饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定液相色谱质谱联用法

饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定液相色谱质谱联用法

国家标准 GB/T22147一2008 饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑 特罗的测定液相色谱质谱联用法 Determinationofsalhutamol，raetopamineandcenbuterolinfeeds一 Liquidchromatography-massspeetrometry 2008-06-27发布 2008-10-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T22147一2008 前 言 本标准由农业部提出 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口 本标准负责起草单位;农业大学,农业部饲料效价与安全监督检验测试中心(北京) 本标准主要起草人:张丽英、常碧影,贺平丽、董涛、杨文军、王宗义
GB/T22147一2008 饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑 特罗的测定液相色谱质谱联用法 范围 本标准规定了同步测定饲料中8激动剂沙丁胺醇,莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的液相色谱质谱联 用法(LC-MS)法 本标准适用于配合饲料,浓缩饲料和添加剂预混合饲料中沙丁胺醉,莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的 测定 本标准中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的检测限均为0.01mg/kg,定量限均为 0.05mg/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一1992,neqISO3696:1987 GB/T14699.1饲料采样 原理 试样经磷酸甲醇溶液提取,用固相萃取柱净化后,经反相C柱梯度洗脱分离,采用质谱检测器以 三种物质的质量色谱峰保留时间和特征离子定性、确证,并用外标法定量 试剂和溶液 除特殊注明外,本标准所用试剂均为分析纯 水符合GB/T6682二级用水规定 乙晴;色谱纯 4.2甲醇 4.3磷酸甲醉提取液;向3.92些浓磷酸中加人200mL水,再用甲醇定容到1000mL 冰乙酸游液(2%)10mL.冰乙酸用水稀释至500ml 4.4 .9H.o)用水溶解,并定穿至350ml 4.5硫化钠溶液(1g/L);称取0.250g硫化纳(NaS 4.6SPE小柱淋洗液与洗脱液 4.6.1淋洗液;移取9mL浓盐酸于1000ml水中,摇匀 4.6.2洗脱液;移取10mL25%的氨水于100ml容量瓶中,用甲醉定容 4.7流动相 A液;甲酸铵3.65g溶于500ml去离子水中,用甲酸调pH至3.80 B液:乙睛,色谱纯 4.8沙丁胺醇,莱克多巴胺和盐酸克仑特罗标准溶液 4.8.1标准贮备液;称取沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗(标准品含量均>98%)各50mg分别 于50ml棕色容量瓶中,用甲醉醇溶解,并定容至刻度 于冰箱中4C保存,保存期一个月 4.8.2标准工作中间液:移取沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗标准贮备液(4.8.l)各1nmL于 100mL容量瓶中,用冰乙酸溶液(4.4)定容
GB/T22147一2008 4.8.3标准工作液;移取沙丁胺醇,莱克多巴胺和盐酸克仑特罗标准工作中间液(4.8.2)各0.5,l,5, 10mL于100m容量瓶中,用冰乙酸溶液(4.4)定容 仪器和设备 5.1分析天平;感量0.0001g 5.2聚丙烯离心管.50ml. 5.3恒温水浴;可保持水温至55C和75c 5.4涡旋混合器 5 酸度计:准确至0.001 5 5 .6 离心机 5.7混合型阳离子交换sPE小柱 5.8固相萃取(sPE)诚压净化系统 5.9液相色谱/质谱联用仪 试样制备 按照GB/T14699.1规定方法采样,采取样品量至少500g,以四分法缩减至200g,粉碎过40目 筛,充分混匀,装瓶,备用 测定 7.1试样前处理 试样提取 准确称取适量试样配合饲料5g,浓缩饲料2g,添加剂预混合饲料1g,准确至0.0001g)于 50mL离心管,用磷酸甲醇提取液(4.3)40mL,振摇提取30min,然后于离心机上以3000r/min离心 10min 上清液倒人100mL容量瓶,残渣再用上述提取液(4.3)40mL、20mL,重复提取2次,每次振 摇5min~10min,于离心机上以3000r/min离心10min后,合并上清液于100ml容量瓶中 最后用 提取液(4.3)定容,混匀,过滤 7.1.2净化 7.1.2.1配合饲料和浓缩饲料;吸取一定体积试样提取液滤液(配合饲料1mL.,浓缩饲料0.5mL)于 5mL试管中,置55C水浴中以氮气吹至近干 同时将固相萃取柱(5.7)固定于SPE减压净化系统 (5.8)上,依次用1mL甲醇和1ml水活化、平衡 向试管中加人冰乙酸溶液(4.4)1mL,涡旋振荡,然 后全部加到小柱上,控制过柱速度不超过的1mL/min,分别用1mL淋洗液(4.6.1和1nml甲醇淋洗 洗脱液于55C水浴中,用氨气吹 -次,最后用1ml洗脱液(4.62)洗脱洗脱速度不超过1nml/min 干,准确加人1.00mL冰乙酸溶液(4.4)充分溶解混匀,并转移到上机样品瓶中,盖好,备用 7.1.2.2添加剂预混合饲料;取提取液0.2mL,加硫化钠溶液(4.5)0.1mL,涡旋振荡,然后加人冰乙 酸(4.4)4mlL..涡旋振荡,于离心机上以30o0r/min离心10min,再取1nl上清液按照7.1.2.1步猴 过固相萃取柱(5.7)净化 7.2测定 7.2.1色谱条件 色谱柱;C柱,内径2.1mm,柱长150mm,填充物粒度3Am. 柱温:室温 流动相;流动相A:甲酸铵缓冲溶液(4.7),流动相B;:乙睛(4.1 梯度洗脱程序见表1
GB/T22147一2008 表1梯度洗脱程序 时间/min 流动相A% 流动相B/% 98 70 30 15 50 50 每次进样间隔用流动相A十B=98十2,平衡10min 流速;0.20mL /min 进样体积20AL 7.2.2质谱条件 采用电喷雾正离子(EsI+)模式做选择离子检测,选择离子为 沙丁胺醇:m/z240,m/z222,m/z166 莱克多巴胺;m/z302,m/2284,m/z164; 盐酸克仑特罗;m/z277,m/z259,m/2203 源温度:120C 取样锥孔电压;25V 萃取锥孔电压;5V 脱溶剂氮气温度;300C 脱溶剂氨气流速:300L/h 7.2.3定性定量方法 7.2.3.1定性 通过样品总离子流色谱图上沙丁胺醇(m/z240,m/z222,m/z166),莱克多巴胺(m/z302,m/z284 m/2164)和盐酸克仑特罗(m/z277,m/2259,m/.203)的保留时间和各色谱蜂对应的特征离子,与标准 品相应的保留时间和各色谱峰对应的特征离子进行对照定性 样品与标准品保留时间的相对偏差不大 于0.5% 每种药物的3个特征离子基峰百分数与标准品允许差分别为:当基峰百分数>50%时,允许 差士20%;当基峰百分数20%一50%时,允许差士25%;当基峰百分数10%一20%时,允许差士30%;当 基峰百分数<10%时,允许差士50% 7.2.3.2定量 采用M十1的准分子离子的色谱峰面积做单点校正定量 结果的计算与表述 试样中药物含量(X)以质量分数计,数值以毫克每千克(mg/kg)表示,按式()计算 X= ×n×c Am 式中: 待测试样测得的特征离子色谱峰面积; A 标准溶液药物的特征离子色谐峰面积 试样质量,单位为克(g); 77mn -稀释倍数;
GB/T22147一2008 标准溶液中药物的浓度,单位为微克每毫升(4g/mL 测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留3位有效数字 允许差 同一实验室同一操作人员完成的两个平行测定的相对偏差不大于15%