸/% 钙 400 7mg/kg 灰分/% 7.0 7.0 相对分子质量小于1 u的蛋白质 000 85.0 水解物所占比例/% 干燥失重 /% 7.0 5 污染物指标 产品中污染物指标应符合表3的规定
GB/T22729一2008 表3 今 指 标 无机砂/mg/kg 0.5 铅/(mg/kg 0.5 /mg/kg 0.1 /kg 0.5 甲基求/(mg/" 5.5微生物指标 产品中微生物指标应符合表4的规定 指 标 项 菌落总数/CFU/g 5000 大肠菌群/MPN/100g 30 霉菌CFU/e) 25 25 醉酵母/CFU/g 致病菌(沙门氏菌,志贺氏菌,金黄色葡萄球菌》 不得检出 试验方法 6 感官检验 称取10g样品,散放在白色搪瓷平盘中,在自然光下直接观察样品的形态、色泽和杂质 6.2总氮 按照GB/T5009.5规定的方法测定 测定结果不进行蛋白质系数换算,以总氮质量分数表示 6.3 低聚肽 6.3.1方法提要 低分子质量的蛋白质水解物包括低聚肽及游离氨基酸)可溶于三氯乙酸溶液;高分子质量的蛋白 质在三氢乙酸溶液中易沉淀 样品经三氢乙酸溶液溶解后,离心分离出沉淀蛋白质,收集离心清液 按 照GB/T5009.5规定的方法测定离心清液的酸溶蛋白质水解物含量,清液的酸溶蛋白质水解物含量减 去游离氨基酸含量得到低聚肽的含量 6.3.2分析步骤 6.3.2.1酸溶蛋白质水解物含量的测定 称取2g(精确至0.0o1g)样品,加人10m15%三氯乙酸溶液,混合均匀,静置10min 将样品溶 液在4000r/min下离心10min后,取全部离心清液,按GB/T5009.5规定的方法测定清液的蛋白质 水解物含量,计算出样品中酸溶蛋白质水解物含量 蛋白质换算系数为6.25,检验结果根据样品的干 燥失重,折算为干基 6.3.2.2游离氨基酸含量的测定 6.3.2.2.1氨基酸自动分析仪测定法 称取0.02g一0.03g样品,精确至0.0001g,用3.5%磺基水杨酸溶液溶解均匀 将样品溶液转移 至50mL容量瓶中,定容 将样品溶液在转速为4000r/min离心机上离心5min,取离心清液,再用 0.45m微孔滤膜过滤离心清液,将滤液转移至50nml容量瓶中，定容摇匀备用，然后按照 GB/T5009.124规定的方法,用氨基酸自动分析仪测定其游离氨基酸含量
GB/T22729一2008 6.3.2.2.2高效液相色谱仪测定法 6.3.2.2.2.1方法提要 用三氧乙酸沉淀蛋白质后,以邻苯二甲醛(OPA)和氧甲酸苟甲酯(FMOC-Cl)分别作为一级氨基 酸和二级氨基酸的衍生反应试剂,采用柱前自动衍生化反相高效液相色谱法测定海祥鱼低聚肽粉中的 游离氨基酸总量 6.3.2.2.2.2仪器 a)高效液相色谱仪;配四元梯度泵,紫外检测器,自动进样器和化学工作站软件及在线脱气机 分析天平;感量0.0001g b c)pH计 6.3.2.2.2.3试剂 三乙胺、四氢峡喃、乙酸、棚酸,均为分析纯;甲醇、乙睛、氨基酸标准品、邻苯二甲醛(OPA、氯甲酸 劳甲醋(FMOC-C)均为色谱纯;超纯水 6.3.2.2.2.4测定 称取样品0.5g,精确至0.0001g,于25mL容量瓶中,加5%三氯乙酸10mL沉淀2h,定容摇匀 过滤,于10000r/min离心15nmin,取上清液上机,采用外标法进行测定 色谱条件;分析柱;HypersilAA-ODS,5pm,200mm×2.1mm(内径) 流动相:A液;含0.018% 三乙胺(TEA)的20mmol/儿乙酸钠缓冲液,用稀乙酸调至pH7.2,加0.3%四氢吠喃(THF);B液 20%的100mmol/几乙酸钠缓冲液,用稀乙酸调至pH7.2,加40%乙睛和40%甲醇 梯度洗脱程序 0min时A液为100%,在17min内B液由0%至60%;18min时B液为100%,并保持至24min; 5min时B液回到0% 流速.18.1min前为0.45mL/min;18.5min升至0.8mL/min,并保持至 紫外检测;测定 23.9min;24min降回至0.45ml/min 一级氨基酸用338nm,二级氨基酸用262nm 15min后) 荧光检测测定一级氨基酸激发波长340nm,发射波长450nm;l4.5min后将波长切换 到266nm(激发)和305nm(发射)进行二级氨基酸的测定 6.3.3结果计算 低聚肽含量X按式(1)计算 X=X？一X 式中: 样品中低聚肽含量以干基计),%; 样品中酸溶蛋白质水解物含量(以干基计),%; X -样品中游离氨基酸含量(以干基计),% 6 相对分子质量小于1000u的蛋白水解物所占比例 按照附录A规定的方法测定 6.5羚脯氨酸 按照GB/T9695.23规定的方法测定 6.6 钙 按照GB/T5009.92规定的方法测定 干燥失重 6 按照GB/T5009.3规定的方法测定 灰分 按照GB/T5009.4规定的方法测定 无机呻 按照GB/T5009.11规定的方法测定
GB/T22729一2008 6.10 铅 按照GB/T5009.12规定的方法测定 6.11锡 按照GB/T5009.15规定的方法测定 6.12甲基汞 按照GB/T5009.17规定的方法测定 6.13菌落总数 按照GB/T4789.2规定的方法检验 6.14大肠菌群 按照GB/T4789.3规定的方法检验 6.15霉菌和酵母 按照GB/T4789.15规定的方法检验 6.16致病菌 沙门氏菌、志贺氏菌金黄色葡萄球菌分别按照GB:/T4789.4,.GB/T4789.5,GB/T4789.10规定 的方法检验 检验规则 检验分类 出厂检验 出厂检验的项目包括;感官特性、总氮、低聚肽、相对分子质量小于1000u的蛋白质水解物所占比 例、干燥失重、灰分(海洋鱼骨胶原低聚肽粉除外)、菌落总数、大肠菌群 7.1.2型式检验 型式检验的项目包括5.2,5.3,5.4、5.5中规定的全部项目 常年生产的产品每年应进行一次型式检验,但有下列情况之一时亦应进行型式检验 -新产品投产时 原料、工艺有较大改变时 长期停产后恢复生产时; 出厂检验结果与上次型式检验结果有较大差异时 -质量监督机构提出进行型式检验的要求时 7.2抽样 7.2.1组批 同一班次生产的，同一类型的产品为一批 7.2.2抽样方法和数量 从每批产品中随机抽取不少于3个最小包装单位样品,用取样工具伸人每袋的3/4处取样,所取试 样不得少于100g 将采取的试样混匀,装人清洁、干燥、带磨口玻璃瓶中,瓶上粘贴标签注明生产班次、产品类别、批 号、取样日期和地点 微生物检验按无菌操作取样 7.3判定规则 7.3.1出厂检验判定和复检 出厂检验项目全部符合本标准要求的产品判为合格品 7.3.1.2出厂检验项目中微生物指标不符合本标准或发现恶性杂质(如玻璃、金属、昆虫等),不得复 检,判为不合格品
GB/T22729一2008 7.3.1.3出厂检验项目中除7.3.1.2提到的指标外,其他指标不符合本标准,可在同批产品中加倍抽 样,对不合格项目进行复检,复检结果仍不符合本标准规定,判为不合格品 7.3.2型式检验判定和复检 7.3.2.1型式检验项目全部符合本标准要求的产品判为合格品 7.3.2.2型式检验项目中微生物指标不符合本标准或发现恶性杂质如玻璃、金属、昆虫等),不得复 检,判为不合格品 7.3.2.3型式检验项目中除7.3.2提到的指标外,其他指标不符合本标准,可在同批产品中加倍抽样， 对不合格项目进行复检,复检结果仍不符合本标准规定,判为不合格品 标签、包装、运输和贮存 8.1标签 产品标签上应标示产品名称净含量制造者及经销者的名称和地址、生产日期、生产批号、保质 期产品标准号等 产品名称应符合第4章中的要求 8.1.2 8.2包装 包装容器应符合食品容器和包装材料的卫生标准 8.3运输 运输产品的工具、车辆应清洁,卫生、干燥,无污染物 运输产品过程中,应有遮盖,防雨防晒,不能 与有毒、有害、有异味的物品混运 贮存 品不应露天堆放 成品仓库应清洁、干燥,通风无鼠虫害 8.4.1 4.2 “品堆放应有垫板,离地10cm以上,离墙20cn以上 产 8 8.4.3产品不应与有毒、有害、有异味、易腐败变质或潮湿的物品同仓库存放
GB/T22729一2008 附 录A 规范性附录 相对分子质量小于1000u的蛋白质水解物所占比例 高效凝胶过滤色谱法》 方法提要 相对分子质量小于1000u的蛋白质水解物包括低聚肽和少量游离氨基酸)所占比例,采用高效 凝胶过滤色谱法测定 即以多孔性填料为固定相,依据样品组分分子体积大小的差别进行分离,在肽键 的紫外吸收波长220nm条件下检测,使用凝胶色谱测定相对分子质量分布的专用数据处理软件(即 GPC软件),对色谱图及其数据进行处理,计算得到蛋白质水解物的相对分子质量大小及分布范围,进 而得到相对分子质量小于1000u的蛋白质水解物包括低聚肽和少量游离氨基酸)所占比例 A.2试剂 A.2.1乙睛:色谱纯 A.2.2三氟乙酸;分析纯 A.2.3水;超纯级或二次燕憎水 相对分子质校正曲线所用标准品 A.2.4 ochrome,M.12500 A.2.4.1细胞色素Ceyyo A.2.4.2抑酞酶(aprotinin,M,6500) 4. 杆菌酶(baeitracin,M,1450) 2. 3 2.4.4乙氨酸-乙氨酸-酪氨酸-精氨酸(M,451) A.2.4.5乙氨酸-乙氨酸-乙氨酸(M189) A.3仪器和设备 A.3.1高效液相色谱仪:配有紫外检测器和含有GPC数据处理软件的色谱工作站或积分仪 A.3.2流动相真空抽滤脱气装置 A.3.3超声波振荡器 A.3.4分析天平:感量0.0001lg A.4色谱条件与系统适应性实验 色谱柱:TSKgelG2000swXL300mm×7.8mm或性能与此相近的同类型其他适用于测定蛋白 质和多肽的凝胶柱 流动相:乙睛:水:三氟乙酸为45:55:0.1(体积比). 检测波长:UV220 nm 流速;0.5mL/min. 柱温:30C 进样体积.10L 为使色谱系统符合检测要求,规定在上述色谱条件下,凝胶色谐柱的柱效即理论塔板数(N)按三肽 标准品(乙氨酸-乙氨酸-乙氨酸)峰计算不低于5000,低聚肽的分配系数(K)应在01之间
GB/T22729一2008 A.5相对分子质量校正曲线制作 分别用流动相配制成0.1%质量浓度)的上述不同相对分子质量的肽标准品溶液,用孔径为 0.2m~0.5m聚四氟乙烯或尼龙过滤膜过滤后分别进样,得到系列标准品的色谱图 以相对分子质 量的对数(IgM.,)对保留时间作图或作线性回归得到相对分子质量校正曲线及其方程 A.6样品制备 称取样品20.0mg于10mL容量瓶中,用流动相定容至刻度,超声振荡10min,使样品充分溶解混 匀,用孔径为0.2m~0.5m聚四氟乙烯或尼龙过滤膜过滤后,上机进样 相对分子质量的计算 将第A.6章制备的样品溶液在上述色谱条件下分析 然后用GPC数据处理软件,将样品的色谱 数据代人校正曲线方程中进行计算,即可得到样品中肽的相对分子质量及其分布范围 用峰面积归一 化法计算相对分子质量范围在1000u以下的蛋白质水解物的峰面积相对百分比之和