酵母产品质量要求第2部分:酵母加工制品

酵母产品质量要求第2部分:酵母加工制品

国家标准 GB/T20886.2一2021 代替GB/T23530一2009 酵母产品质量要求 第2部分:酵母加工制品 Qualityrequirementsforyeastproduets Part2:Processedyeastproducts 2021-12-31发布 2022-07-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标涯花警理委员会国家标准
GB;/T20886.2一2021 前 言 本文件按照GB/T1.1一2020<标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草 本文件是GB/T20886《酵母产品质量要求》的第2部分 GB/T20886已经发布了以下部分 -第1部分:食品加工用酵母 第2部分;酵母加工制品 本文件代替GB/T23530一2009《酵母抽提物》,与GB/T235302009相比,主要技术变化如下 -增加了酵母加工制品酵母水解物、核昔酸型酵母水解物、风味型酵母水解物、酵母细胞壁、培 养基用酵母加工制品的术语和定义(见3.1,3.53.9); 更改了酵母抽提物定义见3,2,2009年版的3,1.1); 更改了“I+G型酵母抽提物”的名称,改为“核甘酸型酵母抽提物”(见3.3,2009年版的4.2); 更改了酵母抽提物分类[见5.la),2009年版的第4章]; -增加了按应用进行的产品分类(见5.2) -增加了酵母水解物的理化要求(见6.2.3); -增加了风味型酵母水解物的理化要求(见6.2.4) -增加了酵母细胞壁的理化要求(6.2.5); 增加了培养基用酵母加工制品的理化要求(见6.2.6》 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 本文件的发布机构不承担识别专利的责任 本文件由全国食品工业标准化技术委员会(sAc/Tc64)提出并归口 本文件起草单位;安琪酵母股份有限公司大连珍奥生物技术股份有限公司、广西一品鲜生物科技 有限公司、珠海天香苑生物科技发展股份有限公司、凯爱瑞配料贸易(上海)有限公司、山东圣琪生物有 限公司、帝斯曼()有限公司、英联马利(北京)食品销售有限公司、食品发酵工业研究院有限 公司 本文件主要起草人;武竹英、,陈蓉、,陈玉平、周世伟、,陈雪松、王杰红、邓娟娼、易勇、杜建华,李天宇、 郭新光、刘明、黄国新、李沛、吴李弟、张敬松、张继祥、过菲,王丽霞、罗必英、孟镇,吴晓倩、廖英扬、刘帅、 潘玉 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: 2009年首次发布为GB/T235302009; 本次为第一次修订
GB/T20886.2一2021 引 言 随着发酵工业的迅速发展,食品加工用酵母及其相关产品种类向多元化发展,产品质量提高到一个 新的水平,行业从技术到品种都有了长足的发展与进步 制定GB/T20886《酵母产品质量要求》,是对 食品加工用酵母及其相关产品的质量和对应检测方法的规范化和标准化,是规范食品加工用酵母及其 相关产品行业秩序、促进产业发展的基础性工作 GB/T20886《酵母产品质量要求)拟由三部分构成 第1部分:食品加工用酵母; 第2部分:酵母加工制品; 第3部分:富营养素酵母
GB;/T20886.2一2021 酵母产品质量要求 第2部分酵母加工制品 范围 本文件规定了酵母加工制品的术语和定义、缩略语、产品分类、要求、试验方法、检验规则和标志,包 装、运输、贮存 本文件适用于酵母加工制品的生产,检验和销售 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件 GB/T191包装储运图示标志 GB/T601 化学试剂标准滴定溶液的制备 GB/T602化学试剂杂质测定用标准溶液的制备 化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T603 食品安全国家标准食品中灰分的测定 GB5009.4 食品安全国家标准食品中蛋白质的测定 GB5009.52016 GB5009,442016食品安全国家标准食品中氯化物的测定 GB.5o9.91食品安全国家标准食品中伊,纳的测定 GB/T66822008分析实验室用水规格和试验方法 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 酵母加工制品processelyeastproduets 以食品加工用酵母为主要原料,在酵母自身的酶或外加酶的作用下自溶或酶解,，经分离或不分离、 干燥或不干燥等工艺制成的产品 3.2 酵母抽提物yeastextract 以食品加工用酵母为主要原料,在酵母自身酶或外加食品加工用酶的作用下,酶解自溶并分离提取 后,经过或不经过热加工等工艺,得到的含有氨基酸、肽、核苷酸等酵母细胞中的可溶性成分的产品,属 于食品配料 注:生产过程中根据需要可加人食用盐 3.3 核苷酸型酵母抽提物richnucleotideyeastextract 以食品加工用富核酸酵母为主要原料,在酵母自身酶或外加食品加工用酶的作用下,酶解自溶并分
GB/T20886.2一2021 离提取后,，经过或不经过热加工等工艺,得到的含有酵母自身的氨基酸,肽、核苷酸等酵母细胞中的可溶 性成分的产品,属于食品配料 注;生产过程中根据需要可加人食用盐 3.4 风味型酵母抽提物lavouredy easteXtract 以酵母抽提物为主要原料,根据需要加人麦芽糊精、葡萄糖、谷氨酸钠、5'-呈味核苷酸二钠、食用盐 等食品配料进行调配,或经美拉德反应等工艺,赋予产品特殊风味的产品,属于食品配料(酵母抽提物基 料不应低于55%,以干基计 3.5 酵母水解物autolyzedyeast 自溶酵母 酵母自溶物 以食品加工用酵母为主要原料,在酵母自身的酶或外加食品加工用酶的作用下,经酶解自溶、浓缩 或干燥等工艺制得的含酵母全细胞成分的产品,属于食品配料 注:生产过程中根据需要可加人食用盐 3.6 核苷酸型酵母水解物richnueleotideautolyzedyeast 以食品加工用富核酸酵母为主要原料,在酵母自身的酶或外加食品加工用酶的作用下,经酶解自 溶、浓缩或干燥等工艺制得的含酵母全细胞成分的产品,属于食品配料 注:生产过程中根据需要可加人食用盐 3.7 风味型酵母水解物lavouredautolyzedyeast 风味型酵母自溶物 以酵母水解物为主要原料,根据需要加人麦芽糊精、葡萄糖、谷氨酸钠,5'-呈味核苷酸二钠,食用盐 等食品配料进行调配,或经过美拉德反应等工艺,赋予产品特殊风味的产品,属于食品配料酵母水解物 基料不应低于55%,以干基计) 3.8 酵母细胞壁yeastcellwal1 以食品加工用酵母为主要原料,经酶解自溶,分离、提取后获得的,含有酵母葡聚糖、甘露寡糖、蛋自 质和少量几丁质的酵母细胞的外壁物质,属于食品配料 3.9 培养基用酵母加工制品preessedyetstproduetsusedforewtremedium 用作微生物培养营养源的酵母加工制品,包括培养基用酵母抽提物(酵母浸出物、酵母蛋白陈),培 养基用酵母水解物酵母自溶物)等 缩略语 下列缩略语适用于本文件 AMP5-腺苷酸二钠(Ditsodiumadenosime5'monophosphate CMP:5'-胞苷酸二钠(Disodium eytidin ne-5-monophosphate GMP.5-鸟苷酸二销Disodium8uanylatc了-monephosphate uminosinate-5' IMP:5'-肌苷酸二钠(Disodiun -monophosphate UMP;5'-尿苷酸二钠(Disodiumuridine-5'-monophosphate)
GB;/T20886.2一2021 5 产品分类 5.1按工艺分类 酵母加工制品按工艺分类,可分为 酵母抽提物 包括纯品型酵母抽提物和核苷酸型酵母拙提物 核苷酸型酵母抽提物又可分为 a 型和】型 b)风味型酵母抽提物 酵母水解物 包括纯品型酵母水解物和核苷酸型酵母水解物 c 风味型酵母水解物 d 酵母细胞壁 e 培养基用酵母加工制品 5.2按应用分类 酵母加工制品按应用分类,可分为 食品配料用酵母加工制品,包括酵母抽提物、风味型酵母抽提物、酵母水解物、风味型酵母水解 物和酵母细胞壁 b 发酵用酵母加工制品,包括培养基用酵母加工制品 要求 6.1感官要求 应符合表1的规定 表1感官要求 项 目 要 求 液浆状、黏稠膏状、粉末、颗粒或片状 形 态 谈黄色至黑褐色 色 特有的气味,无异味 气 味 杂 质 无正常视力可见杂质 6.2理化要求 6.2.1酵母抽提物 应符合表2的规定
GB/T20886.2一2021 表2酵母抽提物的理化要求 指 标 目 项 核苷酸型 纯品型 I型 型 50.0 50.0 22.0 氯化钠/g/1o0 g 7.0 10.0 7.0 总氮(除Na(Cl干基计)/(g/1008) 氨基酸态氮占总氮百分比(AN/TN)/% 15.055.0 铵盐(NH-N)(除NaCI干基计/g/100g) 2.0 2.0 2.0 不溶物/g/100g) 2.0 总灰分(除Nacl干基计)/(g/100 s 20,0 25.0 25,0 核苷酸(除NaCl干基计,以核苷酸钠盐水合物计)/g/100g) 20.0 8.0 2.1:1 2.1:1 XnP+r+:XcP+uMpy 20,0 20.0 20,0 谷氨酸(除Nacll干基计)/(g/100g 钾/g/100g 13,0 13.0 13.0 5'-肌苷酸二躺、-鸟苷酸二纳、s'腺苷酸二钠三种核苷酸含量之和与5-胞苷酸二纳、'-尿苷酸二纳两种核苷 酸含量之和的比值,以钠盐水合物计 6.2.2风味型酵母抽提物 应符合表3的规定 表3风味型酵母抽提物的理化要求 项 指 标 总缸除NaCl干基计/g/100g 4.0 铵盐(NH-N)除NaCI干基计/g/100g s 1.5 氯化钠/g/100g 50.0 总灰分(除NaCI干基计/g/100g 20.0 6.2.3酵母水解物 应符合表4的规定 表4酵母水解物的理化要求 指标 项目 纯品型 核苷酸型 氯化钠/g/100》 50.0 50.0 总氮除NaC干基计/g/100g 6.l 9.0 氨基酸态氮占总氮百分比(AN/TN)/% 5.0
GB;/T20886.2一2021 表4酵母水解物的理化要求(续 指标 项目 纯品型 核苷酸型 饺盐(NH-N(除NIC干基计)00 不溶物g/o7 60 s g 总灰分除NaCl干基计/g/100g 15.0 20.0 核苷酸(除NaCl干基计,以核苷酸钠盐水合物计/g/100g 10.0 三 XMP+cMP十AMP;XcMpMpy 2.1:1 谷氨酸(除NaCI干基计)/g/100g 13.0 谷氨酸占总蛋白质百分比/" 马 24.0 13.0 钾/g/100g 5'-肌苷酸二钠、5'-鸟苷酸二钠,5'-腺苷酸二钠三种核苷酸含量之和与5'-胞苷酸二钠5'-尿苷酸二钠两种核苷 酸含量之和的比值,以钠盐水合物计 6.2.4风味型酵母水解物 应符合表5的规定 表5风味型酵母水解物的理化要求 项目 指标 氯化钠/g/100g 50.0 总氮除NaCl干基计/g/100g) 5.0 总灰分(除NaCl干基计/g/100g 20.0 6.2.5酵母细胞壁 应符合表6的规定 表6酵母细胞壁的理化要求 项目 指标 水分/g/100g 8.0 总氮以干基计/g/100g 6.5 总灰分(以干基计)/g/100R 8,0 多糖(以葡紧糖和甘露寡糖总和计//w) 32.0 6.2.6培养基用酵母加工制品 应符合表7的规定
GB/T20886.2一2021 表7培养基用酵母加工制品理化要求 项目 指标 氧化钠/g/100g 2.0 总氮除NaCI干基计/g/100g 6,0 铵盐(NH-N)(除NaCI干基计/g/100g 2.0 总灰分(除NaCl干基计)/g/100R) 25.0 4.07.5 pH 试验方法 7.1 般要求 试验方法中所用的水,在未注明其他要求时,应符合GB/T6682-2008中的三级水要求,所用试 剂,在未注明其他规格时,均指分析纯 分析中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品 在没有注明其他要求时,均按GB/T601,GB/T602,GB/T603的规定制备 试验中所用溶液在未注明 用何种溶剂配制时,均指水溶液 7.2感官要求 取适量样品,放人无色、洁净、干燥的玻璃杯(或白瓷盘)中,置于明亮处,在自然光下用肉眼观察其 形态、色泽,嗅其气味,检查有无正常视力可见杂质 7.3水分 按附录A执行 7.4氯化钠 按GB5009.44一2016中电位滴定法测定 样品的处理按GB5009.44一2016中5.2.2执行;将 GB5009.44一2016公式(3)中的质量转换系数由0.0355改为0.0585,计量单位转换为克每百克 g/100g) 7.5总氮 按附录B执行 7.6氨基酸态氮占总氮百分比(AN/IN 按附录C执行 7.7铵盐 按附录D执行 7.8不溶物 按附录E执行
GB;/T20886.2一2021 7.9谷氨酸、谷氨酸占总蛋白质百分比 按附录F执行 7.10总灰分 按附录G执行 :X 7.11核苷酸、Xne+case+ee cP+IP 按附录H执行 7.12钾 按GB5009.91规定的方法测定 7.13多糖 按附录I执行 7.14pH 按附录J执行 检验规则 8.1组批 同原料,同工艺,同一生产线连续生产的、质量均一的产品为一批 8.2抽样 8.2.1产品按批抽样 批量不大于600件时,从不少于3件包装中抽取样品;批量大于600件时,从不 少于0.5%比例的包装中抽取样品 每份样本总量不少于三倍试验检测量 8.2.2桶装产品应从表面10cm以下处抽取样品 取样器应洁净、干燥 8.2.3抽取样品三份,签封 粘贴标签,在标签上注明产品名称、生产厂名及地址、批号,取样日期及地 点,取样人姓名 一份用于感官和理化检验，一份用于微生物检验，一份封存,保留半个月备查 做微生 物检验时,取样器和玻璃瓶应事先灭菌(样品不应接触瓶口),当抽取的样本总量少于200g时,应适当 加大抽样比例 8.3出厂检验 8.3.1产品出厂前,应按本文件规定逐批进行检验 检验符合本文件要求后方可出厂 8.3.2检验项目: 酵母抽提物及酵母水解物:感官、总氮、氯化钠,针对核苷酸型产品还需检测核苷酸含量和 X wram-Axw,;Xcw UMP 风味型酵母抽提物及风味型酵母水解物:感官、总氨和氯化钠 酵母细胞壁:感官、总氮,多糖,水分 -培养基用酵母加工制品:感官、总氮、pH
GB/T20886.2一2021 8.4型式检验 8.4.1检验项目:本文件中全部要求项目 8.4.2 一般情况下,同一类产品的型式检验每年至少进行一次,有下列情况之一者,亦应进行: 原辅材料有较大变化时; a b 更改关键工艺或设备时; c 新试制的产品或正常生产的产品停产三个月后,重新恢复生产时; d)出厂检验与上次型式检验结果有较大差异时; e 国家监督机构按有关规定需要抽检时 8.5判定规则 8.5.1抽取样品经检验,检验项目全部符合要求,判该批产品符合本文件 8.5.2检验项目如有一项至两项不符合要求,应重新自同批产品中抽取两倍量样品进行复检,以复检 结果为准;若仍有一项不符合要求,判定该批产品不符合本文件 检验结果如有三项及以上指标不符合 要求,判定该批产品不符合本文件 标志,包装,运输、贮有 9.1标志 9.11销售包装使用标签时,还应注明产品分类 包装储运图示的标志应符合GB:/T191的有关规定 9.1.2 9.2包装 包装容器应整洁、无破损,应符合国家相关规定 9.3运输 9.3.1运输工具应保持清洁、干燥,无外来气味和污染物 9.3.2产品在运输时,保持干燥、洁净,不应与有毒、有害、有腐蚀性物品混装混运,避免日晒和雨淋 9.3.3货物装卸时应轻拿轻放 g.4贮存 g.4.1成品不应露天堆放,不应与有霉变、有毒、有异味、有腐蚀性物质混放 9.4.2成品应贮存在清洁、干燥,通风的仓库内
GB;/T20886.2一2021 附 录 A 规范性 水分的测定 A.1仪器设备 A.1.1电热干燥箱;控温精度士2C A.1.2电子天平;感量0.1mg A.1.3称量皿:50mm×30mm A.1.4干燥器;用变色硅胶作干燥剂 A.2试验步骤 根据产品状态称取0.3g2.0g(精确至0.0001g)样品于烘干至恒重的称量皿中均匀铺开,然后放 人103C士2C电热干燥箱内,烘6h后,加盖取出移人干燥器内冷却,30min后称量 A.3试验数据处理 水分的含量按式(A.1)计算: "m一m X，一 X100 (A.1 n ml 式中: 样品的水分含量,单位为克每百克(g/100g); 烘干前称量皿加样品的质量,单位为克(g); m 烘干后称量皿加样品的质量,单位为克(g); m12 n 称量皿的质量,单位为克(g). 计算结果表示到小数点后一位 A.4精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值应不超过其算术平均值的5%
GB/T20886.2一2021 附录 B 规范性 总氮的测定 B.1试验步骤 按GB5009.5一2016第一法 B.2试验数据处理 样品的除NaCl干基率按式(B.1)计算 100一X1一X ×100% (B.1 100 式中 -样品的除NaCl干基率 w 换算系数 100 X -样品的水分含量,单位为克每百克(g/100g); X -样品中氯化钠含量,单位为克每百克(g/100g). 总氮的含量按式(B.2)计算 V一V)×c1×0.0140 X，一 100 B.2 又w×V100o 13 式中 试样中总氮的含量,单位为克每百克(g/100g); X 试液消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积,单位为毫升(mL) Vw 一试剂或材料空白消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积,单位为毫升(mL) V. 硫酸或盐酸标准滴定溶液浓度,单位为摩尔每升(mol/L); C1 0.0140 .0mL硫酸[c(1/2H,sO)=1.000mol/1]或盐酸[c(HCI)=1.000mol/1]标准滴定 溶液相当的氮的质量,单位为克(g): -试样的质量,单位为克(g); m .100-X -样品的除Ndl干基率,%,计算细胞壁总氮含量(以干基计时w为”" ×100%”; Ze 100 V 吸取消化液的体积,单位为毫升(mL); 00 换算系数 计算结果表示到小数点后一位 B.3精密度 在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过其算术平均值的10% 10
GB;/T20886.2一2021 录 附 C 规范性 氨基酸态氮占总氮百分比(AN/TN)的测定 氨基酸态氮的测定 C.1 C.1.1第一法滴定法(仲裁法) C.1.1.1原理 利用氨基酸的两性作用,加人甲醛以固定氨基的碱性,使拨基显示出酸性,用氢氧化钠标准溶液滴 定后定量.以酸度计指示终点 C.1.1.2试剂或材料 C.1.1.2.1氢氧化钠标准溶液[c(NaOH)=0.05mol/L] C.1.1.2.2甲醛溶液(36%38%);应不含有聚合物没有沉淀且溶液不分层) c.1.1.3仪器设备 .1.1.3.1酸度计:直接读数,pH测量范围0~14,精度士0.01 c.1.1.3.2电磁搅拌器 C.1.1.3.3碱式滴定管 c.1.1.4试验步骤 称取样品5g(精确至0.0001g),加水溶解并定容至100mL 吸取样品溶液5.0mL于100m烧 杯中,加人55mL.水,用氢氧化钠标准溶液(C.1.1.2.1)滴定至pH8.2,并保持1min不变,此结果为游 离酸度,不予计量体积 慢慢加人甲醛溶液(C.1.1.2.2)10mL,放置1min后,用氢氧化钠标准滴定溶液 滴定至pH9.20,记录消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积(mL) 同时做空白试验,记录加人甲醛溶液 后,空白试验所消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积(mL) C.1.1.5试验数据处理 按式(C.1)计算氨基酸态氮的含量 c×V-V)×20×0.014 X= ×100 C.1 ml4×7w 式中 -样品的氨基酸态氮的含量,单位为克每百克(g/100g):; X -氢氧化钠标准滴定溶液的浓度,单位为摩尔每升(mol/L) -加人甲醛溶液后,滴定样品消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积,单位为毫升(mL); -加人甲醛溶液后,空白试验时消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积,单位为毫升(mL); 20 样品稀释倍数; 0.014 与1.00mL氢氧化钠标准溶液[c(NaOH)=1.000mol/几]相当的以克表示的氨基酸态 氮的质量; 样品的质量,单位为克(g); m 样品的除NaCl干基率,% 7c" 1
GB/T20886.2一2021 计算结果表示到小数点后两位 C.1.1.6精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值应不超过算术平均值的5% C.1.2第二法分光光度法 C.1.2.1原理 位于酵母抽提物中游离氨基酸末端的NH!,与合成剂1-2禁醋4-磺酸钠(NQs)反应,产生的赘合 物对于475m波长的光具有明显的吸收特性 用甘氨酸为基准物制备不同浓度的标准溶液,以其浓 度和相应吸光度值建立标准曲线,得到浓度和吸光度的线性关系,进而测试并计算出待测样品的氨基酸 态氮含量 C.1.2.2试剂或材料 甘氨酸:纯度>98% C.1.2.2.2蔡醒4-磺酸钠(NQs) C.1.2.2.3棚酸 1.2.2.4 无水乙醇 1.2.2.5氢氧化钠溶液:32%质量分数). C.1.2.2.6棚酸缓冲剂pH8.8) 称取1.5g砌酸,加水溶解并定容至500mL,用32%氢氧化钠将pH调整到8.8 该溶液在4C条 件下可保存1周 C.1.2.2.7綦酮4-磺酸钠试剂或材料 称取500mgNQS,加人50ml水和50ml无水乙醉 该溶液在4C条件下可保存1周 C.1.2.2.8甘氨酸基准溶液 甘氨酸母液的制备;准确称取约250mg士1mg的甘氨酸,用水溶解并定容到250mL 该溶液在 C 条件下可保存1周 甘氨酸子液的制备;分别取5ml,10ml,20m甘氨酸母液于100ml容量瓶中,定容至刻度,配 制成质量浓度分别为0.05g/L,0.1g/L,0.2g/L的甘氨酸子液 注:在绘制标准曲线时,至少要配制3个不同浓度的甘氨酸子液;每次测定前,需重新配制甘氨酸子液 c.1.2.3仪器设备 C.1.2.3.1聚丙熔(PP)试管;10ml C 1.2.3.2 聚碳酸酯(Pc)比色m:3ml 1.2.3.3可见光分光光度计 1.2.3.4用于10ml试管加热的加热器,40C 1.2.3.5 单标线移液管lml C.1.2.3.6数显连续分配器 C.1.2.3.7电子天平:感量0.1mg C.1.2.4样品 称取样品8.0g~10,0g(精确至0.0001g),用去离子水溶解并定容到100ml,移取1ml初次定 容溶液到100ml容量瓶中,再次定容到刻度 12
GB;/T20886.2一2021 C.1.2.5试验步骤 C.1.2.5.1测定 分别取5个试管,按表C.1顺序依次加人相应试剂或材料后,塞紧管口,用旋涡混合器轻轻混匀,然 后将试管在40C的干燥器中放置90min 取出试管后,每支试管中加人4ml去离子水,翻转混合,用 空白溶液调零,在475nm处测定各样品的吸光度 表C,1 溶液配制梯度表 质量浓度为0.05g/L质量浓度为0.1g/L质量浓度为0,2g/I 溶液 空白 样品 的甘氨酸子液 的甘氨酸子液 的甘氨酸子液 0,05g/I甘氨酸 1ml 0.1g/I甘氨酸 1ml 0.2g/L甘氨酸 1ml. 样品溶液 ml lml十2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 础酸缓冲液 2ml 2m 2ml 2ml 2m NQS试剂或材料 0.5mL 0.5mL 0.5ml 0.5ml 0.5mL 注:每个样品需做平行测试 C.1.2.5.2标准曲线的建立 以甘氨酸子溶液浓度对应的氨基酸态氮的含量(见表c.2)为纵坐标,测得的OD值为横坐标绘制 标准曲线 表c.2不同浓度的甘氨酸子溶液对应的氨基酸态氮含量 甘氨酸子溶液浓度/(g/L 氨基酸态氮含量/(g/L) 0.05 0.009362 0.018724 0.l 0.2 0.037448 C.1.2.6试验数据处理 氨基酸态氮的含量,按式(C.2)计算 (k×Db×100×100 X，= ×100=(k×D十6×1000 ----- C.2 ms×w×1000 式中 x 样品氨基酸态氮含量,单位为克每百克(g/100g); 标准曲线斜率,需介于0.03650.0395之间; 样品对475nm波长光的吸光度值; 标准曲线截距 样品质量,单位为克(g); 71 13
GB/T20886.2一2021 -样品的除NaCl干基率,%; Z 100 -样品定容体积,单位为毫升(mL.); 100 -样品溶液稀释倍数; 1000- -转换系数 计算结果表示到小数点后两位 C.1.2.7精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值应不超过算术平均值的5% C.2氨基酸态氮占总氮百分比(AN/TN)的计算 氨基酸态氮占总氮百分比以质量分数计,按式(C.3)计算 一 C.3 w= ×100 式中 -样品氨基酸态氮占总氮百分比,% Z X 总氮含量,单位为克每百克(g/100g); 氨基酸态氮含量,单位为克每百克(g/100) X 计算结果表示到小数点后一位 14
GB;/T20886.2一2021 附 录 D 规范性 铵盐的测定 D.1溶液 所有试剂均用不含氨的燕僧水配制 D.1.1氢氧化钠溶液(400g/L) 称取氢氧化钠40g,溶于100mL水中,静置,吸取上层清液于带橡皮塞的瓶内 D.1.2碉酸溶液(20g/L nml 称取20g碉酸,加水溶解后并稀释至10001 D.1.3盐酸标准滴定溶液[e(IHCI)=0.1mol/L 按GB/T601配制与标定 D.1.4甲基红乙醇溶液(1g/L) 称取0.1lg甲基红,溶于95%乙醇,用95%乙醉稀释至100mL D.1.5嗅甲酚绿乙醇溶液(1g/L) 称取0.1g澳甲酚绿,溶于95%乙醉,用95%乙醉稀释至100mL D.1.6澳甲酚绿-甲基红混合指示剂 份甲基红乙醉溶液与5份澳甲前绿乙醉溶液临用时混合 D.2仪器设备 D.2.1凯氏定氮仪;成套仪器或自行组装的仪器 D.2.2电子天平;感量0.1nmg D.2.3滴定管50ml D.3试验步骤 D.3.1先在接收瓶中加人25mL棚酸溶液(D,1.2),以及1滴一2滴澳甲酚绿-甲基红混合指示剂 (D.1.6)，并使冷凝管的下端伸人液面下 D.3.2称取样品1.0g2.0g,用少量水多次溶解并转移至凯氏定氮装置的反应室中 将10ml 氢氧 化钠溶液(D.1.1)倒人小烧杯中,提起玻塞使其缓缓流人反应室,立即将玻塞塞紧,并加水于小玻杯内以 防漏气 夹紧螺旋夹,开始燕溜 燕5min,移动接收瓶,液面离开冷凝管下端,再蒸憎1min 然后 用少量水冲洗冷凝管下端外部 取下接收瓶,用盐酸标准滴定溶液(D.1.3)滴定至绿色消失转变为灰红 色为终点 同时做空白试验 D.4试验数据处理 铵盐含量(以氮计)按式(D.1)计算 15
GB/T20886.2一2021 GxV-)x0.0140 X = ×100 (D.1 m×w 式中 X 样品中铵盐的含量(以氮计),单位为克每百克(g/100g); 盐酸标准滴定溶液的浓度,单位为摩尔每升(mol/L); -样品消耗盐酸标准滴定溶液的体积,单位为毫升mL); V -试剂空白消耗盐酸标准滴定溶液的体积,单位为毫升mL); 0.0140 与 i1.00ml盐酸[c(HCIl)=1.000mol/L]相当的以克表示的氮的质量; -样品的质量,单位为克(g); m -样品的除NaCl干基率,% Z 计算结果表示到小数点后一位 D.5精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值应不超过算术平均值的10% 16
GB;/T20886.2一2021 录 附 E 规范性 不溶物的测定 E.1仪器设备 E.1.1三角瓶;250ml .1.2G3玻璃堆蜗过滤器 E.1.3电热干燥箱:控温精度士2C .1.4电子天平;感量0.1mg， E.1.5干燥器;用变色硅胶作干燥剂 E.2试验步骤 称取样品5g(精确至0.01g)于250mL三角瓶中,加75mL水,充分溶解 盖上表面皿,微沸 2min，用已在103C士2C下恒重并已称量的G3玻璃堆蜗过滤器过滤,用50ml.水,分23次洗涤， 用G3玻璃堆岗过滤器过滤,将过滤器连同滤渣置于103C士2C干燥1h,取出放人干燥器内,冷却后 称量 E.3试验数据处理 不溶物的含量按式(E.1)计算 1？一ml8 X 一 ×100 E.1 m19 式中 x 样品的不溶物含量,单位为克每百克(g/100g); 烘干后堆蜗加样品的质量,单位为克(g) m17 堆蜗的质量,单位为克(g); m18 -样品的质量,单位为克(g). n 计算结果表示到小数点后一位 17
GB/T20886.2一2021 附录 F 规范性) 谷氨酸、谷氨酸占总蛋白质百分比的测定 P.1谷氨酸含量的测定 F.1.1原理 使用离子交换氨基酸分析仪,样品经色谱柱分离后与(水合)苗三酮试剂混合,通过记录仪连续不断 地、自动测量反应产物在570nm的吸光度 F.1.2一般要求 本方法中所用的水,在未注明其他要求时,应符合GB/T6682一2008中的一级水要求 F.1.3试剂或材料 F.1.3.1盐酸溶液[e(HCl)=0.02mol/I] 量取1.8ml浓盐酸,注人1000mL的水中,摇匀 F.1.3.2谷氨酸标准储备溶液 称取0.7356飞谷氨酸于100mL容量瓶,用盐酸浴液(F.1.a.1)浴解,并稀释至刻度 该游液舍谷 氨酸0.05mol/L F.1.3.3谷氨酸标准使用溶液 吸取谷氨酸标准储备溶液(F,1.3.2)1mL,用盐酸溶液(F,1.3.1)稀释至1000mL 每50L该溶液 含有2.5nmol的谷氨酸,相当于50L该溶液含有谷氨酸367.83ng r.1.4仪器设备 F.1.4.1离子交换氨基酸分析仪 F.1.4.2容量瓶:100mL、1000m F.1.4.3电子天平:感量0.1nmg F.1.4.4滤膜;0.24mm. F.1.5试验步骤 F.1.5.1样品制备 称取样品1g(精确至0.0001g;当谷氨酸含量大于7%时,应适当减少称样量),加人40mL盐酸溶 液(F.1.3.l),充分搅拌溶解后,全部转移至100ml容量瓶中,并用盐酸溶液(F.1.3.1)稀释至刻度 取上述溶液1.00mL.,用盐酸溶液(F.1.3.1)稀释至100mL,再用滤膜过滤 该溶液为样品待测液 F.1.5.2样品测定 分别取50pL的谷氨酸标准使用溶液和样品待测液上机测定 仪器最佳条件选择和操作方法依照 设备制造商的操作说明 根据获得的色谱图,比较标准溶液和样品溶液的保留时间来鉴别谷氨酸所产 生的峰 记录样品中谷氨酸的峰面积为Au,标准溶液中谷氨酸的峰面积为As 18
GB;/T20886.2一2021 F.1.6试验数据处理 谷氨酸的含量按式(F.1)计算 /A、 Au×m、/A、×100×10×100×10" AU×ms/ X?=- ×100一 50 50 ×m10×w" m10×w'× F.1) 式中 -样品中谷氨酸的含量,单位为克每百克(g/100g); x A 50L样品待测液在仪器上产生的峰面积; -504L谷氨酸标准使用溶液中含有谷氨酸的质量,单位为纳克(ng) ms A、 50L谷氨酸标准使用溶液在仪器上产生的峰面积 00×10 转换系数; 00×10-" 转换系数 -谷氨酸标准使用溶液体积,单位为微升(L) 50 样品的质量,单位为克(g); m1o 样品的除NaCI干基率,% Te 计算结果表示到小数点后一位 F.1.7精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值应不超过算术平均值的10% F.2谷氨酸占总蛋白质百分比计算 谷氨酸占总蛋白质百分比按公式(F.2)计算 X ×100 (F.2 ZU2 X6 式中 样品中谷氨酸占总蛋白质的百分比,%; wg x 样品中谷氨酸含量,单位为克每百克(g/100g); X -样品中总氮含量,单位为克每百克(g/100g); 6.25 氮折算成蛋白质的折算系数 计算结果表示到小数点后一位 19
GB/T20886.2一2021 附 录 G 规范性) 总灰分的测定 G.1试验步骤 按照GB5009.4规定的方法执行 G.2试验数据处理 总灰分的含量按公式(G.1)计算 m二mn二mx100-X X ×100 (G.1 00一X 式中 X -试样中总灰分的含量,单位为克每百克(g/100g); 堆蜗和灰分的质量,单位为克(g); mn 堆蜗的质量,单位为克(g); m12 堆蜗和试样的质量,单位为克(g); m3 00 单位换算系数; X 样品中氯化钠含量,单位为克每百克(g/100g),计算细胞壁总氮含量时,X为0; 样品的水分含量,单位为克每百克(g/100g). x 计算结果表示到小数点后一位 G.3精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过其算术平均值的5% 20
GB;/T20886.2一2021 录 附 H 规范性 :X 核苷酸、Xnw+aw+nr cweIw的测定 H.1原理 同一时间进人色谱柱的各组分,由于在流动相和固定相之间溶解、吸附、渗透或离子交换等作用的 不同,随流动相在色谐柱两相之间进行反复多次的分配,由于各组分在色谱柱中的移动速度不同,经过 一定长度的色谱柱后,彼此分离开来,按顺序流出色谱柱,进人信号检测器,在记录仪或数据处理装置上 显示出各组分的谱峰数值,根据保留时间定性,以峰面积大小,按外标法定量 H.2 一般要求 本方法中所用的水,在未注明其他要求时,应符合GB/T6682一2008中的一级水要求 H.3试剂 H.3.1 '胞苷酸二躺(cMP)标准品1分子式为C,H.N,Na.o.P,纯度二98% H.3.25'-尿苷酸二钠(UMP)标准品;分子式为CHN,Na.O,P,纯度>98% H.3.35'-鸟苷酸二钠(GMP)标准品;分子式为CHN,Na.O,P,纯度>98% H.3.45'-肌昔酸二钠(IMP)标准品:分子式为CHN,Na.OP,纯度>98% H.3.55'-腺苷酸二钠(AMP)标准品;分子式为CHN,Na.O,P,纯度>98% H.3.6七水合硫酸镁(MgSO7H,O):纯度>99.0% H.3.7磷酸二氢钾(KHPO);纯度>99.0% H4仪器设备 H4.1高效液相色谱仪(配紫外检测器和柱温箱系统) H4.2色谱柱:C18柱(250mm×4.6mm或其他等效色谱柱). .4.3过滤装置:1000mL真空抽滤器,0.45然m水系滤膜 n H4.4针筒式微孔滤膜;0.22 m H.4.5容量瓶:50ml、l00ml .4.6电子天平;感量0.1mg H H.5试验步骤 H.5.1参考色谱条件 H.5.1.1流动相;称取4.19gMgSO 7H.O和13.61gKH,PO,用水溶解并稀释至1000ml 用 0.45m水系谜膜过逃,超声除气作为流动相 H.5.1.2流速;1.0mL/min H.5.1.3检测波长:260nm. H.5.1.4柱温箱温度:25C H.5.1.5进样量:5L 21
GB/T20886.2一2021 H.5.2样品制备 H.5.2.1 标准储备溶液的制备 称取各标准品50mg(精确至0.1mg),用水溶解,定容至50ml.容量瓶中,摇匀,用0.22m滤膜 过滤,质量浓度为1mg/mL H.5.2.2样品溶液的制备 称取样品约0.5g(精确至0.0001g),用水溶解,定容至100ml容量瓶中,摇匀,用0.224m滤膜过 滤,样品溶液需配制2份作为平行样 H.5.3标准溶液制备 按表H.1制备标准系列溶液 表H.1标准系列溶液的制备 定容体积 每种核苷酸的浓度 序号 标准储备溶液取用量 ml 4g/ml 1( 吸取CMP、UMP.GMP、IMP,AMP混合标准储备溶液0ml 吸取CMP,UMP,GMP,IMP,AMP混合标准储备溶液1mL 10 100 吸取CMP、,UMP,GMP,IMP,AMP混合标准储备溶液2ml 10 200 吸取MP,UMP,GMP,IMP,AMP混合标准储备溶液3mL 10 300 吸取cMP.,UMP.GMP,IMP,AMP混合标准储备溶液4！ ml 10 400 吸取cMP,UMP.GMP.IMP.AMP混合标准储备溶液51 5ml 10 500 注，用流动相溶液定容标准系列溶液 H.5.4测定 将标准系列和供试品溶液分别进样,进样量为5"L,根据标准品的保留时间定位样品中CMP UMP,GMP,IMP,AMP的色谱峰 根据样品的峰面积以外标法计算各组分的百分含量 H.6试验数据处理 样品中各核苷酸钠盐水合物的含量按公式(H.1)计算(以除NaCI干基计) C×V×F H.1 x.- -×10“×K×100 m14×w" 式中 X 样品中核苷酸钠盐水合物各组分(Xc、Xp、Xa、XR、Xm)的含量,单位为克每百 克g/100g); 查标准曲线获得样品游液中cMP/UMP/GMP/IMP/AMP的含量,单位为微克每毫升 4g/mL) 样品溶液的定容体积,单位为毫升(mL) F 稀释倍数; 称样质量,单位为克(g); m11 22
GB;/T20886.2一2021 -样品的除NaCI干基率,%; Z" 10- -单位转换系数; K -5'-核甘酸二钠盐折换为对应的5'-核苷酸钠盐水合物的系数,见表H.2 计算结果表示到小数点后一位 表H.2K值 5'-核苷酸 CMP 1.32 UMP 1.07 GMP 1.31 IMP 1.32 AMP 1.18 样品中总核苷酸含量按公式(H.2)计算 X，=XcNMp十XUMp十XcMIp十XMp十XAMp (H.2 式中: 样品中核苷酸的含量,以钠盐水合物计,单位为克每百克(g/100g); X Xceom 5'-胞苷酸二钠(CMP)的含量,以钠盐水合物计,单位为克每百克(g/100g). -5'-尿苷酸二钠(UMP)的含量,以钠盐水合物计,单位为克每百克(g/100g) XuMp" -5'-鸟苷酸二钠(GMP)的含量,以钠盐水合物计,单位为克每百克(g/100g): XGM 5'-肌苷酸二钠(IMP)的含量,以钠盐水合物计,单位为克每百克(g/100g); XMp 5'-腺苷酸二钠(AMP)的含量,以钠盐水合物计,单位为克每百克(g/100g) XAMp 样品中XNMpfA:Xcwu按公式(H.3)计算: :Xcwm =(Xp十Xcap十Xp):(Xcp十XtpH.3 XcMGMPAMP -UIMP 式中: 5'-胞苷酸二钠(CMP)的含量,以钠盐水合物计,单位为克每百克(g/100g); X cMP 5-屎苷酸二朋(UMP)的含量,以钠盐水合物计,单位为克每百克(g/100e) XuP" -5'-鸟昔酸二钠(GMP)的含量,以钠盐水合物计,单位为克每百克(g/100g); GMP -5'-肌苷酸二钠(IMP)的含量,以钠盐水合物计,单位为克每百克(g/100g); Xw8 XA -5'-腺昔酸二钠(AMP)的含量,以钠盐水合物计,单位为克每百克(g/100g》. 计算结果表示到小数点后一位 H.7精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过其算术平均值的10% H.8定量限 Ikg 以信噪比为10:1时对应的浓度作为定量限,单个核苷酸定量限为40mg/ 23
GB/T20886.2一2021 录 附 规范性 酵母细胞壁中多糖的测定 .1原理 酵母细胞壁中多糖物质主要是葡聚糖和甘露寡糖 将酵母细胞壁中葡聚糖和甘露寡糖酸水解为葡 萄糖和甘露糖后,利用液相色谱进行检测 .2一般要求 本方法中所用的水,在未注明其他要求时,应符合GB/T6682一2008中的一级水要求 .3试剂或材料 I.3.1盐酸:37%38%(质量分数) I.3.2葡萄糖:分析纯 I.3.3甘露糖;分析纯 I.3.4氢氧化钠;分析纯 1.3.5葡萄糖和甘露糖混合标液(2g/L) 分别称取葡萄糖和甘露糖各0.2000g,用纯水定容至100mL 1.3.6氢氧化钠溶液300g/L I.4仪器和设备 I4.1水浴锅 I4.2旋涡混合器 压力蒸汽灭菌器 I.4.3 I.4.4高效液相色谱仪;带示差检测器和糖柱(6.5mm×300mm). I.4.5电子天平;感量0.1mg .5试验步骤 1.5.1样品处理 准确称取样品400mg(精确至01mg),放人一个20mL的耐热玻璃制的带螺帽的小试管中,加人 6.0ml盐酸(I.3.1),小心地将试管盖紧后用旋涡混合器混合,得到均一的悬浮液 将小试管放人30C 水浴中处理45min,每15min用旋涡混合器振荡混合一次 然后将悬浮物定量的转移到200ml耐热 带盖玻璃瓶中,用100ml120ml的水,分几次洗涤小试管,洗涤液并人耐热带盖玻璃瓶中 将耐热 带盖玻璃瓶放人压力猴汽灭菌器,12" "C下处理60min 取出后冷却,用氢氧化钠溶液将溶液调H到 一7,然后定容至200mL 使用0.45m孔径的醋酸纤维素膜过滤备用 1.5.2色谱条件 采用纯水作为流动相,流速为0.5mL/min,柱温80C,待仪器基线平稳后再进样 1.5.3标准曲线的绘制 分别吸取萄葡糖和甘露糖混合标液(I.3.5)1ml2ml、3mL、4mL、5mL到10ml容量瓶中,用 24
GB;/T20886.2一2021 水定容到刻度,得到甘露糖、葡萄糖各为200mg/L,400mg/L,600mg/L、800mg/L、1000mg/L的混 合标样 在上述色谱条件下准确进样20AL,得到色谱峰面积和标准物质量浓度之间的回归方程,绘制 标准曲线 1.5.4样品测定 在同样的色谱条件下,将处理好的样品注人色谱仪中,记录各色谱峰的保留时间和峰面积 用糖标 样色谱峰的保留时间定性,用糖标样色谱峰的峰面积来定量 .6试验数据处理 葡聚糖或甘露寡糖的含量按公式(I.1)计算 A×0.2 X，= ×0.9×100 I.l m15 式中 X -样品中葡聚糖或甘露寡糖的含量,单位为克每百克(g/100g); 根据样品溶液的峰面积,在标准曲线上查得的样品溶液的葡萄糖或甘露糖的含量,单位为 A 毫克每升mg/L); 样品处理后定容的体积,单位为升(L) 0.2 -称取样品的质量单位为毫克(mug); 7115 将葡萄糖或甘露糖换算成葡聚糖或甘露寡糖的系数 0.9 酵母细胞壁中多糖的含量按公式(I.2)计算 X1o=X十X12 (I.2 式中: X -样品中多糖的含量,单位为克每百克(g/100g) Xm 样品中葡聚糖的含量,单位为克每百克(g/100g); X 样品中甘露寡糖的含量,单位为克每百克(g/100g) 计算结果表示到小数点后一位 精密度 .7 在重复性检测条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过其算术平均值的10% 25
GB/T20886.2一2021 附录 规范性 p的测定 J.1仪器和设备 酸度计(pH计 J.2试验步骤 称取试样2g(精确至0.01g),加水至100mL溶解,用酸度计测定溶液pH,并记录读数 J.3精密度 在重复性条件下获得的两次独立pH测定结果的绝对差值应不超过0.04 26