动物源产品中聚醚类残留量的测定

动物源产品中聚醚类残留量的测定

国家标准 GB/T20364一2006 动物源产品中聚类残留量的测定 Determinationofpolyetherionophoreresiduesinproductsofanimalorigin 2006-09-01实施 2006-05-25发布 国家质量监督检验检疫总局 发布 小 国国家标准化管委员会国家标准
GB/T20364一2006 动物源产品中聚醛类残留量的测定 方法一液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了动物源产品中莫能菌索、盐霉素、甲基盐霉素3种聚酥类残留量液相色谱-串联质谱 的测定方法 本标准适用于禽、兔等动物源产品中莫能菌素、盐霉素甲基盐霉素残留的确证和定量测定 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而.鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6379测试方法的精密度通过实验室间试验确定标准测试方法的重复性和再现性 GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法(GB/T6682一1992,neqIso3696;l987) 原理 试样中聚腿类残留,采用异辛烧提取,提取液用硅胶柱净化 液相色谱-串联质谱仪测定,外标法 定量 试剂和材料 水;应符合GB/T6682中一级水的规定 4.2异辛婉;分析纯 4.3甲醇;液相色谱级 二氯甲炕:分析纯 4.5甲醉-二氯甲婉(1十9):甲醉,二氯甲烧按体积比19混匀 无水硫酸钠;分析纯,500C灼烧4h,置于干燥器中备用 甲醇-水(13十2)甲醇、水按体积比13;2混匀 4.8莫能菌素、,盐霉素、甲基盐霉素标准品;纯度>99% 4.93种聚类标准储备溶液;200g/mL 分别准确称取适量的莫能菌素、盐霉素和甲基盐霉素标 准品,用甲醉配成 .200g/mL的标准储备溶液(4C避光保存可使用6个月. 103种聚隧类标准中间溶液.10 分别准确量取适量的标准储备溶液(4.9),用甲醇-水 4g/m 4.7)稀释成104g/mL.的标准中间溶液(4C避光保存可使用1个月 3种聚酣类混合标准工作溶液;准确量取适量的标准中间溶液(4.l0),用甲醉-水(4.7)配制成浓 /mL的聚哒 度系列为10.0ng/mL25.0 ng/ml50.0 ng/ml、l00.0ng/ml、250.0ng/ml500.01 ng/ 类混合标准工作溶液(4C避光保存可使用1周) 4.123种聚鲑类混合标准添加溶液:100ng/mL 准确量取适量的聚髅类混合标准中间溶液(4.10). 用甲醇-水(4.7)稀释成100ng/mL的聚酥类标准添加溶液(4C避光保存可使用1周) 仪器 5.1液相色谱-串联质谱仪;配有电喷雾离子源
GB/T20364一2006 5.2均质器 5.3涡流混匀器 5.4旋转蒸发仪 5.5固相萃取装置 5.6氮吹仪 5.7离心机,转速4000r/min. 聚四氟乙烯离心管:50m 55.9固相翠取硅胶柱.500mg,3mL. 5. .10移液器;200L1000L.5000L 5. 三角烧瓶:50mL 11 5 12分析天平;感量0.1mg和0.01g各一台 13 -次性注射式滤器:配有0.45am微孔滤膜 5 14样品瓶;2ml,带聚四氟乙烯旋盖 试样制备与保存 试样制备 从原始样品中取出部分有代表性样品,经高速组织捣碎机均匀捣碎,用四分法缩分出适量试样,均 分成两份,装人清洁容器内,加封后作出标记,一份作为试样;一份作为留样 试样的保存 6. 2 试样应在一20C条件下保存 测定步骤 标准曲线制备 ng/ml.50.0. 制备混合标准工作腋(L.1),浓度系列分别为10.0现/'mL.5.0 /ml100.0ng/ml g 250.0ng/mL500.0ng/mL(分别相当于测试样品含有2.04g/kg,5.04g/kg、l0.04g/kg、20.0g/kg、 50.04g/kg,100.04g/kg目标化合物) 按7.4的规定测定并制备标准曲线 7.2提取 )ml聚四氟乙烯离心管中,加人15ml异辛婉,均质3min,另取10ml异 称取5.0g试样,置于50 辛烧冲洗刀头,合并于上述离心管中,涡流混匀,振荡30s,于离心机上以3500r/min的速率离心 3 n,转移上清液于50mL三角烧瓶中 离心残渣用10mL异辛炕再提取一次,将上清液合并于上述 min 三角烧瓶中 7.3净化 于硅胶萃取柱上加人灼烧后的无水硫酸钠1.0g,用5mL异辛婉润湿,然后将三角烧瓶中的提取 液缓慢加人到萃取柱上,施以适当压力,使其以3mL/min的速度流出,注意不得使柱子流干,而后用 5m二氯甲婉以2mL/min的速率淋洗萃取柱,弃去淋洗液,待二氯甲炕流尽后再加压冲柱0.5min. 使萃取柱中残存的二氯甲烧充分流出 再加人甲醇-二氧甲烧(4.5)15mL,以1mL/min的速率洗脱， 收集洗脱液,于40C减压蒸发至近干,氮气吹干,准确加人1mL甲醇-水溶液(4.7)溶解残渣,涡流混匀 后,用一次性注射式滤器过滤至样品瓶中,液相色谱-串联质谱仪测定 测定 7.4.1液相色谱条件 a 色谐柱:C柱(可用lntersilODS-3,粒径5pm,柱长150mm,内径4.6mm或相当者); b 流动相甲醇十1%甲酸溶液(梯度洗脱见表1);
GB/T20364一2006 表1 时间/nmin 甲醇/(%) 1%甲酸溶液/(% 99 13 87 流速;0.9mL/min; C d)柱温;26C; 进样量;l0l e 7.4.2质谱条件 离子源电喷雾离子源; a b)扫描方式:正离子扫描; 检测方式;多反应监测 c 电喷雾电压;5500V; d 雾化气压力:0.344MPa; 气帘气压力;0.241MPa; 辅助气压力:0.344MPa; g 离子源温度:400C; h 定性离子对,定量离子对碰撞气能量和去簇电压,见表2 表23种聚醒类的定性离子对定量离子对、,碰撞气能量和去簇电压 定性离子对/m/2) 定量离子对/m/2) 碰撞气能量/ev 去簇电压/ V 称 母离子/子离子) (母离子/子离子 72 692.9/479.2 230 692.9/479.2 莫能菌素 72 692.9/461.2 230 220 73.1/431.2 2 盐霉素 773.1/431.2 773.1/513.3 67 200 787.5/431.2 70 220 甲基盐霉素 787.5/431.2 67 200 787.5/513.3 7.4 3 液相色谱-串联质谱测定 用混合标准工作液(4.11)分别进样,以峰面积为纵坐标,工作液浓度(ng/mL)为横坐标 绘制标准 工作曲线,用标准工作曲线对样品进行定量,样品溶液中3种目标化合物的响应值均应在仪器测定的线 性范围内 在上述色谱条件和质谐条件下,3种目标化合物的参考保留时间见表3 3种目标化合物标 准品的总离子流图和选择离子流图参见附录A中的图A.1、图A.2 表33种聚醒类标准品的参考保留时间 名 称 保留时间/min 莫能菌素 3,48 盐霉素 4.44 5.17 甲基盐霉素 结果计算 试样中每种聚酗类残留量按式(1)计算 1000 x=cx 1000
GB/T20364一2006 式中 -试样中被测组分残留量.单位为微克每千克(g/ke) -从标准工作曲线得到的被测组分游液浓度,单位为纳克每毫升(ng/'ml) 试样溶液定容体积,单位为毫升(mL); 试样溶液所代表的质量,单位为克(g) 7 注;计算结果应扣除空白值 检出低限(LoD)和定量限(L0Q 9.1检出低限LOD) 莫能菌素、盐霉素、甲基盐霉素为1.0g/kg 9.2定量限(L0Q) 莫能菌素、盐霉素、甲基盐霉素为5.04g/kg 10精密度 精密度数据按GB/T6379的规定制定,其重复性和再现性的值以95%的可信度计算 10.1重复性 在重复性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限(r),动物源产品中3种聚 酵类残留含量范围及重复性方程见表3， 如果差值超过重复性限(r),应舍弃实验结果并重新完成两次单个试验的测定 0.2再现性 在再现性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限(R),动物源产品中聚酥类 残留含量范围及再现性方程见表4 表4含量范围及重复性和再现性方程 名 称 含量范围/4g/kg 重复性限r 再现性限R 莫能菌素 5,0l00 广=0.1973十0.1498.r R=0.3169十0.1913.r R=0,4242十0.1524. 盐霉素 -0.3597+0.7367lg 5.0一l00 lgr 甲基盐霉素 5.0l00 广=0.3159十0.1562r lgR=一0.5095+0.8156lg? 注:r为两次测定值的平均值 方法二液相色谱-质谱法 范围 11 本标准规定了动物源产品中莫能菌素,盐霉素2种聚酰类残留量液相色谱-质谱的测定方法 本标准适用于畜、禽肉及肝脏中莫能菌素、盐霉素残留量的测定 12 规范性引用文件 同第2章
GB/T20364一2006 13原理 试样中莫能菌素,盐霉素残留,用异辛烧提取,提取液用硅胶柱净化 液相色谱-质谱仪测定,外标 法定量 14试剂和材料 14.1水;应符合GB/T6682中一级水的规定 14.2异辛烧;分析纯 14.3甲醇:液相色谱级 14.4乙睛;液相色谱级 14.5二氧甲烧;分析纯 14.6甲醇-二氧甲婉(1+9):甲醇、二氧甲婉烧按体积比1:9混匀 14.7无水硫酸钠分析纯,500C灼烧4h,置于干燥器中备用 14.8甲醇-水(13十2);甲醇、水按体积比13:2混匀 4.9莫能菌素、盐霉素标淮品,纯度>99%. 14.10莫能菌素,盐霉素标准储备溶液的制备;2o0闪g/ml. 分别准确称取适量的莫能菌素,盐霉素标 准品,用甲醇配制成200ug/mL的标准储备溶液(4C避光保存可使用6个月 14.11 莫能菌素、盐霉素标准中间溶液的制备:104g/mL 分别准确量取适量的标准储备溶液 14.10),用甲醉-水14.8)稀释成104g/ml的标准中间溶液(4C避光保存可使用1个月. 14.12莫能菌素、盐霉素混合标准工作溶液的制备准确量取适量的标准中间溶液(14.11),用甲醇-水 14.8)配制成浓度系列分别为莫能菌素:50.0 ng/mlL、100.0ng/mlL、200.0 0ng/ml、400.0ng/ml 1000.0ng/mL;盐霉素;25ng/ml,50ng/ml、100ng/mL200ng/ml500ng/ml的混合标准工作溶 液(4C避光保存可使用1周 莫能菌素,盐霉素标准添加亲液;1004g/ml 准确量取适量的莫能菌素,盐霉素混合标准中间 14.13 溶液(14.11),用甲醇-水(l4.8)稀释成100ng/mL的聚腿标准添加溶液(4C避光保存可使用1周) 15仪器 液相色谱-质谱仪;配有电喷雾离子源 15.1 15.2均质器 15.3涡流混匀器 15. 旋转蒸发仪 5.5同相草取装置 15.6氮吹仪 15.7离心机.转速400r/min 15.8聚四氟乙烯离心管,50ml. 15.9固相萃取硅胶柱.500mg,3mL 15.10移液器,200L、1000L.5000L. 15.11三角烧瓶:50ml 15.12 -次性注射式滤器;配有0.45m微孔滤膜 5.13分析天平:感量0.1m和o.01g各一台 15.14样品瓶;2mL,带聚四氟乙烯旋盖
GB/T20364一2006 6试样制备与保存 同第6章 17测定步骤 17.1标准曲线制备 制备混合标准工作溶液(14.12),莫能菌素浓度系列为50.0ng/mL,100.0ng/ml,200.0ng/m、 400.0ng/mL、1000.0ng/ml;盐霉素浓度系列为25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL,.200ng/mL、 ng/mL(分别相当于测试样品中含有10.Og/kg、.20.0g/kg,0.0g/kg.80.0g/kg、.200.0g/ke 5001 的莫能菌素和54g/kg、104g/kg,204g/kg,40g/kg、1004g/kg的盐霉素) 按17.4的规定测定并 制备标准曲线 17.2提取 同7.2. 17.3净化 净化步骤同7.3,测定仪器改为液相色谱-质谱仪测定 17.4测定 7.4.1液相色谱条件 色谱柱:C柱(可用IntersilODs-3,粒径5Am,柱长150mm,内径4.6mm或相当者); a b)流动相;乙情十0.1%甲酸溶液(90十10); 流速,0.8mL/min c d柱温:35C; e 进样量;10L 17.4.2质谱条件 离子源电喷雾离子源， a b 扫描方式;正离了扫描 检测方式:选择离子监测; 毛细管电压:3000V 干燥气流量;8.0L/min; 喷嘴压力;35Pa 干燥气温度:350C; g h)定性离子,定量离子,碰撞电压和增益,见表5 表5莫能菌素,盐霉素的定性离子,定量离子,碰撞电压和增益 增益 称 定性离子对/(m/z) 定量离子对/m/z2) 碰撞电压/八V 693.5 5 莫能菌素 693. 100 242.5 773.6 盐霉素 773.6 100 242.5 17.4.3液相色谱/质谱测定 用混合标准工作液(14.12)分别进样,以峰面积为纵坐标,工作液浓度(ng/mL)为横坐标 绘制标 准工作曲线,用标准工作曲线对样品进行定量,样品溶液中莫能菌素、盐霉素的响应值均应在仪器测定
GB/T20364一2006 的线性范围内 在上述色谱条件和质谱条件下,莫能菌素和盐霉素的参考保留时间见表6 莫能菌素、 盐霉素标准品的选择离子流和总离子流图参见附录A中的图A.3,相应的质谱图参见附录A中的 图A.4、图A.5 表6莫能菌素、盐霉素药物参考保留时间 保留时间/nin 名 称 莫能菌素 17.0 盐霉素 20.4 18结果计算 同第8章 19检出低限(LoD)和定量限(Loo 19.1检测低限(IoD) 莫能菌素为1.0p&/ke;盐霉素为2.0pR/k 9.2定量限(Loo) 莫能菌素为5.04g/kg;盐霉素为10.0ug/kg 精密度 20 精密度数据按GB/T6379的规定制定,其重复性和再现性的值以95%的可信度计算 20.1重复性 在重复性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限(r),动物源产品中莫能菌 素、盐霉素含量范围及重复性方程见表7 如果差值超过重复性限(r),应舍弃实验结果并重新完成两次单个试验的测定 20.2再现性 在再现性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限(R),动物源产品中莫能菌 素、盐霉素含量范围及再现性方程见表7 表7含量范围及重复性和再现性方程 名 称 含量范围(g/kg 重复性限r 再现性限R 莫能菌素 5~l00 lgr=一0.6087十0.863olgr R=0.4285十0.l456.r 盐霉素 gr=一0.6214+0.8874lg" l0200 R=0.5537+0.1287." 注，r为两次测定值的平均值
GB/T20364一2006 附 录 A 资料性附录 标准品串联质谱图和单级质谱图 4.44 只 6.0e5 5.0e5 4.0e5 3.48 3.0e5- 2.0e5 1.Oe5 /min 莫能菌素 -3.48min; 盐霉素 -4.44nnmin; 甲基盐霉素 -5.17min 图A.13种聚醒类标准品串联质谱总离子流图 3.48 1.6es5 莫能菌素692.9/479.2 1.4o5 1.2e5 1.0e5 8.Oe4 6.0e4 4.0e4 “3 /min 莫能菌素 a 4.44 盐减素773.1/413.2 6.0e5- 5.0e5 4.0e5 3.0e5 2,0e5 1.0o 0.0 /min 盐霉素 图A.23种聚醒类标准品串联质谱选择离子流图
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